三七化瘀口服液高效液相色谱指纹图谱的建立

江国华，黄 健，陈淑映

（广东省佛山市中医院，广东 佛山 528200）

三七化瘀口服液高效液相色谱指纹图谱的建立

江国华，黄 健，陈淑映

（广东省佛山市中医院，广东 佛山 528200）

目的 探讨构建三七化瘀口服液指纹图谱的技术要点及检测条件，建立能反映该制剂整体特征的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱质量评价方法，为提高制剂质量稳定性和保证临床用药的安全有效提供依据。方法 色谱柱为Shim－pack VP－ODS柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流动相为（A）乙腈－（B）0．05%磷酸水(pH＝5，梯度洗脱)，流速为1 mL／min，检测波长为203 nm，进样量为10 L。结果 10个不同批次样品的相似度均在0．9～1．0间。结论 该色谱图可作为三七化瘀口服液指纹图谱，用于三七化瘀口服液的质量评价。

三七化瘀口服液；指纹图谱；高效液相色谱法

三七化瘀口服液为我院中医骨伤科的优良验方，由三七和延胡索经醇提浓缩后调配分装而成，具有活血化瘀、消肿止痛、舒筋通经、强身健体的功效，经多年临床实践证明，对跌打损伤、各种血症、痛症等症疗效显著[1－2]。目前，我院制剂中心采用2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB薄层色谱法对三七化瘀口服液的质量进行控制，以三七为对照药材，以三七的活性成分三七皂苷R1和人参皂苷Rg1，Rb1为对照品。质量合格标准为：供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；置紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点。此质量控制方法仅对复方制剂三七化瘀口服液中的主要成分三七进行定性检测，不能反映制剂的全面质量。指纹图谱技术[3－4]是中药材及中成药质量控制的一种新技术。本研究中采用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱法建立了三七化瘀口服液的HPLC指纹图谱，可反映该制剂整体特征的质量，提供整体质量控制依据，从而提高制剂质量的稳定性和保证临床用药的安全有效。

1 仪器与试药

1．1 仪器

LC－100PLUS型双泵高效液相色谱仪(上海五丰科学仪器有限公司)，配有 UV100型紫外检测器，WS100型色谱工作站；KH300E型超声清洗机；BP211D型分析天平。

1．2 试药

甲醇、乙腈(天津四友精细化学品有限公司)均为色谱纯；水为新鲜重精馏水；磷酸(南京化学试剂一厂)为分析纯。延胡索乙素（批号为110726－201213）、人参皂苷Rg1（批号为110703－201128）、人参皂苷Rb1（批号为110704－201122）均为化学对照品，供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供；样品为我院制剂中心自制的不同批次三七化瘀口服液，批号依次为11214171，11214172，11214173，11214181，11214182，11214183，11214191，11214192，11214193，11214201。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Shim－pack VP－ODS柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）－0．05%磷酸水（B），pH＝5，线性梯度洗脱见表 1；流速为 1 mL／min；检测波长：203 nm；进样量：10 μL。所有组分均在90 min内洗脱出柱。

2．2 溶液制备

对照品溶液：精密称取4种对照品适量，加甲醇制成每1 mL含延胡索乙素0．05 mg、人参皂苷Rg10．1 mg、人参皂苷Rb10．1 mg的溶液，经0．45 μm有机系微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

表1 流动相线性梯度表

供试品溶液：精密量取三七化瘀口服液5 mL，置50 mL具塞锥形瓶中，经真空干燥后，精密加入甲醇25 mL，精密称定，超声10 min，放冷，精密称定，用甲醇补足减失质量，滤过，精密量取1 mL续滤液，加入5 mL定量瓶中，用甲醇定量至5 mL，再经0．45 μm有机系微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2．3 方法学考察

稳定性试验：取同一样品溶液（编号1），分别于0，2，4，8，16，24 h时进样测定，考察相似度的一致性。利用2004年A版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度评价，结果的相似度均值为0．982，相对保留时间和相对峰面积的 RSD为0．16%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

精密度试验：取同一样品溶液（编号1），连续进样6次，考察相似度的一致性。利用2004年A版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度评价，结果的相似度均值为0．994，相对保留时间和相对峰面积的RSD为0．13%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批次样品（编号1），按供试品溶液的制备方法平行制备6份进样测定，考察相似度的一致性。利用2004年A版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度评价，结果的相似度均值为0．996，相对保留时间和相对峰面积的 RSD为0．14% (n＝6)，表明方法重复性良好。

2．4 指纹图谱测定

将10批样品分别按2．2项下方法制备供试品溶液，依次进样，按拟订色谱条件测定，记录色图谱，见图1。并在相同条件下测定对照品溶液，见图2。

图2 对照品溶液HPLC指纹图谱全图

2．5 指纹图谱分析与评价

2．5．1 共有峰标定

根据10批次供试品结果，标定共有指纹峰12个，共有峰面积大于总峰面积的90%，其中4，5号峰由于未能达到基线分离，故两者的峰面积合计为一峰。而3号峰稳定，分离度良好，且为最强峰。故以3号峰作参照峰，其余各共有峰的相对保留时间、相对保留峰面积以及标准偏差见表2和表3。

2．5．2 相似度评价

将10批次供试品测定数据结果导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版软件系统进行谱峰差异性评价和整体相似度评价，并计算其共有模式，见图3和表4。

表2 “三七化瘀口服液”指纹图谱共有峰相对保留时间、相对峰面积及差异性比较

表3 三七化瘀口服液10批次样品各共有峰相对峰面积

图3 三七化瘀口服液共有模式均值图（信号放大1倍）

3 讨论

中药制剂质量的优劣直接影响到临床用药的安全性和有效性，中药制剂质量控制是以中医药理论为指导，应用现代仪器分析手段和方法研究分析中药制剂的质量，对于保障临床用药安全、合理、有效有重要意义。医院制剂具有针对性强、供应及时、方便患者、需求量小等特点，是工业制剂的有益补充，但由于受到生产工艺、设备等限制，医院制剂的质量稳定性往往不及正规制药企业的产品。因此，医院制剂中心应加强制剂的质量控制，通过制订科学的质量标准来控制制剂质量，有利于制剂质量稳定、保证使用安全，也有利于制剂工艺流程的改进。

本研究中采用HPLC法构建三七化瘀口服液的指纹图谱，专属性强，重复性好，操作简便，符合国家规定[5]的要求，能反映该制剂整体特征的质量，可作为三七化瘀口服液质量评价的依据。

[1]钟广玲，陈志维．陈渭良骨伤科临证精要[M]．北京：北京科学技术出版社，2001：109．

[2]沈楚龙，陈志维．复方三七口服液治疗创伤早期86例[J]．新中医，2006，38（10）：81．

[3]任 非，智丽敏，付 颖，等．中药指纹图谱色谱技术及其在质量控制中的应用与研究[J]．河北医药，2010，32（21）：3 075－3 078．

[4]曹 玲，王志刚，王连芝，等．色谱法在中药指纹图谱研究中的应用 [J]．中国当代医药，2012，19（1）：16－17．

[5]国家药品监督管理局．关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》的通知[J]．中成药，2000，22（10）：671．

HPLC Fingerprints of Sanqi Huayu Oral Liquid

Jiang Guohua,Huang Jian，Chen Shuying
（Foshan Traditional Chinese Medicine Hospital，Foshan，Guangdong，China 528200）

Objective To investigate the fingerprinting techniques and detection conditions of Sanqi Huayu Oral Liquid，build an HPLC fingerprint quality evaluation method to reflect the overall characteristics of the preparation in order to improve the quality of preparation and stability，and provide basis for the safety and effectiveness of clinical medication．M ethods The chromatographic column was Shim－packVP－ODS column（250 mm×4．6 mm，5 μm）；mobile phase was（A）acetonitrile－（B）0．05% phosphoric acid water（pH＝5，gradient elution），the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was 203 nm；the injection volume was 10 μL．Results By calculating the similarity，the similarity of the 10 batches of samples were between 0．9－1．0．Conclusion The chromatographic diagram can be used as the fingerprint of Sanqi Huayu Oral Liquid，and to evaluate its quality．

Sanqi Huayu Oral Liquid；fingerprint；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0069－04

江国华，男，大学本科，主管中药师，研究方向为医院制剂工艺及质量控制，（电子信箱）1966325251＠qq．com。

表4 建有共有模式的10批次三七化瘀口服液的均值相似度数据表

S10 0．978 0．974 0．972 0．974 0．863 0．868 0．898 0．978 0．869 1．000 0．973样品编号S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10对照指纹图谱S1 1．000 0．996 0．990 0．995 0．857 0．863 0．837 0．997 0．864 0．978 0．975 S2 0．996 1．000 0．994 0．999 0．861 0．862 0．837 0．993 0．865 0．974 0．975 S3 0．99 0．994 1．000 0．996 0．868 0．864 0．841 0．993 0．866 0．972 0．976 S4 0．995 0．999 0．996 1．000 0．862 0．863 0．839 0．995 0．865 0．974 0．976 S5 0．857 0．861 0．868 0．862 1．000 0．989 0．894 0．862 0．991 0．863 0．945 S6 0．863 0．862 0．864 0．863 0．989 1．000 0．898 0．865 0．991 0．868 0．947 S7 0．837 0．837 0．841 0．839 0．894 0．898 1．000 0．841 0．898 0．898 0．912 S8 0．997 0．993 0．993 0．995 0．862 0．865 0．841 1．000 0．865 0．978 0．976 S9 0．864 0．865 0．866 0．865 0．991 0．991 0．898 0．865 1．000 0．869 0．948对照指纹图谱0．975 0．975 0．976 0．976 0．945 0．947 0．912 0．976 0．948 0．973 1．000

2015－10－14)

广东省佛山市卫生局医学科研项目，项目编号：2014135。