高效液相色谱法测定香菊胶囊中蒙花苷含量

孙 菲，孙 欣，金 荣

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江 鸡西 158100）

高效液相色谱法测定香菊胶囊中蒙花苷含量

孙 菲，孙 欣，金 荣

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江 鸡西 158100）

目的 建立测定香菊胶囊中蒙花苷含量的反相高效液相色谱（RP－HPLC）法。方法 色谱柱为Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm× 4．6 mm，5 m），流动相为乙腈－甲醇－0．5%冰醋酸溶液，线性梯度洗脱，检测波长为334 nm，柱温为30℃，进样量为10 L，流速为1．0 mL／min。结果 蒙花苷进样量在4．266×10－2～8．532×10－1g（r＝1．000 0，n＝7）范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为98．90%，RSD为0．54%（n＝6）。结论 该方法操作快速、简便，结果准确、可靠，可用于香菊胶囊的质量控制。

香菊胶囊；含量测定；蒙花苷；高效液相色谱法

香菊胶囊由化香树果序（除去种子）、夏枯草、野菊花、黄芪、辛夷、防风、白芷、甘草、川芎9味中药组方，具有辛散祛风、清热通窍的功效[1]，用于急、慢性鼻窦炎及鼻炎，疗效显著[2]。现行质量标准仅有薄层色谱鉴别和黄芪有效成分黄芪甲苷的含量测定，无对处方臣药野菊花的质量控制。2010年版《中国药典（一部）》[3]规定，野菊花中蒙花苷的含量不能低于0．80%，蒙花苷为野菊花中的有效成分，其含量可作为香菊胶囊中野菊花质量优劣的评定依据。目前，尚无文献报道香菊胶囊中蒙花苷的含量测定方法，故本研究中建立了香菊胶囊中蒙花苷的含量测定方法，其专属性强，结果准确、可靠，可为香菊胶囊中野菊花的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1．1 仪器

HP1100型高效液相色谱仪（四元泵，紫外检测器，自动进样）；HP1100工作站；XSE 205型电子天平(Mettler Toledo公司)；JAC－40型超声波清洗器（功率为100 W，频率为40 kHz，济宁市奥波超声电器有限公司）；UV－2550型紫外－可见分光光度计（苏州岛津公司）。

1．2 试药

蒙花苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为11528－200606，含量为98．3%）；市售香菊胶囊（山东步长制药有限公司，批号分别为 140416，140418，140312）；水为纯化水，其他试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：AgilentZorbax SB－C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；流动相：乙腈（A）－甲醇（B）－0．5%冰醋酸溶液（C），按表1中梯度洗脱程序进行线性梯度洗脱；检测波长：334 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL；流速：1．0 mL／min。蒙花苷与相邻色谱峰之间的分离度大于1．5，理论板数以蒙花苷色谱峰计不低于9 000。

表1 流动相线性梯度洗脱程序表

2．2 溶液制备

对照品溶液：精密称取五氧化二磷干燥24 h以上的蒙花苷对照品10．85 mg（含量98．3%），置10 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声使其完全溶解，放置冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，得质量浓度为1 040 μg／mL的对照品贮备液。

供试品溶液：取香菊胶囊10粒，倾出内容物，精密称定，精密称取相当于本品3粒质量，置50 mL容量瓶中，加甲醇35 mL，超声提取30 min（功率为100 W，频率为40 kHz），放置至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，备用。

阴性对照品溶液：按香菊胶囊的处方，不加野菊花药材，依法制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：分别取2．2项下3种溶液适量，按拟订色谱条件分别进样，色谱图见图1。结果，阴性样品溶液对供试品溶液无干扰，表明该方法专属性强。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密量取对照品贮备液2 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得质量浓度为42．66 μg／mL的蒙花苷对照品溶液，按拟订色谱条件，分别进样1，2，4，8，10，16，20 μL，记录蒙花苷色谱峰面积。以峰面积（Y）对应进样量（X，μg）进行线性回归，得蒙花苷回归方程 Y＝1．019×103X－6．223×10－1，r＝1．0000（n＝7）。结果表明，蒙花苷进样量在4．266×10－2～8．532×10－1μg范围内与峰面积良好线性关系。

精密度试验：精密量取对照品贮备液适量，稀释25倍，得质量浓度为42．66 μg／mL的对照品溶液，连续重复进样5次，每次10 μL。结果蒙花苷峰面积的 RSD为0．6%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取市售样品适量，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件，设定自动进样器，分别于0，1，2，4，10，16，24 h时重复进样。结果蒙花苷峰面积的 RSD为0．8%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验：取香菊胶囊样品（批号为140416），按2．2项下方法平行制备供试品溶液5份，按拟订色谱条件分别进样并记录色谱峰面积。结果蒙花苷的平均含量为每粒0．788 mg，RSD为0．6%（n＝5），表明该方法重复性较好。

加样回收试验：分别精密称取已知含量香菊胶囊样品（批号为140416）约0．5 g，称取6份，分别置50 mL容量瓶中，精密加入蒙花苷对照品溶液（591．5 μg／mL）各2．0 mL，加甲醇适量，超声提取30 min，静置至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，进样10 μL，记录色谱峰面积，计算回收率。结果见表2。

表2 蒙花苷加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取市售香菊胶囊3批，按2．2项下方法制备供试品溶液，每个批号的供试品平行制备3份，按拟订色谱条件进样测定峰面积，用峰面积外标法计算3批市售样品中蒙花苷的含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n＝3）

3 讨论

3．1 测定波长选择

文献[4－5]报道，蒙花苷检测波长为334 nm，本研究中采用紫外分光光度法，在200～700 nm波长范围内对蒙花苷对照品溶液全波长扫描，结果蒙花苷的最大吸收波长为334 nm，与文献报道相同。

3．2 流动相筛选

本试验中先后考察了2010年版《中国药典（一部）》中野菊花蒙花苷含量测定项下的流动相甲醇－水－冰醋酸（26∶23∶1）[3]、乙腈－水－冰醋酸（25∶73∶2）[4]、甲醇－0．9%冰醋酸（56∶44）[5]、乙腈－甲醇－0．5%冰醋酸溶液分别测定，试验结果表明，乙腈－甲醇－0．5%冰醋酸溶液梯度洗脱分离效果最优。

3．3 提取方法考察

首先，通过试验比较加热回流2 h与超声30 min 2种提取方法的差异，结果表明2种方法无明显差异。其次，文献[4－6]报道了以甲醇或70%乙醇为超声提取溶剂，试验过程中分别考察了以乙醇、70%乙醇、甲醇、50%甲醇、75%甲醇溶液作溶剂超声提取20，30，35，40 min，结果表明，甲醇稍微优于70%乙醇，远优于其他提取溶剂，且超声30 min能够提取完全。

3．4 对照品溶液制备

蒙花苷对照品具有吸湿性[7]，因而临用前需干燥处理，且注意对照品溶液制备过程中，需仔细观察，确保超声至使其完全溶解。

[1]WS3－161（Z－151）－2001（Z）．国家药品标准·新药转正标准[S]．

[2]王桂安，李 歌，杜 蕾，等．香菊胶囊治疗慢性鼻－鼻窦炎的临床疗效分析[J]．中国医药指南，2013（1）：598－600．

[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：295．

[4]叶 慧．HPLC测定复方瓜子金颗粒中蒙花苷的含量[J]．中国药师，2012，15（9）：1 356－1 357．

[5]郑 芳，李 鹏，李志浩，等．HPLC法测定神农香菊中蒙花苷的含量[J]．中国药师，2010，13（3）：366－367．

[6]卢海霞，乔艳玲，梁春华．高效液相色谱法测定菊明降压丸中蒙花苷[J]．中草药，2010，41（12）：2 002－2 003．

[7]王波涛，林瑞超，鲁 静．RP－HPLC测定野菊花栓中蒙花苷的含量[J]．中成药，2007，29（7）：附9－附11．

Content Determination of Buddleoside in Xiangju Capsules By HPLC

Sun Fei，Sun Xin，Jin Rong
（Jixi Food and Drug Testing Center，Jixi，Heilongjiang，China 158100）

Objective To establish an RP－HPLC method for the content determination of buddleoside in Xiangju Capsules．Methods The chromatogram column was Agilent Zorbax SB－C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）；the mobile phase was acetonitrile－methanol－0．5% glacial acetic acid by gradient elution and the detection wavelength was 334 nm；the flow rate was 1．0 mL／min，the injection volume was 10 μL，the column temperature was 30℃．Results The buddleoside had good linear relationship with the peak area from the range of 4．266×10－2－8．532×10－1μg(r＝1．000 0，n＝7）；the average recovery rate of buddleoside was 98．90%，RSD＝0．54%（n＝6）．Conclusion The method is convenient，quick，accurate and reliable，and can be used for the quality control of Xiangju Capsules．

Xiangju Capsules；content determination；buddleoside；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0072－03

孙菲（1981－），女，副主任药师，主要从事药品检验工作，（电话）0467－6103277（电子信箱）chenlizhu1980＠163．com。

2015－12－10；

2016－01－19)