薄层色谱法鉴别康肾颗粒中茜草研究

周翠兰　曾晓燕　姚远忠广州一品红制药有限公司，广东　广州　510760

薄层色谱法鉴别康肾颗粒中茜草研究

周翠兰曾晓燕姚远忠
广州一品红制药有限公司，广东广州510760

【摘要】目的:建立康肾颗粒中茜草的薄层色谱定性鉴别方法，为将茜草鉴别纳入其质量标准提供依据。方法:采用薄层色谱法对康肾颗粒中茜草进行定性鉴别。结果:在薄层色谱中，供试品溶液在与对照药材及对照品相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结论:本薄层色谱鉴别方法验证结果较好，专属性强、灵敏度高、重现性、耐用性好，可用于康肾颗粒的质量控制。

【关键词】康肾颗粒;茜草;薄层鉴别

康肾颗粒具有补脾益肾，化湿降浊的功效，临床用于脾肾两虚所致的水肿、头痛而晕、恶心呕吐、畏寒肢倦、轻度尿毒症。该药源于彝族民间验方，临床使用多年，疗效好，很受广大患者的欢迎。该品种收载于国家中成药标准汇编内科肾系分册，处方由连钱草、忍冬藤、石韦、茜草等12味药材组成。其中茜草为臣药，具有凉血、止血、祛痰、通经等功效[1]，是传统的止血药，与方中诸药配伍可活血祛邪，又可应于止血生津、调通气路、改善尿毒症症状。康肾颗粒现行质量标准只做了5味药材的鉴别，不含茜草鉴别。为了提高中成药质量控制水平、提高药品标准、确保产品质量，本实验参照《中药质量标准分析方法验证指导原则》[2]及相关文献[3]，采用薄层色谱鉴别方法对处方中的茜草进行了定性鉴别。

1　仪器与材料

1.1仪器ZF－1紫外分光仪(上海精科实业有限公司); SB－5200D超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);电子天平(广州市授科仪器科技有限公司)。

1.2试药与材料大叶茜草素对照品(批号: 121049－201003)、茜草对照药材(批号: 110884－200604)购自中国药品生物制品检定所;康肾颗粒(批号: 20140603、20140604、20140605、20140606，广州一品红制药有限公司);硅胶G板:青岛海洋化工厂、德国默克公司生产;所用试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1供试品溶液的制备取康肾颗粒12g，研细，加甲醇30ml，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水20ml、盐酸2ml，加热20min，放冷，用乙酸乙酯20ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.2阴性对照溶液的制备按处方比例称取除茜草之外的其它药材，照康肾颗粒的制备工艺制成缺茜草空白颗粒，取缺茜草空白颗粒12g，照上述供试品溶液的制备方法同法制备成阴性对照溶液。

2.3对照药材溶液的制备取茜草对照药材0.5g，照上述供试品溶液的制备方法同法处理，作为对照药材溶液。

2.4对照品溶液的配制取大叶茜草素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

2.5TLC鉴别照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验[2]，吸取对照品、对照药材溶液各2μl，阴性对照溶液、供试品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－正已烷－甲酸－甲醇(10∶2∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

2.6方法验证

2.6.1专属性照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，采用缺茜草阴性对照、对照品、对照药材进行实验，结果供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，本法专属性较好。

2.6.2灵敏度照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，比较供试品不同点样量(1、2、5、10、15、20μl)对斑点的影响。结果随着点样量的增加，斑点的清晰度增加，点样1μl也能检出，但斑点非常模糊，点样5μl以上斑点明显，点样到20μl薄层板有点超载，但斑点未拖尾，结果表明本方法灵敏度较好，点样量可以选择5～10μl。实验选择的是普通薄层板，使用高效板可减少点样量。

2.6.3重现性照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，同时点样三个批号(批号: 20140603、20140604、20140605)的样品，结果三批供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，本法重现性较好。

2.6.4耐用性

2.6.4.1不同厂家的薄层板考察照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，采用两个不同厂家的硅胶G薄层板及自制板进行点样，结果显示不同厂家的薄层板Rf值有所差异，但不影响薄层鉴别。

2.6.4.2不同相对湿度考察照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，平行点样四个薄层板，分别在RH18%、RH42%、RH65%、RH88%四个相对湿度条件下展开，比较TLC图谱的差异，结果RH18%～88%范围内检视结果良好，故常规实验室条件下相对湿度对此鉴别试验没有影响。

2.6.4.3不同温度的考察照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，平行点样三个薄层板，分别在5、25、35℃三个温度条件下展开，比较TLC图谱的差异，结果显示环境温度5～35℃不影响本品薄层鉴别。

2.6.4.4检视时间的考察文献报道[4]，甲醇溶液中大叶茜草素在光照条件下含量明显下降，因此在薄层板展开晾干之后，在实验室常规光照环境下，在0min、30min、1h、2h四个不同时间点观察了荧光强度，结果发现随着时间的变化，大叶茜草素的荧光强度下降，斑点颜色变淡，展开晾干后2h对照品斑点颜色明显变淡，供试品已经观察不到

斑点。故建议样品配制后置于棕色试剂瓶中避光保存，薄层板晾干之后即刻观察。

2.7结果供试品色谱中，在与对照品和对照药材相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，色谱图见图1。

图1　康肾颗粒中茜草薄层色谱图

3　讨论

康肾颗粒处方由12味中药组成，组分复杂，影响鉴别的干扰因素较多，样品的处理方法非常重要。试验甲醇提取、乙酸乙酯提取多种方法，最后确定采用甲醇提取，再乙酸乙酯萃取。采用茜草对照药材、大叶茜草素对照品作为对照，对不同展开剂进行了筛选:(1)石油醚－丙酮(5∶1);(2)乙酸乙酯－正已烷－甲酸－甲醇(10∶28∶1∶0.5);(3)二氯甲烷－乙酸乙酯－正已烷－甲酸－甲醇(20∶10∶8∶1∶0.5)。结果展开剂(2)操作方便，斑点分离清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。

研究结果表明，所建立的薄层色谱鉴别方法对康肾颗粒中茜草的定性鉴别专属性强，提取方法和展开效果良好，方法灵敏度高，重现性、耐用性均达到鉴别检验要求，可较好地用于康肾颗粒的质量控制。本法也可用于原药材的鉴别检验，具有良好的通用性。

参考文献

[1]杨连荣．茜草的化学成分与药理作用研究进展[J]．中医药信息，2007，24(1): 21－23．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:附录130－131．

[3]欧阳荣．肝达康片中茜草的薄层色谱鉴别方法探讨[J]．中国中医药信息杂志，2001，8(10): 38．

[4]刘广．大叶茜草素在甲醇溶液中的稳定性研究[J]．华西药学杂志，2010，25(3): 318－320．

收稿日期:( 2014.10.28)

作者简介:周翠兰(1978－)，女，硕士研究生，执业药师，从事新药研发工作。

【文章编号】1007－8517(2015)03－0030－02

【文献标志码】A

【中图分类号】R286.0