富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5、血管内皮生长因子及其受体2在胃腺癌组织中表达

刘　宁

(青海大学附属医院胃肠肿瘤外科，青海　西宁　810001)



富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5、血管内皮生长因子及其受体2在胃腺癌组织中表达

刘宁

(青海大学附属医院胃肠肿瘤外科，青海西宁810001)

摘要〔〕目的应用免疫组化方法检测胃腺癌中富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5、血管内皮生长因子(VEGF)和其受体(VEGFR)2的表达。方法58例胃腺癌患者的临床资料及术后蜡块组织作为研究组，选择上述患者在距肿物边缘>5 cm、经病理主治医师证实为非癌组织的胃黏膜组织的蜡块组织47例作为对照组，应用免疫组化方法检测LGR5、VEGF和VEGFR2的表达。结果研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率均明显高于对照组，研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率与浸润深度和脉管浸润相关，LGR5的阳性率与分化程度、Ki67增殖指数相关，VEGF和VEGFR2的表达与肿瘤的最大径相关。相关性分析显示研究组中LGR5和VEGF、VEGF和VEGFR2均具有正相关性。结论LGR5、VEGF和VEGFR2在胃腺癌术后组织中高表达，三者可以促进肿瘤的形成和进展。LGR5可能与VEGF和VEGFR2蛋白的表达有协同作用。

关键词〔〕胃腺癌；胃腺癌中富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子受体2

第一作者：刘宁(1977-)，男，主治医师，硕士，主要从事胃肠道外科及胃肠肿瘤研究。

胃癌最主要的病理类型是腺癌，病变进展时肿瘤细胞异型性明显，增殖活跃，常丢失其极性及分化。间质血管生成是肿瘤生长迅速及分化差的重要原因。近年研究显示肿瘤血管生成与血管内皮生长因子(VEGF)有直接关系，VEGF在作用过程中可以与其受体(VEGFR)2起协同作用〔1，2〕。富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5是近年学者关注的一种新的7次跨膜G蛋白耦联受体家族成员，其可能对干细胞和分化较原始的细胞具有标记作用，同时具有促进肿瘤细胞生成的作用〔3，4〕。本文分析胃腺癌中LGR5、VEGF和VEGFR2的表达及其相关性。

1资料与方法

1.1一般资料近3年在我院行胃腺癌根治手术的患者作为研究组，留取临床资料及术后肿瘤标本，共58例，男37例，女21例，年龄46～79岁，平均(60.4±6.4)岁。选择上述患者在距肿物边缘>5 cm、经病理主治医师证实为非癌组织的胃黏膜组织的蜡块组织47例作为对照组，男24例，女23例，年龄48～76岁，平均(61.9±5.6)岁。两组均经病理主治医师阅片复诊，严格按WHO中的标准判定。两组一般资料均衡可比。

1.2LGR5、VEGF和VEGFR2表达的检测应用免疫组化SP法、应用二氨基联苯胺(DAB)染色(DAB在染色时现场配制)。操作过程依据说明书进行，由病理科同一技师完成，减少人为误差，做好质控工作。

1.3结果判定LGR5、VEGF和VEGFR2均以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，研究组选择上皮细胞巢分布集中的区域进行计量，对照组选择上皮黏膜的分布区，每个病例选择3个400倍视野，取平均值，以<25%为阴性，以≥25%为阳性。

1.4统计学方法采用SAS6.12统计软件进行χ2检验或线性相关性分析。

2结果

2.1两组中LGR5、VEGF和VEGFR2表达阳性率的比较对照组中LGR5不表达，研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2表达阳性率明显高于对照组(P<0.000 1)。见表1。

表1　两组中LGR5、VEGF和VEGFR2

2.2LGR5、VEGF和VEGFR2在研究组不同临床特征分组中的比较见表2。研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率与浸润深度和脉管浸润相关，LGR5的阳性率与分化程度、Ki67增殖指数相关，VEGF和VEGFR2的表达与肿瘤的最大径相关。

表2　LGR5、VEGF和VEGFR2阳性表达在研究组

2.3研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的相关性LGR5和VEGF(r=0.48，P=0.042 1)、VEGF和VEGFR2(r=0.54，P=0.027 0)均具有正相关性。

3讨论

胃腺癌发生因素较多，目前学者关注其发生过程中蛋白的变化。肿瘤血管生成中常以血管内皮增生繁殖为主，当其加速生长时，形成枝芽状的实性团，此时血管无功能，当被血流冲击后可以形成管腔，才具有血管的形态和功能〔5〕。VEGF的作用主要是促进血管内皮细胞的增生和繁殖，在作用过程中，VEGF通过与VEGFR2途径促进间质的血管新生。此途径被认为是酪氨酸激酶受体途径〔6〕。VEGFR2由一个胞外结构域、一个跨膜结构域和一个胞质内酪氨酸激酶结构域组成，其胞外结构域有7个免疫球蛋白样的袢。当VEGF与VEGFR2结合后，形成二聚体及酪氨酸发生自身磷酸化，激活并将细胞膜及细胞质激酶级联反应信号传递到细胞核，可以引发一系列的变化，包括钙离子内流、凝血酶的产生及整合素的表达。也有研究认为VEGFR2还参与由VEGF介导的血管通透性改变〔7〕。LGR5是G蛋白耦联受体，由907个氨基酸组成，其具有7次跨膜蛋白，含有17个富含亮氨酸重复序列〔8，9〕。近来有研究显示LGR5为WNT信号通路的靶基因和肿瘤干细胞的重要标志物〔10，11〕。丁黎葭等〔12〕通过研究LGR5在Barrett食管和早期食管鳞癌中的表达后，发现LGR5在腺上皮和鳞状上皮蛋白表达部位不一致，并认为LGR5可能作为辅助诊断Barrett食管和早期食管鳞癌的生物学指标。近来不同学者也发现LGR5表达升高可能在一定程度上与血管生成因子有关联〔13，14〕。

本研究提示LGR5、VEGF和VEGFR2表达升高是促进胃腺部形成的蛋白因素。LGR5、VEGF和VEGFR2高表达可以促进肿瘤的侵袭性生长过程，使肿瘤以蟹足样的生长，对周围组织的破坏作用明显增强，同时肿瘤细胞对脉管的侵袭能力增加，使肿瘤细胞具有明显的血管破坏能力，同时使肿瘤细胞进入血液循环，为肿瘤细胞经血道迁移创造了重要前提。提示LGR5参与肿瘤的分化过程中，使肿瘤细胞的分化成熟过程发生障碍，肿瘤停滞于幼稚的阶段，细胞的异型性大，增殖活跃，侵袭性强。VEGF和VEGFR2表达升高是肿瘤生长的重要因素，此结果也与VEGF和VEGFR2促进肿瘤血管生成，为肿瘤细胞提供充足的营养有关。LGR5/VEGF/VEGFR2可能具有协同正向作用，即LGR5可以正向调节VEGF/VEGFR2这一血管生成通路，LGR5是肿瘤血管生成的重要影响因素。这个结果也说明LGR5有促进血管生成的作用，其作用机制是通过诱导VEGF/VEGFR2这一通路实现的。综上，LGR5、VEGF和VEGFR2在胃腺癌术后组织中高表达，三者可以促进肿瘤形成和进展。LGR5可能与VEGF和VEGFR2蛋白表达有协同作用。

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12丁黎葭，陈世耀，纪元，等.LGR5在Barrett食管和早期食管鳞癌中的表达〔J〕.胃肠病学，2011；16(6)：328-30.

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〔2014-11-24修回〕

(编辑苑云杰)

中图分类号〔〕R735〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0111-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.050