Girdin、Bim蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达及其与临床病理的相关性

李伟

(中国人民解放军251医院病理科，河北 张家口 075000)

Girdin、Bim蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达及其与临床病理的相关性

李伟

(中国人民解放军251医院病理科，河北 张家口 075000)

目的 探讨Girdin、Bim蛋白在儿童肾母细胞瘤和正常组织中的表达及其与临床病理因素的关系，并进一步分析两者之间的相关性。方法收集2000年1月至2009年12月60例住院患者的肾母细胞瘤及肾母细胞瘤旁正常组织，应用免疫组织化学(EnVisionTM)法分别检测Girdin、Bim蛋白在肾母细胞瘤和正常组织中的表达情况，数据经统计软件SPSS17.0分析检验。结果Girdin蛋白在肾母细胞瘤、正常组织中的阳性表达率分别为68.33% (41/60)、46.67%(28/60)，两组之间表达差异有显著统计学意义(χ2=5.76，P＜0.01)；Bim蛋白在肾母细胞瘤、正常组织中的阳性表达率分别为21.67%(13/60)、78.33%(47/60)，两组之间表达差异有显著统计学意义(χ2=38.53，P＜0.01)；肾母细胞瘤组织中Girdin蛋白的表达与肿瘤直径、组织学形态、临床分期、淋巴结转移有关(P＜0.05)，但与性别、年龄、肿瘤位置无关(P＞0.05)；肾母细胞瘤组织中Bim蛋白的表达与肿瘤直径有关(P＜0.05)，但与性别、年龄、肿瘤位置、组织学形态、临床分期、淋巴结转移无关(P＞0.05)；肾母细胞瘤组织中Girdin蛋白的表达与Bim蛋白表达呈负相关(r=-0.59，P＜0.01)。结论肾母细胞瘤组织中Girdin、Bim蛋白的异常表达均与肿瘤直径有关，这表明检测两者有利于判断肿瘤细胞的增殖能力。

肾母细胞瘤；Girdin蛋白；Bim蛋白；免疫组织化学

儿童期肾脏肿瘤多数来源于肾胚芽组织且多为恶性肿瘤，其中最常见的为肾母细胞瘤。肾母细胞瘤又称为韦尔姆瘤(Wilm tumor)，占小儿实体瘤的8%，并有一定的家族遗传性[1]，其发病机制与WT基因突变和(或)肾源性剩余有关，前者从基因角度阐述，后者强调胚胎期肾组织，但两者都有相应的局限性。肾母细胞瘤患者预后受多种因素影响，如肿瘤细胞的分化程度、间变改变及浸润转移等。Girdin蛋白是一种新发现的肌动结合蛋白，具有调节细胞增殖及细胞运动的功能，并在多种肿瘤组织中过表达。Bim是促凋亡因子，其在多种恶性肿瘤组织中出现低表达或无表达[2-4]。而有关Girdin、Bim蛋白在儿童肾母细胞瘤中的相关研究未见报道，本研究主要探讨Girdin、Bim蛋白在儿童肾母细胞瘤组织中的表达及与临床病理因素之间的关系，并进一步分析两蛋白之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2000年1月至2009年12月我院住院患者资料60例，并经病理检查明确诊断为肾母细胞瘤。其中男性32例，女性28例；患者年龄1～10岁，平均3岁，其中≥3岁者29例、＜3岁者31例。肿瘤直径≥5 cm者39例、＜5 cm者21例；肿瘤部位：位于肾上极18例、肾中极26例、肾下极16例；组织学形态：以胚芽组织为主者7例、以间叶成分为主者12例，以上皮成分为主者6例，以混合成分为主者35例；临床分期：Ⅰ期22例、Ⅱ期20例，Ⅲ期14例、Ⅳ期4例；淋巴结转移者26例，无转移者34例。同时选取肾母细胞瘤旁3 cm处正常组织作为对照组。

1.2 试剂和方法 浓缩型Girdin兔抗人单克隆抗体和即用型Bim兔抗人单克隆抗体及其相关配套试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术有限公司。稀释度按1:100，免疫组化染色采用EnVision两步法，操作步骤参照说明书进行。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗制作阴性对照。

1.3 结果判断 Girdin蛋白阳性表达判断标准参考文献[5]，细胞染色结果判定由中国人民解放军251医院病理专家进行双盲评估，并规定总得分≤2分为阴性、＞2分为阳性。Bim蛋白着色于细胞浆，可表现为棕黄色、黄色或淡黄色染色，其判断标准参考文献[10]。

1.4 统计学方法 采用统计软件SPSS17.0分析处理相关数据，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Spearman检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Girdin、Bim蛋白在肾母细胞瘤组织和正常组织中的表达 Girdin蛋白在60例肾母细胞瘤中阳性表达41例，阴性表达19例，阳性率为68.33%；在60例正常组织中阳性表达28例，阴性表达32例，阳性率为46.67%，两组之间表达差异有统计学意义(χ2=5.76，P＜0.05)；Bim蛋白在60例肾母细胞瘤中阳性表达13例，阴性表达47例，阳性率为21.67%；在60例正常组织中47例阳性表达，阳性率为78.33%，两组之间表达差异有显著统计学意义(χ2=38.53，P＜0.01)。

2.2 Girdin、Bim蛋白的表达与肾母细胞瘤临床病理因素的关系 Girdin蛋白的表达与肿瘤直径、组织学形态、临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05)，而与患者性别、年龄及肿瘤位置无关(P＞0.05)；Bim蛋白的表达只与肿瘤直径有关(P＜0.05)，而与患者性别、年龄及肿瘤位置、组织学形态、临床分期及淋巴结转移无关(P＞0.05)，见表1。

表1 Girdin、Bim蛋白的表达与肾母细胞瘤临床病理因素的关系

2.3 肾母细胞瘤组织中Girdin、Bim蛋白表达之间的相关性 肾母细胞瘤组织中Girdin、Bim蛋白同时阳性表达共2例，同时阴性表达共8例；Girdin阳性表达而Bim阴性表达共39例，Girdin阴性表达而Bim阳性表达共11例，经相关性Spearman检验显示，Girdin、Bim蛋白之间呈负相关(r=-0.59，P=0.00＜0.01)。

3 讨 论

肾母细胞瘤是儿童常见的恶性肿瘤之一。目前，肾母细胞瘤主要的治疗方案是手术、放疗及化疗等综合治疗。尽管这一定程度上缓解了患者的病情，但瘤细胞浸润转移仍是治疗无效或不佳的原因。趋化因子受体4(CXCR4)及血管内皮生长因子(VEGF)、细胞凋亡抑制基因B淋巴瘤细胞-2(bcl-2)、细胞周期蛋白D1等异常的表达与肾母细胞瘤细胞浸润转移的机制相关[6-8]。研究显示，Girdin蛋白是一种含有1 870个氨基酸、相对分子质量为(220～250)×103的肌动结合蛋白，其结构由一个N末端的结构域、中心的卷曲螺旋结构域及一个C末端结构域构成，前两者结构域有利于二聚体的形成，C末端结构域包含Akt磷酸化位点和肌动蛋白结合位点，这些结构的异常有助于Girdin蛋白参与肌动蛋白骨架的重构，进而影响细胞的运动、肿瘤血管的生成及自我吞噬的功能[9]。王敏等[10]发现Girdin蛋白在胆管癌组织中的表达高于癌旁组织，其表达水平与淋巴结转移及远处转移呈正相关，而与年龄、性别等因素无关。李智慧等实验结果显示，小RNA干扰技术能有效沉默恶性胶质瘤细胞株×LN229中的Girdin表达，其表达水平的降低也导致瘤细胞增殖能力的下降、非定向运动能力的减弱及侵袭能力的下降，因而推测，Girdin蛋白的表达与瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力有关[11]。

本实验结果显示，Girdin蛋白在肾母细胞瘤组织中的过表达高于正常组织，可见其异常表达一定程度上参与瘤变的发生；进一步分析发现，肿瘤直径越大、组织学形态越原始、临床分期越高、有淋巴结转移组中Girdin蛋白的表达高于相应组织，这也说明Girdin蛋白的过表达不仅反映了瘤细胞的侵袭力和增殖力，而且还体现出瘤细胞骨架的可塑性，特别是Girdin在胚芽组织中的表达远远高于其他组织，因而推测，Girdin的过表达还与肿瘤组织的分化程度有关。其机制可能是瘤细胞过表达Girdin，导致瘤细胞肌动蛋白骨架重构，促进了细胞迁移，引起肿瘤细胞的浸润和扩散，同时磷酸化蛋白激酶B，促进细胞的增殖。

促凋亡蛋白Bim与凋亡抑制蛋白bcl-2同属于BCL-2家族，但两者有着完全相反的细胞调节作用，两因子之间的平衡维持着细胞内环境的稳定，如这种平衡被打破，就会引起细胞功能的改变，进而演变为肿瘤的形成。耿敬姝等[12]研究结果显示，大肠癌组织Bim蛋白低表达、Bcl-2蛋白高表达，两者的异常表达均与浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关。李妍等[13]。本实验结果显示，Bim蛋白在肾母细胞瘤中低表达，在正常组织中高表达，可见Bim蛋白的缺失或低表达参与了肾母细胞瘤的形成发展；实验数据还显示，Bim蛋白的低表达与肿瘤直径有关，而与其他病理因素无关，这表明瘤细胞的凋亡能力降低，进而加速了瘤细胞的增殖，但不能反应临床分期及浸润转移。进一步分析Girdin、Bim蛋白之间的关系时发现，Girdin蛋白高表达的肾母细胞瘤组织中Bim蛋白低表达，Girdin与Bim之间的表达呈负相关，因而推测，Girdin的过表达抑制了Bim从其复合体上游离出来进而失去了促凋亡作用，但两者之间的信号传导途径及相关机制还有待进一步研究。

[1]高红,王常林,蔡炜嵩,等.Survivin Caspase-3 mRNA在肾母细胞瘤中的表达及意义[J].中国当代儿科杂志,2004,6(5):381-383.

[2]王玉,杨清,张静.子宫内膜癌组织中Bim蛋白表达及其临床意义[J].中国肿瘤临床,2005,32(2):76-78.

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[5]丁耘峰,平金良,周余人,等.Girdin在乳腺浸润性导管癌中的表达及与E-cadherin、MVD的关系[J].江苏医药,2014,40(3):316-319.

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[7]陈健,高明太,蒋敏,等.血管内皮生长因子和bcl-2在肾母细胞瘤中的表达及意义[J].重庆医科大学学报,2010,35(4):501-503.

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[9]朱明文,孙欣,林方才.Girdin蛋白与恶性肿瘤的相关性研究进展[J].医学综述,2013,19(18):3307-3309.

[10]王敏,王芸,孙亮,等.Girdin蛋白在胆管癌组织中的表达及意义[J].肝胆外科杂志,2013,21(5):379-381.

[11]李智慧,王静,谷峰,等.Girdin对恶性胶质瘤细胞增殖和运动能力的影响[J].中国肿瘤临床,2013,40(1):8-11.

[12]耿敬姝,王丽春,佟丹丹.大肠癌及癌旁组织中Bim、Bax、bcl-2的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志,2008,24(3):296-300.

[13]李妍,王海,张铎.低浓度紫杉醇通过上调Bim表达诱导HepG2细胞凋亡[J].中国实验诊断学,2012,16(4):594-596.

Expression of Girdin and Bim protein in nephroblastoma of children and its correlation with clinicopathologic parameters.

LI Wei.Department of Pathology,the 251stHospital of Chinese PLA,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Girdin and Bim protein in nephroblastoma tissue and normal tissue,and to analyze its relationship with clinicopathologic parameters.MethodsThe expression of Girdin and Bim protein was respectively detected by immunohistochemisty(EnvisionTM)in nephroblastoma tissue and adjacent normal tissue collected from 60 children with nephroblastoma treated in our hospital from January 2000 to December 2009.The data was analyzed by SPSS17.0.ResultsThe positive expression rate of Girdin protein in nephroblastoma tissue and normal tissue was respectively 68.33%%(41/60),46.67%(28/60),with statistically significant difference(χ2= 5.76,P＜0.01).The positive expression rate of Bim protein in nephroblastoma tissue and normal tissue was respectively 21.67%%(13/60),78.33%(47/60),with statistically significant difference(χ2=38.53,P＜0.01).The positive expression of Girdin protein in nephroblastoma tissue was related to tumor diameter,histological morphous,clinical stage,and lymphaden metastasis(P＜0.05),but not to gender,age and tumor site(P＞0.05).The positive expression of Bim protein in nephroblastoma tissue was related to tumor diameter(P＜0.05),but not to gender,age and tumor site,histological morphous,clinical stages,lymphaden metastasis(P＞0.05).The expression of Girdin protein was negatively correlated with the expression of Bim protein in nephroblastoma tissue(r=-0.59,P＜0.01).ConclusionThe abnormal expression of Girdin and Bim protein in nephroblastoma tissue of children is related to tumor diameter,which indicates that testing both is useful to judging reproductive activity of tumor cell.

Nephroblastoma;Girdin protein;Bim protein;Immunohistochemisty

R737.11

A

1003—6350（2016）12—1939—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.12.014

2015-07-19)

李伟。E-mail：liwei-324@163.com