一例猪圆环病毒病2型和大肠杆菌混合感染的诊断

杜海燕，陈光丽，荆汝顶，秦保亮，韩俊伟

（1.新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453000；2.新乡市动物卫生监督所）

一例猪圆环病毒病2型和大肠杆菌混合感染的诊断

杜海燕1，陈光丽1，荆汝顶1，秦保亮1，韩俊伟2

（1.新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453000；2.新乡市动物卫生监督所）

猪圆环病毒病以圆环病毒-2型（PCV2）为主要病原，一般于断奶后2～3d或1w发病，急性发病猪群中，病死率可达10%。大肠杆菌主要是一种条件性致病菌，其中以仔猪黄白痢最为常见。2016年3月份，某猪场1月龄仔猪突然发病，病死率较高，送检病猪3头进行病因诊断。为了解该规模化猪场疫病的感染状况，通过该猪场猪群发病情况及剖检病理观察，初步判断该猪场发病猪疑似为猪瘟病毒、猪圆环病毒2型或细菌感染，通过进一步分子生物学检测及细菌分离培养与鉴定，确诊该猪场发病猪为猪圆环病毒2型和大肠杆菌混合感染。现将诊断结果报道如下：

1 发病情况

该猪场采取自繁自养方式，共存栏生猪230头，其中保育猪65头，病死率达20%左右。主要表现为精神沉郁，体温升高，被毛蓬乱，呼吸急促，腹泻，消瘦，体表淋巴结肿大，病死猪明显消瘦，贫血、可视黏膜黄疸。

2 剖检病理变化

对送检3头1月龄病死猪进行剖检，结果均可见胃肠胀气，肝脏黄染，且肝脏有明显坏死灶；脾脏肿大，边缘有丘状突起，并有黑色梗死；肺坚硬出现实质性病变；肾脏针尖状出血点；心包心耳出血；肠及肠系膜出血，肠系膜淋巴结肿大。

3 猪圆环病毒-2型病毒核酸检测

3.1 DNA提取

分别取病猪病理变化明显的淋巴结、脾脏和肺脏组织研磨，反复冻融3次，8000rpm离心10min，取上清液采用离心柱提取法提取病料DNA样本。

3.2 猪圆环病毒荧光PCR扩增

利用猪圆环病毒-2型病原核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）对待检病料进行检测。扩增体系根据试剂盒说明进行。标记荧光基团种类报告基团FAM，淬灭基团TAMRA。扩增反应条件：94℃2min，后94℃30 s-55℃45s（采集荧光），40个循环。

3.3 结果分析判定

反应结束后，Ct值在40以上的为阴性，Ct值小于35的为阳性，Ct值在35-40之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验后，Ct值仍在35-40之间，判断为阳性，没有荧光值增长为阴性。结果见下图。

图：圆环病毒-2型病原核酸检测结果

根据荧光PCR扩增结果可知，阳性对照Ct值18.22，待检样品Ct值是26.57，出现特异性荧光曲线，阴性对照未出现特异性荧光曲线。结果显示送检病料检测到猪圆环病毒-2型病原核酸，表明病死猪感染猪圆环病毒-2型。

4 细菌学检验

4.1 细菌的分离培养

分别取肝、肾及腹腔积液接种于麦康凯培养基，置于37℃培养箱中培养12～24h，观察在麦康凯培养基上长出粉红色菌落，经染色镜检为革兰氏阴性短杆菌，可判定为大肠杆菌。

4.2 药敏试验结果

取上述麦康凯培养基上细菌的纯培养物，选择常用的抗菌素进行药物敏感试验，结果见下表。

表 药敏试验结果

通过对大肠杆菌分离培养物进行药敏试验，发现该菌对庆大霉素敏感，对环丙沙星、卡那霉素、头孢噻呋、舒坦西林低敏，而菌必治、头孢氨苄、利福平则耐药。可选择对该致病菌抑制效果较好的庆大霉素进行治疗，另外也可使用环丙沙星、卡那霉素、头孢噻呋和舒坦西林进行相应治疗。

5 讨论

猪圆环病毒-2型在我国健康猪群中已普遍发生，表现为流行范围广、混合感染严重、血清阳性率高，尤其种猪抗体阳性感染率最高，PCV-2的感染会造成动物免疫抑制，再感染其他病原机会增大，猪群易受到猪瘟、伪狂犬病、大肠杆菌病等的侵袭。猪圆环病毒-2型导致的仔猪断奶后多系统衰竭综合征的源头在种猪上，而发病的一般是仔猪，母猪通过多种途径排毒传染哺乳仔猪，造成仔猪的早期感染。由此表明该猪场可能存在猪圆环病毒的隐形感染，通过采取综合性防治措施来预防该病。

目前疫苗免疫主要依靠进口苗，导致生产成本较高。因此主要靠加强饲养管理，减少应激，控制继发感染以降低损失。严格采取“全进全出”方式，清除带毒种猪并净化，加强引种检疫，严防该病进场，做好消毒措施，尤其保育猪圈清空后，消毒晾晒1w后再引入猪群。一旦发生猪圆环病毒感染，易并发细菌性感染，治疗时可配合广谱抗菌药物或进行药敏试验选择敏感性抗菌药物，减少并发感染。

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1004-5090（2016）11-0041-02

2016-09-10）