液体检材中γ-羟基丁酸的Smith颜色反应快速检测方法*

王蔚昕，黄　星，廉　哲

（公安部物证鉴定中心，北京100038）



液体检材中γ-羟基丁酸的Smith颜色反应快速检测方法*

王蔚昕，黄星，廉哲

（公安部物证鉴定中心，北京100038）

摘要：本文对液体检材中γ-羟基丁酸的Smith颜色反应检测方法进行了系统研究。在考察Smith试剂稳定性与专属性、颜色反应检测限、复杂液态基质对颜色反应结果影响的基础上，建立了液体检材中γ-羟基丁酸的Smith颜色反应快速检测方法。该检测方法灵敏度较高，专属性较好，检测限可达5mg·mL-1。

关键词：γ-羟基丁酸；液体检材；快速检测；Smith颜色反应

GHB（γ-羟基丁酸）是一种强效、快速的中枢神经系统抑制剂，能同时作用于两种类型受体。一方面，它能够刺激神经，使心血管快速扩张，引起头晕、心悸、视力模糊等；另一方面，它又有强烈的镇静、健忘效果。临床显示，口服GHB10mg会产生暂时性记忆丧失，而一次使用达20g就会造成中毒。中毒症状包括恶心、呕吐、头痛、反射作用丧失、失去意识、昏迷甚至死亡，与酒精并用会加剧其危险性。GHB常被用作迷奸药（drug- facilitated sexual assault，DFSA），与MDMA、氯胺酮一起并称为三大“约会强暴药”，与此有关的性犯罪时有发生。其经常被添加到常见的酒类饮品（伏特加、白酒、红葡萄酒、啤酒）或者饮料（橙汁、绿茶、雪碧、可乐）中，给予被害人饮用，达到不法目的。我国已经于2007年将GHB列为一类精神药物管制。GHB合成简单,成本低廉,但黑市价格高昂。在巨大经济利益的驱使下，GHB的贩卖量不断增加，对社会造成的危害日渐严重。

因此，为了快速检测液体检材中GHB成分，控制其被非法滥用，需要一种相对高效、准确的检测方法。目前，针对GHB的颜色反应检测方法原理均为将GHB内酯化成GBL后的双键氧化[1 ]，而当前GBL作为一种应用广泛的香料、医药中间体在我国不受管制。为了规避GBL对GHB检测结果的干扰，降低假阳性结果产生的概率，本实验系统研究了利用Smith试剂对液体检材中GHB成分进行检测的应用情况。

1　实验部分

1.1化学试剂

改良Schweppes试剂：将试剂A（2.0g葡萄糖溶解在20mL水中）和试剂B（2.4g盐酸苯胺溶解在20mL乙醇中）混合并用甲醇稀释至80mL。

溴甲酚绿：将0.03g溴甲酚绿溶解在100mL 80%的甲醇溶液中，用0.1NNaOH调节pH值至7.0。

甲基橙：将0.01g甲基橙溶解在100mL甲醇中，用0.1NNaOH调节pH值至7.0。

Smith试剂：溴甲酚绿溶液与甲基橙溶液等体积混合，混合溶液再与改良Schweppes试剂以3∶1（体积比）的比例混合。

1.2标准样品的制备

称取GBL（γ-丁内酯）标准样品约1g，用20%氢氧化钠调节PH值大于12，振荡5min，用水定容至10mL，配制成100mg·mL-1GHB（钠盐）溶液。移取100mg·mL-1GHB（钠盐）溶液适量，加水逐级稀释成20、10、5、1、0.5mg·mL-1GHB（钠盐）溶液。

1.3操作步骤

1.3.1颜色反应实验分别移取不同浓度GHB标准物质溶液各约0.5mL置于试管中，调节pH值使待测溶液呈中性或弱酸性，再各加入2～3D（≈0.05mL·D-1）Smith试剂，振摇混匀后立刻观察颜色变化情况。移取约0.5mL去离子水置于试管中，加入2～3D（≈0.05mL·D-1）Smith试剂，立刻观察颜色变化情况，作为阴性控制。

1.3.2Smith试剂的稳定性研究

1.3.2.1配制4组Smith试剂，贮存条件见表1。

表1　Smith试剂贮存条件Tab.1 Storage condition of Smith Reagent

1.3.2.2分别考察12个月内各组Smith试剂作用效果随时间变化情况按月配制10mg·mL-1的新鲜GHB标准物质溶液，以保证其自身稳定性。前3个月中，每个月都分别用各组Smith试剂对GHB标准物质溶液进行一次检测，记录检测结果；接下来的6个月中，每2个月进行一次检测，记录检测结果；最后的3个月中，每周进行一次检测，记录检测结果。

1.3.3Smith试剂作为液体检材中GHB快速检测试剂的专属性研究选取办案中常见的易于掺入饮料中的管制药品及掺假剂共27种，分别进行Smith颜色反应实验，记录检测结果。

1.3.4检材基质对颜色反应实验结果影响的研究选取四种乙醇含量不同的酒类饮品（伏特加、白酒、红葡萄酒、啤酒），一种果汁饮料（橙汁），一种茶类饮料（绿茶），两种碳酸饮料（雪碧、可乐），分别测定其PH值，并加入适量100mg·mL-1的GHB标准物质溶液配制成10mg·mL-1的GHB饮料溶液。以相应空白饮料为阴性对照，分别进行Smith颜色反应实验，记录检测结果。

2　结果与讨论

2.1颜色反应结果

如表2所示，当GHB溶液浓度低于5mg·mL-1，已经观察不到明显的特征颜色变化。由于快速颜色反应须满足肉眼清晰可辨的要求，本实验将GHB 的Smith颜色反应检测限定为5mg·mL-1。

表2　颜色反应结果Tab.2 Result of color reaction

2.2Smith试剂稳定性研究结果

如表3所示，无论是否避光保存，在室温下储存的Smith试剂在4个月后逐渐失效，而在低温下储存的Smith试剂在8个月后依然有效。因此，为了保证实验结果的可靠性，建议Smith试剂在低温下保存，并且保存期尽可能不要超过半年。

表3　Smith试剂稳定性研究结果Tab.3 Stability of Smith Reagent

2.3Smith试剂专属性研究结果

如表1～4所示，Smith试剂对NaOH溶液呈强阳性反应，对可卡因、盐酸海洛因、烟酰胺及甲丙氨酯呈弱阳性反应，对GHB类似物、其它常见管制药品及添加剂均呈阴性反应。

表4　Smith试剂专属性研究结果Tab.4 Specificity of Smith Reagent

2.4检材基质对颜色反应实验结果的影响

如表1～5所示，当GHB浓度为10mg·mL-1时，除红葡萄酒外，Smith试剂对以其余饮料、饮品为基质的GHB溶液均呈明显阳性反应。由于红葡萄酒自身颜色较厚重，当GHB浓度大于20mg·mL-1时，GHB红葡萄酒溶液Smith颜色反应现象（即呈现绿色的变化）才能被较明显观察到，红葡萄酒基质对GHB的快速颜色反应有一定干扰。

表5　检材基质对Smith颜色反应结果的影响Tab.5 Impact of liquid matrix on testing result by color reaction

3　讨论

Smith试剂作为GHB的快速颜色反应试剂有其可行性。该颜色反应检测灵敏度较高，专属性较好，但由于Smith试剂对氢氧化钠溶液呈强阳性，在样品前处理过程中需调节pH值使待测溶液呈中性或弱酸性以避免假阳性结果出现。在简单基质中，GHB的检测限可达到5mg·mL-1；在复杂基质中，GHB的检测限可以达到10mg·mL-1，远低于常见市售GHB液体样品的浓度。低温保存下，Smith试剂至少在半年时间内性质保持稳定，反应结果可靠。

参考文献

［1］张绍雨，黄增萍.化学显色法快速筛选饮料及尿液中γ-羟基丁酸（GHB）和γ-丁内酯（GBL）［J］.法医学杂志，2006,22（1）: 55- 57.

Method of screening test for gamma-hydroxybutyrate in liquid sample by Smith reagent*

WANG Wei-xi，HUANG Xing，LIAN Ze
（Material Evidence Identification Center, Ministry of Public Security, Beijing 100038, China）

Abstract：The paper describes the systematic research on screening test for Gamma-Hydroxybutyrate（GHB）in liquid sample by Smith Reagent. It demonstrates the stability and specificity of color reaction test for GHB by Smith Reagent. And it also shows the detection limit of color reaction by Smith Reagent in detection of GHB and the impact of complicated liquid matrix on the result of color reaction test. The method of screening test has high sensitivity and selectivity, and the detection limit of GHB in simple liquid matrix for the method was 5mg·mL-1.

Key words：gamma-hydroxybutyrate；liquid sample；screening test；color reaction by Smith Reagent

作者简介：王蔚昕（1983-），女，助理研究员，医学硕士，主要从事毒品分析与鉴定工作。

基金项目：公安部应用创新计划项目（2012YYCXGAES116）

收稿日期：2015- 09- 07

中图分类号：D919.1

文献标识码：A

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tq. 20160121