黄葵胶囊对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用

张俊峰 林 菊 朱永坚 浦 坚 沈 炎 邱 岭

(东南大学附属中大医院无锡分院肾内科，江苏 无锡 214000)

黄葵胶囊对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用

张俊峰 林 菊 朱永坚 浦 坚 沈 炎 邱 岭

(东南大学附属中大医院无锡分院肾内科，江苏 无锡 214000)

目的探讨黄葵胶囊对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用。方法 健康SPF级Wistar大鼠72只随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、黄葵胶囊低、中、高剂量组，每组12只。观察各组大鼠病理学组织变化，各组大鼠炎症因子和肾功能指标水平变化。结果 正常对照组大鼠肾小球、系膜基质未出现明显病理变化；模型组大鼠肾小球硬化、系膜基质增生；阳性对照组与黄葵胶囊各剂量组肾脏病理变化均较模型组明显减轻；模型组、阳性对照组、黄葵胶囊低、中剂量组肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)含量均较正常对照组明显增加(P<0.05)，而黄葵胶囊高剂量组TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量接近与正常对照组(P>0.05)；阳性对照组、黄葵胶囊低、中、高剂量组TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量较模型组明显降低，黄葵胶囊低、中、高剂量组TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量明显低于阳性对照组，黄葵胶囊中的剂量组TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量明显低于黄葵胶囊低剂量组(P<0.05)。结论 黄葵胶囊可通过降低TNF-α、CRP水平，减轻糖尿病肾病大鼠炎症反应，可通过降低Scr、BUN、UA水平，保护糖尿病肾病大鼠肾脏。

黄葵胶囊；糖尿病肾病

糖尿病肾病最终可致终末期肾衰竭，同时也是糖尿病患者致残致死的重要原因之一。目前，糖尿病肾病发病机制尚不十分明确，认为主要与遗传因素和环境因素等相关，是由于持续高血糖导致的一系列代谢紊乱及肾血流动力学改变〔1，2〕。黄葵胶囊是由黄蜀葵花提炼而成，具有改善血脂代谢紊乱、改善血液黏度、抗感染等作用〔3〕。本研究旨在分析黄葵胶囊对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料 选择健康SPF级Wistar大鼠72只，雌雄各半，体质量(180±20)g，购于辽宁长生生物技术有限公司，动物合格证号：SCD2010-0001。常规饲养1 w，自由饮食、饮水，维持室温为23℃～25℃，相对湿度70%。黄葵胶囊(江苏苏中药业集团股份有限公司生产，国药准字Z19990040)，盐酸贝那普利片(深圳信立泰药业股份有限公司，国药准字H20054771)。

1.2 糖尿病肾病大鼠模型〔4〕采用高糖高脂饲料喂养，且腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)造模，72 h尾静脉取血检测空腹血糖，复制糖尿病模型，再根据自然病程发展，2 w后制造早期糖尿病肾病模型。本组大鼠均造模成功。

1.3 方法

1.3.1 分组 72只大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、黄葵胶囊低、中、高剂量组，每组12只，均雌雄各半。

1.3.2 给药方法 大鼠给药剂量根据人体(g/kg)与大鼠体表面积比值等效剂量换算。正常对照组给予等量生理盐水灌胃，1次/d；模型组于造模成功后给予等量生理盐水灌胃，1次/d；阳性对照组于造模成功后给予盐酸贝那普利片0.9 mg/kg灌胃，1次/d；黄葵胶囊低、中、高剂量组于造模成功后分别给予黄葵胶囊0.5、1.0、2.0 g/kg灌胃，1次/d。

1.3.3 病理组织学观察 取大鼠左侧固定部分肾组织100 g，10%甲醛固定，常规石蜡包埋行苏木素-伊红(HE)染色，于光学显微镜下观察组织病理学变化。

1.3.4 各组大鼠炎症因子水平检测 包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、C-反应蛋白(CRP)。末次给药后各组大鼠不禁水禁食12 h，给予大鼠腹腔注射麻醉，腹主动脉取血3 ml，装于含有适量抗凝剂的试管内，缓慢摇动试管12次以混匀血液，确定试管已封闭，并且避免样本在离心过程中蒸发，3 000 r/min离心10 min，分离血浆，置于-20℃保存待测，采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定。

1.3.5 各组大鼠肾功能指标水平检测 肾功能指标包括血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)。末次给药后各组大鼠不禁水禁食12 h，腹腔注射麻醉，腹主动脉取血3 ml，装于不含抗凝剂的试管内，室温下自然凝集20～30 min，离心分离血清，-20℃保存待测，采用全自动生化分析仪测定Scr、BUN、UA。

1.4 统计学方法 应用SPSS19.0软件，采用独立样本t检验，双因素方差分析。

2 结 果

2.1 各组大鼠一般活动情况 正常对照组大鼠活动、体毛、反应正常，大鼠均未死亡；模型组大鼠毛色暗淡，精神萎靡，反应迟钝，出现多食、多饮、多尿、消瘦等症状，不明原因死亡4只；阳性对照组和黄葵胶囊各剂量组较模型组症状明显改善。其中阳性对照组死亡3只、黄葵胶囊低剂量组死亡1只。

2.2 各组大鼠病理组织学变化 正常对照组大鼠肾小球、系膜基质未出现明显病理变化；模型组大鼠肾小球硬化、系膜基质增生；阳性对照组与黄葵胶囊各剂量组肾脏病理变化均较模型组明显减轻。见图1。

图1 各组大鼠病理组织学变化(HE,×400)

2.3 各组大鼠炎症因子水平比较 模型组、阳性对照组、黄葵胶囊低、中剂量组TNF-α、CRP含量均较正常对照组明显增加(P<0.05)，而黄葵胶囊高剂量组TNF-α、CRP含量接近正常对照组(P>0.05)；阳性对照组、黄葵胶囊低、中、高剂量组TNF-α、CRP含量较模型组明显降低，黄葵胶囊低、中、高剂量组TNF-α、CRP含量明显低于阳性对照组，黄葵胶囊中、高剂量组TNF-α、CRP含量明显低于黄葵胶囊低剂量组(P<0.05)。见表1。

2.4 各组大鼠肾功能指标水平变化比较 模型组、阳性对照组、黄葵胶囊低、中剂量组Scr、BUN、UA含量均较正常对照组明显增加(P<0.05)，而黄葵胶囊高剂量组Scr、BUN、UA含量接近正常对照组(P>0.05)；阳性对照组、黄葵胶囊低、中、高剂量组Scr、BUN、UA含量较模型组明显降低，黄葵胶囊低、中、高剂量组Scr、BUN、UA含量低于阳性对照组，黄葵胶囊中、高剂量组Scr、BUN、UA含量低于低剂量组(P<0.05)。见表1。

组别nTNF⁃α(μg/L)CRP(mg/L)Scr(μmol/L)BUN(mmol/L)UA(mmol/L)正常对照组122 56±0 373 61±0 576 28±1 3276 48±12 9369 81±6 38模型组86 37±0 651)9 82±0 871)16 79±2 141)173 24±17 911)105 49±7 891)阳性对照组95 51±0 471)2)8 97±0 791)2)13 29±1 871)2)149 82±16 521)2)95 27±6 811)2)黄葵胶囊低剂量组114 78±0 531)2)3)7 58±0 711)2)3)10 93±1 681)2)3)127 39±14 391)2)3)84 21±5 421)2)3)黄葵胶囊中剂量组123 59±0 671)2)3)4)5 67±0 681)2)3)4)8 43±1 431)2)3)4)101 27±15 421)2)3)4)76 72±6 491)2)3)4)黄葵胶囊高剂量组122 61±0 412)3)4)5)3 72±0 602)3)4)5)6 17±1 502)3)4)5)77 83±10 922)3)4)5)68 61±7 522)3)4)5)

与正常对照组比较：1)P<0.05；与模型组比较:2)P<0.05；与阳性对照组比较:3)P<0.05；与黄葵胶囊低剂量组比较:4)P<0.05；与黄葵胶囊中剂量组比较:5)P<0.05

3 讨 论

目前认为糖尿病肾病发生发展是糖代谢异常、脂代谢异常、生长因子、细胞因子、炎性细胞浸润、血流动力学改变、血管活血物质以及炎症递质水平增加等综合作用的结果〔5〕。糖尿病肾病病理特征主要为肾小球体积肥大、基底膜增厚以及系膜基质增加，从而致使肾小球硬化〔6〕。

目前，临床上对于糖尿病肾病尚无特效的治疗药物。黄葵胶囊由黄蜀葵花提炼而成，黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵的花，具有清热利湿、拔毒排脓作用〔7〕。现代药理研究表明，黄蜀葵花有效成分为黄酮类化合物，具有抗感染消除、消除尿蛋白作用，且能够抵抗血小板聚集，改善肾小球系膜增厚和机体高凝状态作用，可减轻尿蛋白量，降低BUN、Scr，还能够有效改善机体微炎症状态以及肾脏功能〔8，9〕。此外，黄葵胶囊还可增加毛细血管通透性，消除机体过度自由基，减轻机体水肿，减轻肾小管间质病变〔10〕。本研究结果表明，黄葵胶囊可通过降低TNF-α、CRP含量改善机体微炎症状态，且黄葵胶囊的作用呈剂量依赖性，提示黄葵胶囊可通过降低Scr、BUN、UA含量减轻尿蛋白量，进而改善大鼠肾脏功能。

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2 李 慧，方敬爱，张晓东.益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1及Smad7表达的影响〔J〕.中国中西医结合肾病杂志，2014；15(3)：194-6.

3 罗 勤，吴 巍，申 涛，等.脉血康胶囊联合黄葵胶囊治疗糖尿病肾病疗效观察〔J〕.实用中西医结合临床，2011；11(5)：11-2.

4 郭维文，黎 帅，陈玲玲，等.黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制〔J〕.中国病理生理杂志，2014；30(2)：351-4.

5 Andresdottir G，Jensen ML，Carslensen B，etal.Improved prognosis of diabetic nephropathy in type 1 diabetes〔J〕.Kidney Intern，2015；87(2)：417-26.

6 袁 玲，南 一，徐 俊，等.回回甘松饮对早期糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用〔J〕.中国实验方剂学杂志，2014；20(3)：109-13.

7 刘 洪，钟陵云，李荣亨.黄葵胶囊治疗糖尿病肾病的疗效观察和机制探讨〔J〕.中国中西医结合肾病杂志，2010；11(7)：633-4.

8 于 敏，史耀勋，田 谧，等.黄葵胶囊治疗糖尿病肾病机制探讨〔J〕.吉林中医药，2012；32(8)：829-31.

9 李 静，石理华.黄葵胶囊治疗糖尿病肾病患者尿蛋白的临床观察〔J〕.海南医学，2013；24(21)：3200-1.

10 范 维，许 琳，杨 俊，等.雷公藤多苷联合黄葵胶囊治疗糖尿病肾病临床疗效观察〔J〕.中国中西医结合肾病杂志，2012；13(10)：903-4.

〔2016-01-19修回〕

(编辑 袁左鸣)

江苏省自然科学基金项目(SBK201122365)

林 菊(1970-)，女，硕士，副主任医师，主要从事肾小球疾病、糖尿病肾病、慢性肾功能不全研究。

张俊峰(1978-)，男，硕士，主治医师，主要从事慢性肾脏病、糖尿病肾病发病机制与防治研究。

R69

A

1005-9202(2016)24-6071-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.011