浅谈薄层层析法检测板蓝根所含靛玉红、靛蓝的方法

朱玉琛

哈药集团世一堂制药厂 150000

浅谈薄层层析法检测板蓝根所含靛玉红、靛蓝的方法

朱玉琛

哈药集团世一堂制药厂 150000

目的：应用薄层层析法对于板蓝根所含靛玉红、靛蓝的薄层色谱进行研究。方法：应用硅胶G板进行点样，选择出最适合展开的系统进行实验，同时选择出实验最合适的样品，检测出样品的最低检出量。结果：得出获得靛玉红、靛蓝获得最佳色谱的条件是：以硅胶G板作为吸附剂；同时应用比例为1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯作为实验展开剂。在得出的色谱中，板蓝根中的靛玉红的最低检出量为20μl、靛蓝的最低检出量为12μl。结论：薄层层析方法在检测板蓝根的靛玉红、靛蓝实验中，证明了此方法的有效性，并且测试方法简单、便捷，同时保证了检测结果的有效性。

薄层层析法；板蓝根；靛玉红；靛蓝；硅胶G板；

板蓝根是我国传统的中药，使用年限久远，并且在多年的使用中验证了其疗效。在药典中记载，板蓝根归属于十字花科，是其中的菘蓝属植物中，菘蓝的干燥根，在现阶段的临床应用十分广泛。在本文中，主要应用薄层层析法对于板蓝根中提取的靛玉红、靛蓝进行了分析。通过相同生长环境下成长的板蓝根，进行靛玉红、靛蓝的斑点情况进行分析，并对比标准，来确定板蓝根总的靛玉红、靛蓝是否符合标准要求。薄层层析法可以快速的实现实验的分离，并且进行实验的设备十分简单，相对需要投资更低，实验所需要的时间也更短，在大批量的样品检测中应用效果良好。

1、仪器与试剂

1.1 仪器与试剂

JY1002型电子天平；101-2B型电热烘干箱(江苏海门实验仪器厂)；微量进样器(上海安亭微量进样器厂)。靛玉红标准品(分析纯,中国药品生物制品检定所)；靛蓝标准品(化学纯,北京市旭东化工厂)；羧甲基纤维素纳(上海化学试剂公司)；硅胶G(分析纯,青岛海洋化工有限公司)；氯仿、苯、丙酮、石油醚、乙酸乙酯均为分析纯。

1.2 实验条件

薄层层析板:硅胶G板；展开剂:氯仿-乙酸乙酯(4∶1)、氯仿-丙酮(9∶1)、石油醚-氯仿-乙酸乙酯(1∶8∶1)、苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)、苯-氯仿-丙酮(6∶4∶1)；展开高度:12cm

2、实验方法

2.1 薄层板的制备与活化

以硅胶G按每10g加0.8%CMC-Na30ml置于研钵中研磨均匀,铺板,晾干。于105℃活化1h,冷却后置干燥器中保存。一般可保存2-3d,若放置时间较长,可活化后再使用。

2.2 供试品溶液制备

（1）靛玉红标准溶液的制备。精密称取靛玉红标准品10mg,置于100ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容至刻度,摇匀。配成每毫升含0.1mg靛玉红的标准溶液。避光保存。

（2）靛蓝标准溶液的制备。精密称取靛蓝标准品50mg,置于250ml容量瓶中,加氯仿溶解,定容至刻度,摇匀。配成每毫升含0.2mg靛蓝的标准溶液。避光保存。

（3）样品溶液的制备。①称取菘蓝根 10.00g,置锥形瓶中,加入氯仿30ml,于60℃水浴中温浸1.5h,过滤；滤渣以同样方法再温浸2次,合并三次滤液。回收氯仿,同时浓缩滤液,并用氯仿定容至2ml,摇匀。避光保存。②按照①方法,分别称取不同产地来源菘蓝根19.30g,加入50ml氯仿,温浸时间分别为2h、2h、1.5h,制得样品液。避光保存。

2.3 定性及相对含量测定。

按照薄层色谱法试验,取样品液及标准液各 20μl点于同一硅胶板上,展开剂展开挥干,按样品斑点与标准点的颜色和Rf值是否相同定性,根据斑点的大小深浅概略定量。

2.4 薄层层析展开剂的选择

取对照品溶液和①方法制得的样品溶液各20μl,点于同一硅胶G板上。以氯仿-乙酸乙酯(4∶1)、氯仿-丙酮(9∶1)、石油醚-氯仿-乙酸乙酯(1∶8∶1)、苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)、苯-氯仿-丙酮(6∶4∶1)五种溶剂系统展开。

2.5 样品液中靛玉红、靛蓝的薄层层析最低检出量的确定

（1）样品中靛玉红最低检出量的确定。取②方法制得的样品液,根据溶液颜色,由深至浅选择 S61、S3、S4、S9、S20、S39样品溶液,分别吸取50μl、40μl、30μl、25μl、20μl、15μl、10μl样品溶液点样于同一硅胶G板。同时分别吸取0.1mg/ml的靛玉红标准溶液 4μl、6μl、8μl、10μl、12μl……46μl、48 μl、50μl点样于另一块硅胶G板。将两薄层板放于同一层析缸中展开。

（2）样品中靛蓝最低检出量的确定。按照以上述方法相同的方式,选择S61、S3、S4、S9、S20、S39样品溶液,分别吸取30 μl、25μl、20μl、15μl、12μl、10μl、5μl样品溶液点样于同一硅胶G板。同时分别吸取0.2mg/ml靛蓝标准溶液4μl、6μ l、8μl、10μl、12μl……46μl、48μl、50μl、55μl、60μl点样于另一块硅胶G板。将两薄层板放于同一层析缸中展开。

3、实验结果

3.1 薄层层析法优势分析

薄层层析法只要实验方式，是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。在实验中证明了薄层层析法保持了操作方便性、实验设备简单、显色容易，同时展开速率快；混合物易分离，分它既适用于只有 0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，是十分优秀的实验方式。

3.2 展开剂的选择结果

在进行实验的时候，通过五个相同样品进行实验，最后选择出了薄层层析法实验中，应用比例为4:1的氯仿混合乙酸乙酯作为展开剂的时候，靛玉红的Rf值为0.56，靛蓝的Rf值为0.32；应用比例为 9:1氯仿以及丙酮作为展开剂的时候，靛玉红的 Rf值为0.54，靛蓝的Rf值为0.28；应用比例为比例为1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯为展开剂的时候，靛玉红的Rf值为0.54，靛蓝的Rf值为0.22；应用比例为5:4:1的苯、氯仿以及丙酮作为展出剂的时候，靛玉红的Rf值为0.57，靛蓝的Rf值为0.27。所以经过比较，最适合板蓝根靛玉红、靛蓝的展开剂为比例为1:8:1的石油醚、氯仿以及乙酸乙酯，在试验中展开剂的展距为十二厘米。

3.3 最低检出量的确定结果

五种样品溶剂的点样点通过与标准靛玉红、靛蓝的标准数值对比，就可以发现显色的斑点颜色是由浅至深的一个过程。所以在进行最低检出量的选择时候，选定靛玉红的最低检出量为 20 μl。靛蓝的最低检出量为12μl。在正常情况下，板蓝根中的靛玉红含量相较于靛蓝含量更高，所选定的靛蓝最低检出量更低。在进行实验的时候，为了尽可能的使半点不受到影响，选择点样量的时候要尽可能的少，以保证减少点样时间，避免斑点扩散。靛玉红、靛蓝的比较容易受到氧化，只能在两个小时内保持稳定，所以为了确保实验测量的准确，要尽可能的确保实验的过程和结果确定在两个小时内完成。

4、讨论

薄层层析法主要是应用展开剂、吸附剂以及分离样品来进行操作的方式，这种共同作用的操作方式可以更加有效地实现样品的分离，所以是否可以很快速的找到与实验样品磁场相合的吸附剂，就成为了薄层层析法成功的关键因素。在本次实验中，将进行实验的样品分为了五个相同部分，通过不同的吸附剂与样品的反应，选择出了最适合板蓝根靛玉红、靛蓝的吸附剂，并在最后进行实验的时候选定了硅胶G板作为吸附剂，取得了很好的实验效果。确定了板蓝根中靛玉红、靛蓝的最低检出量。

[1]陈华妮,兰翠玲,刘芳,张金磊.抗肿瘤活性成分靛玉红的研究进展[J].广州化工,2012

[2]徐静.靛玉红衍生物的合成及应用[D].天津理工大学, 2014.

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1672-5018（2016）11-238-01