氯丙嗪协同斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞的增殖抑制作用

张　辉　王海涛　侯丽娜　郭惠玲

(吉林大学第二医院，吉林　长春　130041)



氯丙嗪协同斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞的增殖抑制作用

张辉王海涛侯丽娜1郭惠玲2

(吉林大学第二医院，吉林长春130041)

〔摘要〕目的探讨盐酸氯丙嗪联合斑蝥酸钠维生素B6对人喉癌Hep-2细胞株的增殖抑制作用及其对细胞周期进程的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测单独斑蝥酸钠维生素B6制剂及盐酸氯丙嗪联合斑蝥酸钠维生素B6制剂对Hep-2细胞的增殖抑制率，流式细胞术检测细胞周期进程的变化。结果单独斑蝥酸钠维生素B6组对Hep-2细胞增殖有明显的抑制作用，而斑蝥酸钠维生素B6联合氯丙嗪效果明显高于单独斑蝥酸钠维生素B6组。流式细胞仪结果显示，G1期细胞增多，S期细胞减少，G2/M期细胞相对增多，且细胞凋亡率升高。结论斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞生长、增殖及其对细胞周期进程均有抑制作用，尤其是氯丙嗪联合斑蝥酸钠维生素B6组效果显著。

〔关键词〕氯丙嗪；斑蝥酸钠维生素B6；人喉癌细胞株；细胞周期；凋亡

1空军航空大学教官训练基地一团卫生队

2吉林大学中日联谊医院

第一作者：张辉(1968-)，女，副主任护师，主要从事头颈肿瘤治疗研究。

喉癌在中国北方地区尤为高发，目前患者整体的生存率并无显著提高〔1〕，肿瘤的局部复发、区域淋巴结转移及远处转移是影响患者预后的主要因素。斑蝥酸钠是斑蝥素的半合成衍生物，其抗肿瘤作用确切〔2〕，对肝癌、食管癌、胃癌、肺癌等有良好疗效。但用于头颈部肿瘤的治疗较少。本研究应用人喉癌Hep-2细胞株为靶点，旨在探讨斑蝥酸钠对Hep-2细胞的增殖抑制作用。

1材料与方法

1.1细胞株及试剂Hep-2细胞由吉林省肿瘤研究所惠赠，四甲基偶氮唑蓝试剂(MTT)、RPMI1640培养基及96孔培养板购于美国Sigma公司，斑蝥酸钠维生素B6由我院药剂科提供。

1.2检测方法细胞增殖抑制实验(MTT比色法)及细胞周期进程检测(流式细胞术法)参照文献〔3〕略加改进。

1.3给药方法根据不同浓度斑蝥酸钠维生素B6制剂分组，分别为0、1、2、4、8 μg/ml组；联合组根据预实验结果取斑蝥酸钠维生素B6 4 μg/ml，再加入4 μg/ml盐酸氯丙嗪制剂。

1.4统计学方法应用SPSS17.0软件进行t检验。

2结果

2.1MTT结果斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞增殖有明显的剂量依赖性，抑制率分别为13.9%、18.2%、34.2%和46.6%，与对照组相比差异显著，而联合组对Hep-2细胞增殖抑制率为47.9%，抑制效果优于8 μg/ml组，具有良好的增效作用。

2.2Hep-2细胞周期进程变化及凋亡率流式细胞仪结果显示单独斑蝥酸钠维生素B6组对细胞周期进程有较强的阻滞作用，阻滞G1期细胞向S期转化进程，细胞增殖变缓，从而使细胞凋亡率升高。联合组对Hep-2细胞周期进程及凋亡率的影响优于单独斑蝥酸钠维生素B6 4 μg/ml组。见表1。

表1　不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6制剂对Hep-2细胞周期

与0 μg/ml组比较：1)P<0.01；与4 μg/ml组比较：2)P<0.01

3讨论

目前喉癌治疗仍面临诸多困难，手术、放疗对局部病灶尚可控制，但对淋巴及远处转移临床治疗时相对比较棘手〔4〕，只能进行化疗。但多药耐药的产生是肿瘤化疗失败的主要原因〔5〕。本研究中联合组斑蝥酸钠用药量减少50%，既减轻了病人经济负担，又减轻了药物的副作用，同时增强了治疗效果。

流式细胞仪结果显示，不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6制剂对Hep-2细胞周期各时相均有影响，阻滞细胞周期进程，阻滞G1期向S期发展，从而降低基因组的不稳定性，肿瘤细胞微环境改变，继而细胞发生自噬或凋亡。斑蝥酸钠维生素B6制剂可诱导Hep-2细胞凋亡，改变细胞周期的分布，抑制细胞增殖，尤其是盐酸氯丙嗪作为斑蝥酸钠维生素B6的增敏剂有望成为喉癌综合治疗的有效药物。文献报道〔6〕，斑蝥酸钠是从斑蝥中提取的一种活性成分。研究证明斑蝥素首先抑制癌细胞RNA、DNA的合成，继而影响蛋白质合成，最终抑制癌细胞分裂，细胞增殖阻滞，诱导细胞凋亡。

盐酸氯丙嗪协同斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞有显著的化疗增敏作用。化疗增敏剂是指没有抗肿瘤作用的药物，但能够起到干扰肿瘤细胞与组织微环境间耐药信号传导、提高已知抗肿瘤药物化疗效果的作用。氯丙嗪属于酚塞嗪类化合物，为中枢多巴胺受体的阻断剂，作用于中枢神经系统，具有催眠麻醉等多种药理作用。动物实验表明，氯丙嗪可致动物出现子宫重量降低，卵泡成熟受抑制〔7〕，与化疗药物作用后可显著改变化疗药物的药代动力学机制。

4参考文献

1季文樾，杜强，关超，等.115例喉癌患者的生存分析〔J〕.中华耳鼻咽喉科杂志，2004；39(1)：17-9.

2刘展华，曹洋，陈锐源，等.斑蝥酸钠对人肺癌LAC细胞增殖的抑制作用〔J〕.中药新药与临床药理，2008；19(1)：32-3.

3冯青杰，徐艳萍，辛丁，等.氯丙嗪协同紫衫醇对Hep-2细胞的增殖抑制作用〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2008；34(1)：124-6.

4潘新良.强化喉癌的规范化治疗，不断提高喉癌治疗水平〔J〕.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2014；49(8)：617-9.

5Wang XB，Wang SS，Zhang QF，etal.Inhibition of tetramethylpyrazine on P-gp，MPP2,MRP3 and MRP5 in multidrug resistant human hepatocellular carcinoma cells〔J〕.Oncol Rep，2010；23(1)：211-5.

6刘中虎，陈艾江，马新刚，等.斑蝥酸钠维生素B6注射液辅以胸腔镜内脏神经切断术治疗癌性腹痛〔J〕，国际肿瘤学杂志，2013；40(5)：398-9.

7邬静，袁慧，彭双清.氯丙嗪对大鼠卵巢颗粒细胞损伤及其作用机理〔J〕.毒理学杂志，2011；25(2)：79-83.

〔2015-10-25修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

通讯作者：郭惠玲(1972-)，女，副主任护师，主要从事造口、伤口、失禁治疗研究。

〔中图分类号〕R979.12

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)04-0803-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.014