柿叶药材的鉴别及总黄酮提取工艺探索

陈 吼， 龙凤来， 李黔蜀

(杨凌职业技术学院， 陕西 杨凌 712100)



柿叶药材的鉴别及总黄酮提取工艺探索

陈 吼， 龙凤来， 李黔蜀

(杨凌职业技术学院， 陕西 杨凌 712100)

摘要：目的：优选柿叶总黄酮的提取工艺。方法：采用乙醇加热回流提取法进行正交试验。结果：确定柿叶中总黄酮 的最佳提取条件为乙醇浓度为70%，料液比为1∶40，回流提取时间为1 h，提取两次。结论：A3B2C2D2条件下柿叶总黄酮提取效果理想，为柿叶药材的临床应用及市场开发提供了实验基础。

关键词：柿叶； 总黄酮； 提取

柿叶入药始见于明《滇南本草》记载“经霜叶敷臁疮”,《本草再新》记载用于“治咳嗽吐血,止渴生津”。主要用于止血、降压、治疗冠心病、心绞痛及胃溃疡出血、肺结核出血、功能性子宫出血等内脏出血病症[1]。现代药理研究表明,柿叶还具有抗氧化、抑制特异性皮炎、增强免疫功能、减肥降脂、抗癌、抗菌等作用[2]。柿叶化学成分较复杂,主要含有黄酮、三萜、酚类等化合物[3]。国内外研究表明,以柿叶为原料制取的柿叶制剂、柿叶茶、柿叶提取物及柿叶黄酮苷具有清热解毒、清血利尿、抑菌、止血、降血脂、降低胆固醇、抑制肿瘤生长等多方面的生理功能[4-6]。

查阅相关文献资料，柿叶的主要有效成分是黄酮类化合物。本实验经过单因素考察和正交试验分析，最终得到柿叶的总黄酮可行提取工艺。

1仪器和试剂

WFH-201B紫外透射反射仪； UV-1102；RE-3000旋蒸器；KH-400KDE超声清洗器；乙醇(分析纯)；G型薄层层析硅胶(青岛海洋化工有限公司)；槲皮素标准品(中国药品生物制品检定所，批号：10081-200406)及山奈酚标品(110861-200808)； 柿叶采集自陕西关中地区，经鉴定为柿树属植物柿的干燥叶。

2方法与结果

2.1原药材的鉴定

精密称取柿叶药材(过 40 目筛)2.0 g，照10版药典薄层色谱法取供试药液(标为1、3)和槲皮素标品(2、4)、山奈酚(5)；以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)溶液为展开剂,365 nm紫外检测，结果与对照品显相同颜色，但斑点不清晰。以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶1)溶液为展开，斑点清晰可见如图1。

2.2工艺参数考察

2.2.1供试品溶液的制备取过 40 目筛的柿叶药材粉末2.0 g，按表3设计回流提取，合并滤过，浓缩，加乙醇定容至 50 mL量瓶中作为供试品备用。

图1　柿叶药材的鉴定

2.2.2对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品 4.9 mg于 10 mL 量瓶加乙醇稀释至刻度摇匀，备用。

2.2.3标准曲线制作精密吸取对照品0,0.3，0.6，0.9，1.2，1.5 mL，分置于10 mL 量瓶，加蒸馏水 4 mL，5% NaNO20.3 mL,混匀，放置 6 min，加10% Al(NO3)30.3 mL,混匀，放置 6 min，再加4% NaOH 4.0 mL,加水至刻度摇匀，放置 15 min，在 510 nm 测吸收度 A。以对照品含量为横坐标， A 为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为A=0.110C+0.003，r2=0.998，结果如图2。

图2　槲皮素标准曲线

2.2.4L9(34)正交试验采用四因素三水平的正交试验对乙醇浓度(A)、溶剂用量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)进行考察，设计方案如表1；实验结果如表2、3。

表1　正交试验因素水平表

2.3结论与讨论

从方差分析和直观分析可以看出，提取次数对柿叶总黄酮有效部位影响最大，各因素最佳组合为A3B2C2D2，即乙醇浓度70%，加40倍量，提取1 h,2次。本实验预考察了提取方法，选择超声提取、加热回流提取、索式提取，结果加热回流提取法提取率明显高于其他方法。经验证，正交实验确定的最佳提取工艺稳定可行，此工艺仅为实验室小试阶段，但可为实际工业生产提供参考依据。

表2　直观分析表

表3　方差分析表

参考文献：

[1]Jiang W K. Persimmon leaves-resource with huge exploiturepotential [J].J Guiyang Coll Tradit Chin Med, 1997,19(2):52.

[2]张秋燕,王 亮,肖 峰,等.柿叶药理作用研究进展[J].河北职工医学院学报, 2004,21(3):39-40.

[3]Mallavadhani U V, Panda A K, Rao Y R. Pharmocology andchemotaxonomy ofDiospyros[J].Phytochemistry, 1998,49(4):901-951.

[4]吴小南,汪家梨.柿叶茶抗氧化、降血脂保健作用的初步实验[J].食品科学,1998,19(11):39-41.

[5]杨建雄,原江锋,李发荣.柿叶黄酮的体外抗氧化作用研究[J].营养学报, 2003，(2):215-217.

[6]欧阳平,贝伟剑,赖文岩,等.柿叶黄酮对缺氧复氧以及晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响[J].第一军医大学学报, 2003, (7):680-682.

Identification of the Persimmon Leaf and Exploration on

Its Technology of Extracting Total Flavonoids

CHEN Hou, LONG Feng-lai, LI Qian-shu

(Yangling Vocational and Technical College, Yangling, Shaanxi 712100, China)

Abstract:In order to optimize the technology of extracting persimmon leaf total flavonoids, the orthogonal experiment was conducted through the method of ethanol heating reflux extraction. The result shows the best extraction condition of total flavonoids of persimmon leaves is that the methanol concentration is 70%, the ratio of material liquid is 1∶40, reflux extraction time is 1 h, extraction for two times. It is concluded that under the condition of the A3B2C2D2，the experiment effect of persimmon leaf flavonoids extraction is ideal, which provides the experimental basis for the clinical application of persimmon leaf as medicinal materials and market development.

Key words:persimmon leaves； total flavonoids； extracting

中图分类号：TQ461

文献标识码：A

文章编号：1671-9131(2015)04-0030-02

作者简介：陈 吼(1983-)，陕西永寿人，讲师。主要从事中药制药技术的教学与研究工作。