小牛血去蛋白注射液对糖尿病大鼠周围神经病变的保护作用

王广红　徐广宇　安丽萍　邵晓彤　李洪宇　杜培革

(北华大学药学院，吉林　吉林　132013)



小牛血去蛋白注射液对糖尿病大鼠周围神经病变的保护作用

王广红徐广宇安丽萍邵晓彤李洪宇杜培革

(北华大学药学院，吉林吉林132013)

摘要〔〕目的探讨小牛血去蛋白注射液(DCSI)对糖尿病大鼠初期周围神经病变(DPN)的作用。方法大鼠腹腔注射2%链脲佐霉素(STZ)65 mg/kg建立DM模型，DM大鼠随机分为模型组(DM)，联合给药高剂量组(H，二甲双胍105 mg/kg+DCSI 378 mg/kg)，联合给药中剂量组(M，二甲双胍105 mg/kg+ DCSI 189 mg/kg)，联合给药低剂量组(L，二甲双胍105 mg/kg+ DCSI 94.5 mg/kg)，降糖组(PN，二甲双胍105 mg/kg)。8 w后，采集大鼠血清，测定血清生化指标。苏木素-伊红(HE)染色观察坐骨神经组织病理学改变。结果联合给药组空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)含量降低，高密度脂蛋白(HDL-C)、谷胱甘肽(GSH)含量升高，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力升高(均P<0.05)。轴突-神经胶质连接趋于正常，毛细血管壁变粗，阻塞减轻。结论DCSI对DM大鼠初期周围神经病变有保护作用。

关键词〔〕糖尿病周围神经病变;小牛血去蛋白注射液;抗氧化

第一作者：王广红(1989-)，女，教授，主要从事生物大分子功能开发与应用方向研究。

小牛血去蛋白注射液(DCSI)能够显著提高网状内皮系统活力，提高酶活性，加速细胞的氧化磷酸化反应和ATP的合成，激活细胞呼吸，促进新陈代谢，加快组织再生，对脑神经损伤、脑卒中及脑梗死等疾病有积极的治疗效果〔1〕。此外，DCSI具有类似胰岛素样作用，但不依赖胰岛素受体，直接激活第二信使，促进葡萄糖转运和细胞能量代谢，改善氧的利用率，促进细胞对氧和葡萄糖的摄取与利用，对缺血缺氧造成的细胞能量代谢降低具有拮抗作用〔2〕。近年来DCSI开始在临床上用于糖尿病(DM)并发症的治疗，但其作用机制还不十分清楚。本实验主要探讨DCSI对DM大鼠初期周围神经病变的作用及其部分机制。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物Wistar雄性大鼠，体重(200±20)g，购自吉林大学动物实验中心，动物许可证编号为SCXK(吉)-2011-0004。

1.1.2仪器与试剂酶标仪(TECAN InfiniteM200)。DCSI(长春市长庆药业集团有限公司)，链脲佐霉素(美国Sigma公司)，血糖试剂盒、甘油三酯(TG)测定试剂盒、总胆固醇(TC)测定试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒、谷胱甘肽测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2方法

1.2.1DM大鼠模型建立100只Wistar大鼠，随机选取10只作为正常对照组，其余90只作为造模组。造模组大鼠禁食12 h，腹腔注射2%链脲佐霉素(STZ)65 mg/kg。1 w后，尾静脉采血测定空腹血糖(FPG)值，将血糖值≥7.8 mmol/L者视为造模成功。

1.2.2动物分组正常对照组(CON)：生理盐水2 ml；模型组(DM)：生理盐水2 ml；联合给药高剂量组(H)：二甲双胍105 mg/kg+ DCSI 378 mg/kg；联合给药中剂量组(M)：二甲双胍105 mg/kg+ DCSI 189 mg/kg；联合给药低剂量组(L)：二甲双胍105 mg/kg+ DCSI 94.5 mg/kg；降糖组(PN)：二甲双胍105 mg/kg;给药方式：生理盐水和DCSI为腹腔注射，二甲双胍为口服灌胃，共给药8 w。

1.2.3生化指标检测给药第8周末，大鼠禁食12 h，称量体重，腹腔注射20%乌拉坦(1 ml/100 g)麻醉大鼠，腹主动脉取血，4 000 r/min离心15 min，分离血清，根据试剂盒说明书检测FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C、SOD、MDA、GSH、GSH-Px。

1.2.4神经组织病理形态学观察取大鼠坐骨神经,经乙醇、二甲苯脱水后用石蜡包埋，制成蜡块；蜡块切成2 μm的薄片，60℃下烘干15 min；再经二甲苯、乙醇脱蜡；自来水冲洗5 min，蒸馏水浸湿；苏木精中染色2～3 min，自来水冲洗；盐酸酒精中分色5 min，自来水冲洗10 min；伊红中染色2 min，自来水冲洗；乙醇、二甲苯脱水；中性树胶封片。观察神经组织病理形态。

1.3统计学分析采用SPSS20.0软件进行t检验。

2结果

2.1给药后各组大鼠血糖、血脂变化与DM组相比，H、M组大鼠FPG、TC、LDL-C含量显著降低，HDL-C含量显著升高(P<0.05)；H、M、L组和PN组大鼠TG含量显著降低(P<0.05)；与PN组相比，H、M组大鼠血糖显著降低，TC、TG、LDL-C含量显著降低，HDL-C含量显著升高(P<0.05)。见表1。

表1　给药后大鼠血糖、血脂变化

与DM组比较：1)P<0.05;与PN组比较：2)P<0.05，下表同

2.2给药后各组大鼠血清SOD、MDA、 GSH、 GSH-Px变化与模型组相比，H、M、L组和PN组大鼠GSH含量，SOD、GSH-Px活力有显著升高，MDA含量有显著降低(P<0.05)；与PN组相比，H、M组大鼠GSH含量，GSH-Px、SOD活力有显著升高，MDA含量有显著降低(P<0.05)。见表2。

表2　DSCI对糖尿病大鼠血清SOD、 MDA、

2.3神经组织病理形态变化CON组神经纤维形态规整，轴突-神经胶质连接良好，供养神经内膜和神经外膜的微血管壁正常，毛细血管无阻塞。DM组大鼠神经细胞胞质内髓脂质纤维丧失、细胞突起变薄、胶原纤维增生并有薄膜状体积聚；轴突-神经胶质连接不良；供养神经外膜和内膜的微血管壁增厚(基底膜增厚、内皮细胞肥大增生)和透明样变性，毛细血管内径变细，甚至阻塞。M组神经细胞胞质内呈髓脂质纤维有一定的恢复，轴突-神经胶质连接趋于正常，毛细血管壁变粗，阻塞情况有所减轻；H、L组及PN组神经病变无明显好转。见图1。

图1　DM大鼠周围神经组织病理学形态变化(×400)

3讨论

DM脂质代谢紊乱使神经内膜微血管的结构与功能变化，缺氧或缺血，引起血神经障碍，导致神经纤维变性，发展为DM周围神经病变〔3，4〕；本研究提示DCSI具有调节脂质代谢紊乱的作用。长期高血糖、高血脂状态会使葡萄糖的自身氧化增强，氧自由基生成过多，氧化平衡破坏，ROS生成增多，最终导致了体内氧化应激反应发生〔5〕。氧化应激可损害DM动物的神经和血管组织的DNA、脂质及蛋白质，导致神经传导速度下降，产生DPN〔6,7〕。MDA 是自由基作用下脂质过氧化的产物,它反映体内脂质过氧化的程度,间接反映氧自由基对组织的损伤状态。SOD是机体内氧自由基的清除剂，反映机体的抗氧化能力，其含量的减少会降低体内氧自由基的清除率，致使内皮细胞损伤。GSH-Px是反映机体抗氧化能力的另一指标，它能够催化过氧化氢的分解与还原，保护细胞膜的功能和结构〔8〕。因此,测定MDA 水平，SOD和GSH-PX活性可以有效反映机体脂质过氧化的程度以及机体清除氧自由基的能力。本实验结果表明DCSI可以增强机体的抗氧化能力。病理形态学结果提示给药后神经细胞胞质内呈髓脂质纤维有一定的恢复，轴突-神经胶质连接趋于正常，毛细血管壁变粗，阻塞情况有所减轻，从而说明DCSI对大鼠的周围神经起保护作用，具体作用机制需进行进一步研究。

参考文献4

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3Sethi JK,Vidal-Puig A.Visfatin:the missing link between intra-abdominal obesity and diabetes〔J〕.Trends Mol Med,2005;11(8):344-7.

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7Kaszniciki J,Kosmalski M,Sliwinska A,etal.Evaluation of oxidative stress markers in pathogenesis of diabetic neuropathy〔J〕.Mol Biol Rep,2012;39(9):8669-78.

8冯小芳.脂代谢紊乱与2型糖尿病周围神经病变的相关分析〔D〕.杭州:浙江大学,2007:23-4.

〔2015-07-26修回〕

(编辑滕欣航)

通讯作者：杜培革(1963-)，女，硕士，主要从事生物大分子功能开发与应用方向研究。

基金项目：吉林省科技厅项目(YYZX201207);吉林省发改委(2014Y103);吉林省卫生厅(20142078)

中图分类号〔〕R96〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0028-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.012