浅谈临床定量PCR实验室的质量控制

王秀丽 徐振兴

（厦门中医院检验科，福建 厦门 361009）

浅谈临床定量PCR实验室的质量控制

王秀丽 徐振兴

（厦门中医院检验科，福建 厦门 361009）

定量PCR；质量控制

PCR聚合酶链反应（polymerase chain reaction）自问世以来以其高灵敏性、高特异性、高效性在某些疾病如感染性疾病、肿瘤、法医学、及科学研究等领域得到了广泛的应用。PCR的高敏感性和高特异性已经体现了其临床诊疗价值，正因如此，对其检测中的错误也会有放大作用，往往引起严重的后果。在医患矛盾较为突出的今天，做好PCR检验质量控制，发出正确的PCR检测结果尤为重要。本文对实践工作中的心得和体会进行了总结，对PCR检验的各个环节进行质量控制，探讨PCR检验分析中的质量控制方法及实验效果。

1 分析前的质量控制

1.1 实验室环境：严格遵守“各区独立、注意风向”，禁止使用中央空调。

1.2 仪器设备的管理：仪器设备的正确使用、维护和校准是保证PCR结果准确的前提，对实验室中的仪器设备如扩增仪、离心机、加样器、真空泵、生物安全柜等建立一套规范化、标准的操作程序。

1.3 试剂的贮存与比对：试剂一般贮存在-20 ℃以下。通过肉眼观察试剂盒应完整无破损，标识清楚——厂家名称、批准文号、生产日期、有效期等；在更换不同批号的试剂时，本实验室还建立了不同批次试剂间的比对程序；试剂现用现配，避免提前配好。

1.4 检验者素质：PCR都是微量操作，要想获得稳定可靠的检测结果，操作人员就需要一定的专业技术知识与经验，要尽可 能做到知其然又知其所以然。从实际工作上来看，不同的操作者所获得的测定结果往往差异也很大，因此，人员培训相当重要，尤其是内部针对性的培训[1]。

1.5 标本的采集、运送、接收及编号：标本采集、运送、接收及编号是准确发放报告的基础。有些患者特别是肝病患者很多都需要长期治疗和定期复查，经济负担非常重，有时会出现冒用医保卡的现象，这就需要相关人员严格执行对各类标本的查对。

2 分析中的质量控制

2.1 PCR仪器的保养和校正：PCR仪是PCR扩增的关键仪器，仪器的保养是PCR仪能正常工作的前提。实验室建立了标准化操作程序，本实验室采用的是罗氏LightCycler480实时荧光PCR仪，严格按照仪器的说明书及仪器的标准操作程序进行日、周、月保养。仪器是否处于一个良好的工作状态是检验结果正确与否的重要保障。

2.2 主要污染来源与防污染措施：做好PCR最重要的工作就是防治污染。实验室中主要的污染来源：①实验室样本中含有的待测微生物；②PCR扩增产物引起的残留污染。PCR扩增引起扩增产物累积增加，如果不采取有效的防污措施，在很短的时间内累积的气溶胶化的扩增产物就会污染实验室中的耗材、试剂和仪器设备等，造成严重的后果。污染重在预防，为了避免实验室污染，获得准确、可靠的检测结果，实验室应制定一套具体可行的污染防护措施并严格执行。防污措施：①严格实验室分区及严格遵守实验室工作制度，不同分区的物品如加样器、笔等不得混用，建立外来人员登记程序；②在每次实验后可使用10%次氯酸钠清洗实验室包括工作台面、加样器、离心机等，然后再用70%乙醇或清水洗去残留次氯酸钠。本实验室每次实验结束后都将实验操作板放入10%次氯酸钠溶液中浸泡1 h，而且盛有次氯酸钠的容器还要定期更换，本实验室曾经有段时间阴性对照曲线总是有抬头，经多方查找原因，确定是没有及时更换浸泡实验操作板的容器引起的；③紫外线照射。

2.3 室内质控：室内质控可以监测与控制实验室工作的精密度，提高常规检验工作中批内、批间样本检验结果的一致性，是用以确定检验结果是否可靠、可否发出的一项重要工作[2]。仪器、试剂、耗材、核酸提取操作等因素都会影响质控品的检测[3]。在每次实验过程中按照本实验室的室内质控要求测定阴性质控，高、低值2种浓度的质控血清。质控样本的摆放顺序在每一次扩增检验时都相应顺延，以保证核酸提取和扩增中所有检测结果都符合质控要求。

2.4 室间质控：室间质量控制是实验室质量控制体系中重要组成部分，是保证患者的检验结果及其报告的准确性和可靠性，以及各个实验室间检测结果的可比性的重要手段。随着PCR技术的发展与普及，PCR检测的室间质控越来越重要。本实验室每年都积极参加省临检中心和卫生部的室间质评，并对反馈回来的室间质评成绩进行认真分析和总结，及时改正存在的问题。

2.5 利用患者就诊资料进行质控比对：检测结果与临床情况的相关性如何，需要掌握患者的主要临床情况，包括患者的病情与变化情况；检测项目和其他项目的相关性，如大三阳患者在未经抗病毒治疗下DNA很少阴性；前后检测结果的对比，将本次检测结果与上几次检测结果进行比较等，都是可行的方法[4]。这些可以通过医师或者患者的沟通来做到，或者通过LIS检验系统的“报告查询”功能来实现，从而保证实验结果的正确发出。

3 分析后的质控

这一阶段质量保证的主要工作如下：检验结果的正确发出，咨询服务，以及对检验样品的保存及处理[5]。

3.1 报告单的及时发出：检验报告单要求及时、准确、完整地发出，保证医师能够及时的获得检验结果。同时需要有报告签发和审核程序。检验者还应切记保护患者隐私。

3.2 咨询服务：实验室应主动的努力做好咨询服务这项工作，在解释检验结果时应耐心、细致、有理有据。

3.3 检验样品的保存和处理：每天实验结束后，每份样本吸取0.5mL血清到离心管中，放入2～8 ℃冰箱内保存7 d。后由卫生人员集中处理。

[1] 李金明.实时荧光PCR技术[M].北京:人民军医出版社,2012:143.

[2] 李金明.感染性疾病免疫测定的室内质量控制[J].医学检验与临床,2007,18(1):3-6.

[3] 陈松.法医DNA实验室的DNA污染和防范[J].刑事技术,2007(3): 16-20.

[4] 徐忠玉.发光免疫分析的质量控制[J].检验医学与临床,2010,7 (3):280-281.

[5] 叶应抚,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006:113.

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