替米考星肠溶颗粒对猪的安全性试验

林烨，吕英军，张晓辉，苏亚楠，唐姝，孙嘉瑞，赵其岭，栗建盛，刘爱玲，孟小宾，鲍恩东*

(1.南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095；2.瑞普(天津)生物技术股份有限公司，天津 300300)

替米考星肠溶颗粒对猪的安全性试验

林烨1，吕英军1，张晓辉1，苏亚楠1，唐姝1，孙嘉瑞1，赵其岭1，栗建盛1，刘爱玲2，孟小宾2，鲍恩东1*

(1.南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095；2.瑞普(天津)生物技术股份有限公司，天津 300300)

为了客观评价替米考星肠溶颗粒临床应用于猪的安全性，选取40头25日龄健康三元杂交猪，随机将其分成4组，每组10头，分别以1倍、3倍、5倍推荐剂量的替米考星肠溶颗粒拌料给药45 d，试验期内对受试猪进行血常规、血凝、血生化、尿常规、增重、料重比、脏器系数等指标的测定及病理学检查。结果显示，替米考星肠溶颗粒对受试猪的血液学指标、尿液指标、主要生产性能等方面未造成明显影响，说明替米考星肠溶颗粒以5倍推荐剂量(2000 g/1000 kg)临床应用于猪是安全的。

替米考星；肠溶颗粒；安全性试验；猪

替米考星是大环内酯类抗生素，具有广谱抗菌的特性，对猪的胸膜肺炎和乳腺炎具有良好的治疗效果[1-3]，广泛应用于畜禽养殖业中[4]。目前国内、外上市应用的替米考星剂型主要为注射剂和预混剂，但这两种剂型在使用过程中均存在一些缺憾[5]。如替米考星注射液在水中溶解度低，注射使用时费力且容易引起猪的应激反应；替米考星预混剂味苦且对酸不稳定，口服后易被胃酸所破坏[4-6]。因此，替米考星注射液和预混剂在兽医临床应用上均存在一定的局限性。为了弥补上述缺陷，研发了替米考星肠溶颗粒，该剂型具有有效防止替米考星在胃酸中被破坏，使药物有足够时间到达肠道被吸收，明显提高生物利用度，同时也可改善适口性等特点[7]。为了评价替米考星肠溶颗粒临床应用于猪是否安全，试验依据农业部《兽药研究技术指导原则汇编》以及《VICH兽药靶动物安全性研究指导原则概述》[8]有关规定，通过不同剂量拌料给药的方式开展替米考星肠溶颗粒对猪的安全性试验，为其临床用药提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药品 替米考星肠溶颗粒(批号150901，含替米考星有效成分20%)由瑞普(天津)生物药业有限公司提供，推荐剂量为200～400 g/1000 kg饲料(以替米考星计)。

1.1.2 试验动物 25日龄的普通级健康三元杂交猪40头，购自江苏省南京市某规模化养殖场。

1.1.3 仪器设备 全自动生化分析仪(日立7180)为日本日立公司产品；全自动血凝分析仪(CA 1500)日本SYSMEX公司产品；血球分析仪(MEK-7222)为日本光电公司产品； 尿常规分析仪(COMBISCAN 500)为德国科宝公司产品。

1.2 试验分组及处理 将40头受试猪随机分为4组，分别为替米考星肠溶颗粒1倍推荐剂量组(400 g/1000 kg饲料)、3倍推荐剂量组(1200 g/1000 kg饲料)、5倍推荐剂量组(2000 g/1000 kg饲料)和空白对照组，每组均为10头。试验期间各药物剂量组拌料给药，空白对照组饲喂正常不含任何药物的饲料，所有受试猪均自由采食和饮水，试验周期为45 d。

1.3 样品的采集与处理 给药前通过猪前腔静脉采血的方式采集各组受试猪的血液(分为加EDTA抗凝的血液2 mL，加枸橼酸钠抗凝的血液2 mL和加促凝剂的血液5 mL)及尿液5 mL。采样时，使猪仰卧保定，在猪的第一肋骨与胸骨柄结合处的前侧方的明显凹陷处，用75%的酒精棉球消毒后，取5mL注射器以与水平面呈约60°的角度平稳缓慢进针，慢慢拉动活塞抽取血液，采血完毕后用消毒棉球按压进针处，迅速拔出注射器，压迫片刻以防出血。样品采集后，立即进行检测。给药23 d和给药45 d时再次按照上述方法对受试猪逐头采样。试验结束时宰杀所有受试猪，肉眼观察肝、脾、肺、肾等内脏器官病变情况并称重，然后取部分脏器组织于10%中性福尔马林溶液中固定以备制作石蜡切片。试验期间，每天观察受试猪的临床症状，包括精神状况、行为、呼吸和饮食等，每周测两次体温。给药前、后分别称量每头猪的体重。

1.4 检测项目

1.4.1 血液常规指标分析 取EDTA抗凝全血，用光电MEK-7222血球分析仪测定血液常规指标。

1.4.2 血凝指标分析 取枸橼酸钠抗凝全血，用SYSMEX CA 1500全自动血凝分析仪测定血凝指标。

1.4.3 血清生化指标分析 取促凝血离心所得血清，用日立7180全自动生化分析仪测定血清生化指标。

1.4.4 尿液常规指标分析 取新鲜尿液，用COMBISCAN 500尿常规分析仪测定尿液常规指标。

1.4.5 增重及料重比 根据给药前、后受试猪的体重，计算每组受试猪的平均增重。根据各组的平均增重和饲料消耗量，计算每组料重比。

1.4.6 脏器系数分析 剖检受试猪后分别取肝脏、脾脏、肺脏、肾脏称重并计算脏器系数。

脏器系数=脏器重量/体重×100%

1.4.7 病理组织学检查 将用10%中性福尔马林溶液固定的肝脏、脾脏、肺脏、肾脏进行常规石蜡切片，HE染色，观察组织病理学变化。

1.5 统计分析 利用SPSS统计分析软件对所有试验数据用单因素ANOVA分析方法进行显著性差异分析，结果均以平均值±标准差(x±s)的形式表示，*和**分别表示各药物试验组与空白对照组差异显著(P<0.05)和差异极显著(P<0.01)。

2 结果

2.1 受试猪的临床表现 各试验组受试猪在用药过程中无明显的异常临床表现，其行为、呼吸、饮食以及体温等均正常。

2.2 血液常规指标分析 各组受试猪在用药前1 d、用药23 d和用药45 d时血液常规指标结果见表1。

表1 血液常规测定结果

续表1

从表1可以看出，用药45 d时，3倍剂量组与5倍剂量组受试猪的中性粒细胞百分比与空白对照组相比有显著的升高；用药23 d时，1倍剂量组、3倍剂量组受试猪的单核细胞数与空白对照组受试猪相比有显著增加，但5倍剂量组与空白对照组受试猪相比却并无显著性差异，说明该差异并非口服替米考星肠溶颗粒所造成。用药23 d和用药45 d时，1倍剂量组受试猪的嗜酸性粒细胞数与空白对照组相比有显著增加，但3倍剂量组、5倍剂量组与空白对照组受试猪相比则没有显著性差异。需要强调的是，依据参考资料[9-10]可知，所有受试猪血液中尽管有个别数值偏高，但其检测值均在正常数值范围内。说明口服替米考星肠溶颗粒并不会造成受试猪血液常规数值的显著改变。

2.3 血凝指标分析 各组受试猪在用药前1 d、用药23 d和用药45 d时的血凝指标结果如表2所示。

表2 血凝指标分析结果

由表2可知，替米考星肠溶颗粒用药23 d时，1倍剂量组、3倍剂量组受试猪的凝血酶原时间与空白对照组相比出现显著降低(P<0.05)，但用药45 d时各用药剂量组的各项指标与空白对照组受试猪相比均不存在差异(P>0.05)，说明受试猪出现的该差异并非口服替米考星肠溶颗粒所造成。

2.4 血清生化指标分析 各组受试猪在用药前1 d、用药23 d和用药45 d时的血清生化指标结果如表3所示。

表3 血清生化指标测定结果

续表3

由表3可知，用药23 d时，3倍剂量组受试猪的肌酸激酶含量与空白对照组相比显著升高(P<0.05)，但1倍剂量组、5倍剂量组受试猪与空白对照组相比则无显著性差异；用药45 d时，1倍剂量组受试猪的肌酸激酶含量与空白对照组相比极显著升高(P<0.01)，但3倍剂量组、5倍剂量组与空白对照组受试猪相比却无显著性差异，说明肌酸激酶含量的差异并非口服替米考星肠溶颗粒所致。用药23 d时，5倍剂量组受试猪的葡萄糖量与空白对照组相比极显著增加，这可能与进食的饲料有关。用药23 d时，3倍剂量组、5倍剂量组受试猪的尿素含量与空白对照组相比显著升高，用药45 d时，3倍剂量组受试猪的尿素数值与空白对照组相比显著升高，但其5倍剂量组与空白对照组受试猪相比则不存在显著性差异，说明该差异性变化并非口服替米考星肠溶颗粒所致。根据已经发表的参考资料可知，虽然上述用药组受试猪的某些指标与空白对照组受试猪相比存在差异性改变，但所有检测值均在文献所提到的正常范围内[11]。

2.5 尿液常规指标分析 各组受试猪在用药前1 d、用药23 d和用药45 d时的尿液常规指标检测结果如表4所示。

表4 尿液常规测定结果

续表4

a/10表示每组10个试验动物中，该指标的阳性检出个体数为a。

由表4可知，替米考星肠溶颗粒使用前后，各剂量用药组受试猪尿液中所检测的各项指标与空白对照组相比均无显著差异(P>0.05)；各剂量用药组受试猪的各项指标中的阳性个体检出数所占比例与空白对照组相比也无显著性差异(P>0.05)。

2.6 增重及料重比分析 各组受试猪在用药前和用药45 d后的增重及料重比结果如表5所示。

表5 增重及料重比统计结果

由表5可知，各剂量用药组受试猪的平均增重和料重比与空白对照组受试猪相比均无显著差异,说明替米考星肠溶颗粒的使用对猪的增重无不良影响。

2.7 脏器系数分析 替米考星肠溶颗粒给药45 d后，剖杀所有受试猪，分别对各组的心、肝、脾、肺、肾进行称重并计算脏器系数，结果见表6。

表6 脏器系数结果

由表6可知，各用药组受试猪的脏器系数与空白对照组相比无显著差异。说明替米考星肠溶颗粒以推荐剂量(400 g/1000 kg)至5倍推荐剂量(2000 g/1000 kg)应用于猪对其遗传品质无影响，使用安全。2.8 病理学检查 试验结束后，剖杀所有受试猪，未见明显的脏器肉眼异常和可疑病变。主要脏肝、脾、肺、肾也均未见明显的病理组织学变化(图1-图4)。

A:空白对照组；B:1倍推荐剂量组；C:3倍推荐剂量组；D:5倍推荐剂量组图1 使用替米考星肠溶颗粒后受试猪肝脏的组织病理学结果(HE染色, ×20)

A:空白对照组；B:1倍推荐剂量组；C:3倍推荐剂量组；D:5倍推荐剂量组图2 使用替米考星肠溶颗粒后受试猪脾脏的组织病理学结果(HE染色, ×20)

A:空白对照组；B:1倍推荐剂量组；C:3倍推荐剂量组；D:5倍推荐剂量组图3 使用替米考星肠溶颗粒后受试猪肺脏的组织病理学结果(HE染色, ×20)

A:空白对照组；B:1倍推荐剂量组；C:3倍推荐剂量组；D:5倍推荐剂量组图4 使用替米考星肠溶颗粒后受试猪肾脏的组织病理学结果(HE染色, ×20)

3 讨论

本试验从血常规指标、血凝指标、血清生化指标、尿液常规指标、增重及饲料报酬、脏器系数、组织病理学检查等多方面对受试猪进行了1倍、3倍、5倍推荐剂量替米考星肠溶颗粒的安全性比较试验和分析。结果显示，替米考星肠溶颗粒从1倍推荐剂量(400 g/1000 kg)至5倍推荐剂量(2000 g/1000 kg)临床应用于猪后，对其生理生化指标并未产生显著影响，因此使用该药物是安全可靠的。而且结果也显示，喂服1倍、3倍、5倍推荐剂量的替米考星肠溶颗粒不会影响猪的增重，对猪的主要生产性能不产生影响。

通过对受试猪血液常规检测的分析，尽管发现个别用药剂量组受试猪血液中的中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞数值发生了没有规律性的改变，与空白对照组受试猪相比存在显著的差异，但其变动的数值仍然处在正常数值范围内[9-10]，显然这些数值的改变与投服替米考星肠溶性颗粒无关，推测该变化可能是由于白细胞数量随动物生理状况而出现的变化，亦或是由于剧烈运动、进食和疼痛时出现增多的[12-13]。在受试猪的尿常规检测相中，各剂量组受试猪中存在尿检呈尿胆素原、胆红素阳性的个体，这可能是由于检测结果只能定性而不能定量，而猪的尿液在正常情况下也会含有微量的尿胆素原及胆红素的缘故[13]。另外，阳性个体的存在也可能与采尿前的禁食时间短有关[14]。同时，我们在病理组织学检测中并未观察到受试猪的肾脏有明显的病理组织学损伤，受试猪尿胆素原、胆红素阳性个体的这些改变应该与药物投服无关。

研究表明，替米考星肠溶颗粒毒性小，以1倍至5倍推荐剂量(2000 g/1000 kg)临床应用于猪是安全可靠的。另外，由于三元猪的正常生理生化指标尚缺乏系统报道，本试验所测得的指标可为今后研究三元猪的血液学、尿液学指标提供参考依据。

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(编辑：陈希)

The Safety Test of Enteric-coated Tilmicosin Pellets in Swine

LIN Ye1，LV Ying-jun1，ZHANG Xiao-hui1，SU Ya-nan1，TANG Shu1，SUN Jia-rui1，ZHAO Qi-ling1，LI Jian-sheng1，LIU Ai-ling2，MENG Xiao-bing2，BAO En-dong1*

(1.NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China; 2.RuiBiologicalTechnologyCo.,LTD，Tianjin300300，China)

To evaluate the safety of enteric-coated tilmicosin pellets in swine, forty 25-day old piglets were selected. They were separated into 4 groups randomly, 10 piglets each group. They were fed with one fold, three folds and five folds of recommended dose of enteric-coated tilmicosin pellets which were added into pig feed for 45 consecutive days, respectively. The complete blood count, blood coagulation test, blood biochemical test, urinalysis, gain in body weight, ratio of feed to body gain, ratio of organ weight to body weight and histopathological examinations were performed during the experiment. The results showed that no significant difference was found in all measured parameters between enteric-coated tilmicosin pellets-treated groups and control group, indicating that the enteric-coated tilmicosin pellets have low toxicity and are safe to be used in swine under the five folds of recommended dosage (2000 g/1000 kg)．

tilmicosin; enteric-coated pellets; safety test; swine

林烨，硕士研究生，从事兽医病理学方面研究。E-mail：2015807120@njau.edu.cn

2016-08-29

A

1002-1280 (2016) 10-0022-10

S859.79