PRL-3、MMP-2和CD105在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

霍小蕾　裴　振　王金胜　牛香兰

(长治医学院，山西　长治　046000)



PRL-3、MMP-2和CD105在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

霍小蕾裴振王金胜牛香兰

(长治医学院，山西长治046000)

摘要〔〕目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶(PRL)-3、基因金属蛋白酶(MMP)-2和细胞膜糖蛋白(CD105)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法选取2012年12月至2014年12月在该院收集的食管鳞癌患者手术组织细胞标本为研究组，同时取该组患者癌旁组织细胞标本为对照组，应用免疫组化SP检测PRL-3蛋白、MMP-2蛋白和CD105-MVD的表达，并计算PRL-3蛋白、MMP-2蛋白和CD105-MVD阳性表达与食管鳞癌临床病理学参数之间的关系。结果PRL-3、MMP-2和CD105-MVD在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。MMP-2和CD105-MVD与食管鳞癌患者的分期、淋巴结转移、浸润程度有相关性，而PRL-3与食管鳞癌患者的淋巴结转移有显著相关性。结论PRL-3、MMP-2和CD105-MVD在食管鳞状细胞癌中高表达，提示三者联合检测或可以筛选成为食管鳞状细胞癌诊断的早期标志物，而MMP-2和CD105可以作为预测食管鳞癌侵袭转移和评估预后的生物标志物。

关键词〔〕蛋白酪氨酸-磷酸酶；基因金属蛋白酶-2；细胞膜糖蛋白-MVD；食管鳞状细胞癌

第一作者：霍小蕾(1981-)，女，硕士，讲师，主要从事组织胚胎学及肿瘤学相关研究。

最常见的消化道恶性肿瘤是食管癌，每年食管癌的死亡率约有30万人〔1〕。虽然近年来对癌症的诊治已经取得了很大的进展，但还存在预后较差的特点，主要原因是食管鳞癌的侵袭和转移速度非常快，且早期症状不明显难以获得早期诊断。因此，对食管鳞癌早期诊断和侵袭转移程度的生物标志物进行判断有一定的价值。本研究对蛋白酪氨酸磷酸酶(PRL)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2和细胞膜糖蛋白(CD105)在食管鳞状细胞癌中的表达及其相关性进行研究。

1资料和方法

1.1一般资料选取2012年12月至2014年12月在我院收集的食管鳞癌患者手术组织细胞标本为研究组，共60例。这些组织细胞样本所属的病例均经过病理诊断为首次发病，其中男35例，女25例，年龄37～82〔平均(51.2±7.9)〕岁，术前均未接受过放化疗治疗。按照国际食管癌分期标准进行划分：浸润程度可以划分为4个级别，T1：肿瘤已侵及黏膜固有层或下层；T2：肿瘤已侵犯肌层；T3：肿瘤已经侵犯食管纤维膜；T4：肿瘤已经侵犯到邻近的器官。淋巴结转移的划分也分为4个等级；N0：淋巴结没有转移；N1：食管或是食管周围已经有淋巴结转移，大约为1～3枚；N2：食管周围已经有≥4枚淋巴结发生转移；N3：血管干旁已经有淋巴结转移。食管鳞癌分期划分为4个阶段,Ⅰ期：T1N0M0或T2N0M0；Ⅱ期：T3N0M0或T4N0M0；Ⅲ期：任何TN1M0或任何TN2N3M0；Ⅳ期：任何T任何NM1。同时取该组患者癌旁组织细胞标本为对照组。本组食管鳞癌患者无淋巴转移14例，淋巴结转移46例；Ⅰ期7例，Ⅱ期18例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例；中高分化25例，低分化35例。

1.2方法

1.2.1主要试剂美国proteintech Grop公司生产的PRL-3一抗、MMP-7一抗和CD105一抗，北京中杉金桥生物技术有限公司生产的磷酸盐缓冲液(PBS)和免疫组化SP试剂盒等。

1.2.2主要实验仪器设备石蜡包埋机，日本OLYMPUS公司生产的组织切片机和双目显微镜，以及北京中杉金桥生物技术有限公司生产的免疫组化湿盒。

1.2.3免疫组织化学染色步骤(1)脱蜡以及水化，30 min，60℃烤片，然后利用二甲苯浸泡，10 min/次，共2次。再用无水乙醇浸泡，5 min/次，共2次，然后用95%乙醇浸泡，5 min/次，共2次；(2)30 min利用3%H2O2阻断，并用双蒸水冲洗3次，每次5 min；(3)利用枸橼酸盐缓冲液进行抗原修复，利用高火档微波处理，每次5 min，共2次，等待冷却，然后再用双蒸水冲洗，每次5 min，共3次，再用PBS洗，每次5 min，共3次，每次冲洗后对试管进行轻微振荡；(4)将10%的羊血清滴加入试管，放进恒温箱孵育，温度设定为37℃，共30 min；(5)滴加一抗，再次放进恒温箱孵育，温度设定为37摄氏度，共30 min，放置到冰箱过夜，温度调至4℃，第2天，复温后利用PBS进行冲洗，每次5 min，共3次；(6)滴加二抗，链亲和素抗生物素过氧化物酶溶液；(7)利用二氨基联苯胺(DAB)显色，并控制好显色时间，终止染色；(8)利用苏木素对其进行再次染色和脱水，最后用树胶封片，待观察。

1.2.4实验对照和判断标准阳性对照使用的是已知的食管鳞癌阳性片，要保证所有切片的实验条件都一样。对PRL-3和MMP-7结果的判断以胞质内出现黄色到棕褐色的颗粒，并且采用半定量方法对阳性表达进行计算，两个因素相乘得到总分，一是阳性细胞百分比，一是染色强度，然后进行结果判断，阳性病例是总分≥2分者。CD105-MVD的结果判断，对色密集区的血管数目进行计算。

1.3统计学方法采用SPSS16.0统计软件进行χ2检验。

2结果

2.1PRL-3、MMP-2和CD105在食管鳞癌中的表达PRL-3蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达阳性率为48.3%(29/60)，显著高于癌旁组织表达阳性率10%(6/60)(χ2=8.143，P<0.05)MMP-2蛋白在食管鳞状细胞癌中的阳性率为86.6%(52/60)，显著高于癌旁组织16%(10/60)(χ2=8.126，P<0.05)。CD105阳性信号主要位于血管内皮细胞胞质和胞膜上，镜下可见在BC组织标本切片中血管内皮细胞呈现不同程度黄染(图1)。CD105-MVD在研究组和对照组中的表达分别为(11.59±4.85)mol/L和(41.57±15.38)mol/L，相比差异显著(t=2.323，P<0.05)。

图1　食管鳞癌CD105的表达(SP，×200)

2.2PRL-3、MMP-2和CD105的表达与临床病理特征之间的关系MMP-2和CD105与食管鳞癌患者的分期、淋巴结转移、浸润程度有相关性，而PRL-3与食管鳞癌患者的淋巴结转移有显著相关性(N1、N2、N3期PRL-3阳性率分别为33.3%、61.6%、100%，N0期为14.3%)。MMP-2与食管鳞癌患者的分期、淋巴结转移、浸润程度有相关性。在食管鳞癌中，MMP-2蛋白的阳性表达在低度分化和中度高度分化中有明显差异(P<0.05)，在中晚期癌症和早期癌症中也有明显差异(P<0.05)，在有无淋巴结转移的患者中也有明显差异(P<0.05)，而在性别、年龄的表达中无显著性差异(P>0.05)。CD105与食管鳞癌患者的分期、淋巴结转移、浸润程度有相关性。见表1。

表1　食管鳞癌中MMP-2蛋白、CD105-MVD的表达与临床病理特征之间的关系

3讨论

MMP-2是一类具有Zn-(2+)依赖性的内源性蛋白水解酶，主要功能就是参与细胞表面和细胞外基质蛋白降解，激活基质成分〔2，3〕。PRL-3是属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族的一员，在结肠癌肝转移中的高表达已经被明确证实存在〔1，4，5〕。CD105是一类细胞膜抗原，与增生有关，属于转化生长因子受体复合物的成员，能够调节细胞对转化生长因子(TGF)-β的反应，促进血管的形成等〔6〕。本研究提示三者或可以筛选成为食管鳞状细胞癌诊断的早期标志物，而MMP-2和CD105可以作为预测食管鳞癌侵袭转移和评估预后的生物标志物。

参考文献4

1Kuang SQ,Liao L,Wang S,etal.Mice lacking the amplified in cancer 1/steroid receptor coactivator-3 are resistant to chemical carcinogen-induced mammary tumor genesis〔J〕.Cancers Res,2005;65(17):7993-8002.

2承泽农，于东红，郭冰沁，等.食管癌MMP-2表达与p53表达和肿瘤侵袭转移的关系〔J〕.中国肿瘤临床，2004;31(8)：471-2.

3周彩云，姚济芬，陈晓瑞.基质金属蛋白酶MMP-2，9及其抑制因子TIMP-1，2在子宫颈鳞癌中表达的研究〔J〕.癌症，2002;21(7)：735-9.

4Nishida K,Nakamura Y.Loss of MAL expression in precancerous lesions of the esophagus〔J〕.Ann Surg Oncol,2007;14(5)：1670-7.

5Sun P,Liu YL,Gao J,etal.RNA interference(RNAi)-mediate vascular endow the growth factor reduction with genesis in sensitivity of cancer cells〔J〕.Mol Cell,2008;308(1/2):161-8.

6Flamand V,Sornasse T,Thielemans K,etal.Murine dendritic cells pulsed in vitro with tumor antigen induce tumor resistance in vivo〔J〕.Eur J Immunol,2010;24(3):605-10.

〔2015-05-16修回〕

(编辑袁左鸣)

通讯作者：裴振(1981-)，男，在读博士，讲师，主要从事生理学及肿瘤学相关研究。

基金项目：长治医学院科技创新项目(No.CX201407)

中图分类号〔〕R73〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0113-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.051