结直肠癌淋巴结微转移检测的研究新进展

谭杨波

(广西科技大学医学院护理系外科护理学教研室，柳州市 545005，E-mail：191575702@qq.com)

综 述

结直肠癌淋巴结微转移检测的研究新进展

谭杨波

(广西科技大学医学院护理系外科护理学教研室，柳州市 545005，E-mail：191575702@qq.com)

结直肠癌淋巴结微转移(LNM)是判断结直肠癌患者临床分期和制订肿瘤患者个体化治疗方案的一个重要指标。检测结直肠癌患者淋巴结微转移的方法主要有免疫学技术、免疫组化技术、免疫磁珠技术、流式细胞分析技术及分子生物学技术等。LNM可以精确指导结直肠癌患者的TMN分期，评估患者的预后。本文对近年来LNM检测技术及其临床意义作一综述。

结直肠癌；淋巴结；微转移；临床检测；进展；综述

结直肠癌是严重影响人们生命健康的一种恶性肿瘤，在全球尤其是在一些欧美发达国家，结直肠癌发病率已经上升为恶性肿瘤的前三位。随着我国外科手术治疗结直肠癌水平的不断提高，尤其是微创外科在结直肠癌手术中的应用，患者的总体死亡率虽有所下降，但患者的5年生存率仍较低。结直肠癌发生淋巴结转移会严重影响患者的预后，淋巴结转移的个数也是判断结直肠癌患者临床分期和制订肿瘤患者个体化治疗方案的一个重要指标。研究发现，很多结直肠癌的患者存在淋巴结微转移(lymphnode micro-metastasis，LNM)。近年来，LNM成为结直肠癌研究的一个热点，及时发现LNM对于提高患者的5年生存率具有重要意义。

1 结直肠癌LNM的概念

Mehes等[1]根据结直肠癌患者的预后将微转移分为孤立性肿瘤细胞和微转移两类，前者是指肿瘤细胞群直径(d)<0.2 mm，呈单个和小簇肿瘤细胞群；后者是指0.2 mm

2 结直肠癌LNM的临床检测方法

2.1 免疫学技术 随着对结直肠癌免疫学研究的深入，我们可以通过免疫学技术来发现结直肠癌的LNM。常用的免疫标记物有：(1)肿瘤相关抗原：如癌胚抗原(carcino-embryonic antigen，CEA)、细胞角蛋白(cytokeratin，CK)20、糖类多肽抗原199和黏蛋白等。(2)癌基因的产物癌蛋白：P53蛋白、端粒酶等。(3)免疫分子：细胞黏附分子CD44V6、IgG亚类以及FAS配体等。

2.1.1 免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)技术：IHC目前已广泛应用于临床病理科和基础科研，其应用范围深达医学的各个学科，是目前生命科学研究者必须掌握的检测方法之一。IHC技术的优势是操作简单，不需要复杂先进的设备等条件。目前常用的目标抗原有CEA和CK。CK20在肿瘤的恶变、转移和细胞化生等改变时呈阳性表达，所以CK20是良好的肿瘤标记物。Cutait等[6]采用抗CK、CEA两种抗体检测结直肠癌患者HE染色阴性的603个淋巴结，发现有LNM 22个。周剑等[7]采用CEA免疫组化方法发现直肠癌环周切缘在直肠系膜中存在微转移的情况。国外的许多学者均以CK20和CEA检测到了结直肠LNM的存在[8-11]。可见，IHC在LNM检测中应用很广泛。

2.1.2 放射性免疫分析(radioimmunoassay，RIA)技术：放射性免疫标记是利用放射性粒子的高放射性来示踪转移灶，目前主要应用于前哨淋巴结的定位[12]。Rubbi等[13]在104个非肿瘤细胞中通过RIA技术检测到一个肿瘤细胞。可见，RIA的优点是敏感性高，特异性也较高，但缺点是试验成本高，试剂半衰期短，对人体有一定的危害性，需要大型中心实验室才能完成，并不适合于肿瘤普查。

2.1.3 流式细胞分析技术：流式细胞技术是应用荧光染色标记物例如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)的单克隆抗体与患者的肿瘤细胞结合后，用流式细胞仪检测出癌细胞，其最大优势是可对肿瘤细胞进行直接计数，进而将其分离进行进一步的研究。但其价格昂贵难以普及[14]。国内文献报告，采用流式细胞学检测结直肠癌LNM，可以从大量的淋巴细胞中检出肿瘤细胞，应用此方法在38个病理检查阴性的淋巴结中检出7个LNM，与癌肿的大小和浸润深度有关联[15]。

2.1.4 免疫学技术的优劣势：免疫学检测LNM有许多优点，如方法简便、实用、快捷，敏感性和特异性均较高。但是也存在不少缺陷：(1)能否推断预后仍有争议。国外有研究指出IHC监测LNM无助于患者预后的判断。(2)操作标准化问题。免疫检测技术中应用的抗原修复方法容易受人为因素的影响。(3)抗体的选择和标本代表性的问题。抗体的特异性和敏感性不能满足诊断的要求；淋巴结切片的数量虽较多，但是不能反映淋巴结的转移情况。近年来，前哨淋巴结备受重视，其在一定程度上反映了结直肠癌的淋巴结受累情况，故可以用于LNM的检测，来弥补免疫学方法的不足。

2.2 分子生物学技术

2.2.1 聚合酶链技术(polymerase chain reaction，PCR)和反转录聚合酶链技术(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)：PCR技术是20世纪80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术，目前广泛应用于分子生物学的研究。PCR和RT-PCR的优势在于能够得到很多的片段对样品进行定性和定量的分析，可节约时间和费用；缺点在于其结果有假阴性和假阳性，具有不肯定性，故要求熟练操作。自20世纪90年代Smith等[16]采用PCR技术检测出血液中的肿瘤微转移后，PCR技术即广泛应用于LNM研究中。Xu等[17]利用RT-PCR技术检测到直肠癌患者外周血中CK20 mRNA、CK19 mRNA及CEA mRNA，联合检测LNM的阳性率为59.5%。

2.2.2 其他的分子生物学检测方法：核酸杂交法是从肿瘤细胞和对应的正常细胞中提取DNA或者RNA，采用限制性内切酶酶解，凝胶电泳分离，再用特异性探针进行杂交。其他还包括突变等位基因特异扩增法(mutational allele-specific amplification，MASA)；PCR结合单链DNA构型多态性分析；异源双链分析法；DNA直接测序技术等[20]。

3 结直肠癌LNM检测的临床意义

3.1 LNM检测可能是评估患者预后的重要指标 结直肠癌LNM与患者预后的关系存在不同的争议。多数学者认为LNM不仅是影响患者发生远处器官转移的重要因素，而且也是影响结直肠癌患者肿瘤复发和5年生存率的重要因素。Greenson等[18]检查了50例结直肠癌患者的602枚淋巴结，发现有28%发生了LNM，多数患者预后不佳。Clarke等[19]对100例行手术治疗的结直肠癌患者进行观察，结果有28%患者发生了LNM，Cox回归分析LNM与患者生存率明显相关。但是也有学者提出不同的看法，认为肿瘤的转移是一个复杂的过程，肿瘤细胞转移到淋巴结的分子生物学机制至今仍不明确；而且只有部分发生LNM的患者最后发展成显性转移，LNM并不等于真正发生转移或提示预后不良。

3.2 LNM检测可以指导精确TNM分期，制订更加合理的治疗方案 Uribarrena-Amezaga等[20]的研究显示，结直肠癌患者采用根治术治疗后，其复发率和转移率高达30%～50%，特别是无淋巴结转移的I和II期患者，5年内死亡率高达30%。究其原因可能是因为淋巴结、血道和骨髓中存在微转移，导致没有及时诊断和治疗。Palma等[21]运用LNM检测的方法分析了38例Dukes B期的结直肠癌患者的淋巴结，发现有7枚淋巴结已经发生了微转移。吴泽宇等[22]采用PCR方法对30例胃癌患者850枚淋巴结进行微转移检测，结果77枚淋巴结发生微转移，7例患者的TNM分期提高。于游等[23]对70例结直肠癌患者1120枚淋巴结进行检测，结果有24例患者共130枚淋巴结发生微转移，13例患者的TNM分期明显提高。因此，及时发现结直肠癌患者的LNM可以精确TNM分期，从而更加合理地制订治疗方案。

3.3 LNM检测可指导患者术后进行辅助性化疗 LNM与患者的预后相关性研究显示，LNM检测对于患者的辅助性化疗有临床指导意义。Short等[24]研究了602例LNM结直肠癌术后进行辅助性化疗的患者，其中51%的患者术后进行辅助性化疗可明显改善预后，42%患者术后辅助性化疗疗效不确定，7%的患者术后辅助性化疗无意义。尽管结直肠癌患者发生LNM是否需要化疗有争议，但结直肠癌美国国立综合癌症网络临床实践指南(2012年版)已经将通过IHC的方法检测到的LNM作为评判结直肠癌预后和辅助性化疗的重要指标，提示结直肠癌LNM已经受到关注和重视。

4 结 语

开展LNM检测对于结直肠癌患者的肿瘤精确分期、预后和制订个体化的治疗方案都具有十分重要的指导意义。目前，该检查项目还在起步阶段，有关其检测技术的标准等问题还有待统一和规范。但我们相信，随着有关研究的进一步深入，结直肠癌LNM的检测在结直肠癌的诊疗中将会发挥更大的作用。

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谭杨波(1980～)，男，硕士，主治医师，讲师，研究方向：外科学。

R 735.37

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0253-4304(2016)04-0540-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.04.26

2015-10-27

2015-12-22)