肝细胞肝癌组织中miR-21表达水平及与预后的相关性

刘　峰　梁国栋　王　岩　刘海瑞　王　斌　杨玉波

(吉林省肿瘤医院肝胆胰胃外科，吉林　长春　130012)



肝细胞肝癌组织中miR-21表达水平及与预后的相关性

刘峰梁国栋王岩刘海瑞王斌杨玉波

(吉林省肿瘤医院肝胆胰胃外科，吉林长春130012)

摘要〔〕目的探讨肝细胞肝癌患者组织中miR-21的表达水平及其预后意义。方法共收集50例肝细胞肝癌的患者，采用免疫组化法检测肝细胞肝癌及配对癌旁组织中miR-21的表达水平，分析miR-21蛋白的表达与患者临床病理特征及预后生存的相关性。结果肝细胞肝癌组织中miR-21表达水平显著高于癌旁组织(58.0% vs 6.0%，χ2= 31.07,P<0.000 1)。miR-21高表达与临床T分期相关(χ2=8.043,P=0.018)；但miR-21蛋白表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、N分期及分化程度均无显著关联(P>0.05)。高表达miR-21的肝细胞肝癌患者总生存时间明显降低(P=0.032)，但患者无疾病进展生存期差异无统计学意义(P=0.116)。 结论肝细胞肝癌患者miR-21高表达可能作为肿瘤患者预后不良的重要标志物之一，而与肿瘤的发生及发展的机制性研究尚需进一步验证。

关键词〔〕 肝细胞肝癌；miR-21；免疫组织化学

第一作者：刘峰(1968-)，男，副主任医师，主要从事消化道肿瘤外科的临床研究。

目前虽然有多种临床手段治疗肝细胞肝癌，但患者预后差，且5年生存率仅约10%〔1〕。miRNA作为内源性非编码小分子RNA，参与至少30%蛋白编码基因的调控及多种疾病发生与进展〔2〕。研究显示miR-21可能成为肝癌不良预后的标志物之一〔3〕。miR-21高表达在多种肿瘤中，且其表达程度参与肿瘤的发生与发展，但在肝癌中的研究尚未见报道，且缺乏预后生存的证据。本研究拟通过免疫组化方法检测肝细胞肝癌样本中miR-21的表达水平及其预后意义。

1材料与方法

1.1研究对象收集2013年1月至2014年1月吉林省肿瘤医院肝胆外科住院肝细胞肝癌患者50例，其中男29例，女21例。年龄>50岁28例，<50岁22例；肿瘤大小<5 cm 20例，>5 cm 30例；低分化29例，中/高分化21例；临床分期ⅡA期6例，ⅡB期7例，ⅢA期12例，ⅢB期14例，ⅢC期11例；T分期：T2期9例，T3期21例，T4期20例；N分期：N0 7例，N1期15例，N2期13例，N3期15例。由两位临床病理医生根据肝细胞肝癌临床病理分型对患者评定TNM分期。术后将患者肿瘤组织与癌旁组织分别进行病理分析，癌旁组织选择正常的肝组织，本实验已获吉林省肿瘤医院伦理委员会批准。

1.2免疫组化将石蜡切片置于60℃烤箱中烘片3 h，脱蜡至水后浸于枸橼酸缓冲溶液中高压复性5 min，选用3%的H2O2封闭内源性过氧化酶并使用羊血清抑制非特异性结合。以1∶1 000倍稀释miR-21抗体(美国CST公司)并4℃过夜。染色强度判定由两位来自吉林省肿瘤医院病理医生负责。根据染色阳性细胞数进行评分： 0分为无色，1分为<10%细胞，2分为10%～50%细胞，3分>50%细胞表达miR-21。根据染色评分结果将患者分为miR-21高表达(2～3分)与低表达(0～1分)。

1.3统计学方法应用SPSS17.0软件进行χ2检验、t检验和Kaplan-Meier。

2结果

2.1肝细胞肝癌及癌旁组织中miR-21蛋白的表达水平50例样本中29例患者miR-21高表达，其中评分2分11例，3分18例。配对的癌旁组织3例为miR-21高表达，miR-21在肝癌中的表达明显高于癌旁组织(χ2= 31.07,P<0.000 1)。

2.2miR-21表达水平与肝细胞肝癌临床病理因素的相关性研究miR-21高表达与T分期相关(P= 0.018)。但miR-21表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期及分化程度均无显著关联(P>0.05)。见表1。

表1　miR-21表达水平与肝细胞肝癌患者

2.3预后统计统计患者随访时间总计为27个月，其中失访4例，失访率达8.0%。高表达miR-21的肝细胞肝癌患者总生存时间明显短于miR-21低表达者(P=0.032)(图1)，而无疾病进展生存时间则无显著性差异(P=0.116)(图2)。

图1　miR-21表达水平与患者总生存率的相关性

图2　miR-21表达水平与患者无疾病生存率的相关性

3讨论

80%的肝细胞肝癌患者对于化疗疗效不佳，而化疗敏感的患者在治疗一段时间后也将产生耐药。近来已有研究证实，miRNA是一种非编码RNA(UTR)，通过靶基因 3'UTR的结合来调节靶基因表达程度，从而参与肿瘤细胞生长、增殖、分化和凋亡等信号通路的调控过程〔4〕。相关研究显示miR-21在肝细胞肝癌耐药机制中起着重要作用，参与细胞趋化运动并与肿瘤细胞侵袭转移紧密关联。miR-21在高表达的乳腺癌、结直肠癌及胃癌等恶性肿瘤中患者预后生存差〔5，6〕，Romanska等〔7〕研究显示miR-21表达水平与临床分化程度无相关性(P<0.05)，但miR-21表达阳性率随着肿瘤临床分期升高而增加。而有关miR-21在肝细胞肝癌中的预后生存研究少见。

在进一步实验中本研究团队将通过基础实验验证miR-21在人肺癌细胞系(hepG2)等肝癌细胞中的生物学作用，进一步表明miR-21在肝癌细胞中表达的相关机制研究，为临床肝细胞肝癌的诊断、预后评估和临床新治疗模式提供前期基础。

参考文献4

1Ferlay J,Shin HR,Bray F,etal.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008:GLOBOCAN 2008〔J〕.Int J Cancer,2010;127(12):2893-917.

2Wierstra L,Alves J,Fox M.A typical proliferation associated transcription factor〔J〕.Biol Chem，2007;388(12):1257-74.

3Kang BW,Lee D,Chung HY,etal.Tetraspanin CD151 expression associated with prognosis for patients with advanced gastric cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol,2013;139(11):1835-43.

4Allen KE,Weiss GJ.Resistance may not be futile:microRNA biomarkers for chemoresistance and potential therapeutics〔J〕.Mol Cancer Ther,2010;9(12);3126-36.

5Zhong M,Ma X,Sun CJ,etal.MicroRNAs reduce tumor growth and contribute to enhance cytotoxicity induced by gefitinib in non-small cell lung cancer〔J〕.Chem Biol interact,2010;184(3):431-8.

6Zöller M.Tetraspanins:push and pull in suppressing and promoting metastasis〔J〕.Nat Rev Cancer,2009;9(1):40-55.

7Romanska HM,Berditchevski F.Tetraspanins in human epithelial malignancies〔J〕.J Pathol,2011;223(1):4-14.

〔2015-01-07修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

通讯作者：梁国栋(1983-)，男，主治医师，博士，主要从事普通外科的临床研究。

基金项目：吉林省科技厅项目(200705274)

中图分类号〔〕R735.2〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0105-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.047