茜草中总蒽醌的提取工艺优化

卫亚丽+钟箫+汤洪敏

摘要：利用紫外可见分光光度仪，在400～800 nm范围内对1，8-二羟基蒽醌的吸收光谱进行扫描，确定最大吸收波长；探讨提取次数、提取浓度、提取时间、料液比等单因素对茜草中总蒽醌的提取效果，在此基础上，通过L9（34）正交试验，确定总蒽醌的最佳提取工艺。结果表明，茜草总蒽醌的最大吸收波长为511 nm；对照品1，8-二羟基蒽醌的吸收度与浓度线性关系良好，相关系数r=0.999 46；茜草总蒽醌最佳提取工艺为料液比1 g ∶12 mL、提取时间1.5 h、提取次数3次、乙醇浓度70%。

关键词：紫外分光光度法；茜草；总蒽醌；提取

中图分类号：R284.2 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0268-02

茜草（Rubia Cordifolia L.）为茜草科植物，别称活血草、锯子草、拉拉草、缠老鼠、粘粘草、血见愁等，多年生攀援草本，主产于陕西、江苏、安徽、河南、山东，春、秋2季采挖，根及根茎干燥药用，性寒、味苦，归肝经，具有凉血、止血、祛瘀、通经之功效，临床上用于吐血、崩漏下血、外伤出血、经闭瘀阻、关节痹痛、跌打肿痛等病症^[1-2]，特别对心脑血管疾病疗效显著。

蒽醌类物质不仅在药用方面有极大的发展潜力，而且可作为天然色素用于食品添加剂，安全性高，具有营养和药用价值，逐渐受到人们的重视^[3-5]。茜草蒽醌类物质的研究报道较多^[6-11]，大多是对其组成和结构进行鉴定，对提取工艺的研究报道较少。采用正交试验，研究4因素（乙醇浓度、提取次数、时间、料液比）3水平醇提工艺，采用紫外可见分光光度仪测定总蒽醌含量，确定最佳醇提条件，为工业化提取茜草总蒽醌提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器材料

UV-cary300型紫外可见分光光度仪；W201B恒温水浴锅，上海中生生物技术有限公司生产；AEG-45SM电子天平（1/100 000），日本岛津公司生产；1，8-二羟基蒽醌，中国药品生物制品检定所提供；R-201型旋转蒸发仪，上海中生科技有限公司生产；无水乙醇、三氯甲烷及其他试剂均为分析纯。茜草购自贵阳市医药公司，产地陕西。

1.2 试验方法

1.2.1 最大吸收波长测定 精确称取1，8-二羟基蒽醌标准品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；吸取1 mL水浴蒸干，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，摇匀使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸镁-甲醇溶液作空白溶液，用紫外可见分光光度计对1，8-二羟基蒽醌标准溶液在500～800 nm波长范围内进行光谱扫描，确定其最大吸收波长。

1.2.2 标准曲线的绘制 精确称取1，8-二羟基蒽醌标准品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；分别精确吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL减压蒸干，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，摇匀使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸镁-甲醇溶液作空白，在波长511 nm处测量吸光度，并绘制标准曲线。

1.2.3 茜草总蒽醌的提取和含量测定^[6]精确称取茜草10.0 g，按照不同料液比、提取时间、提取次数和提取剂浓度对茜草总蒽醌进行提取，制成提取液并记录其体积；精确量取10.0 mL提取液于50 mL圆底烧瓶中，减压回收溶剂，加20%硫酸溶液20 mL、10%三氯化铁溶液100 mL，沸水加热回流水解60 min，并不断摇振；回流液冷却至室温，依次加入30、20、20 mL三氯甲烷，回流10 min，吸出三氯甲烷层，反复抽提至三氯甲烷层无色，合并三氯甲烷层，减压回收溶剂；残渣加入0.5%醋酸镁-甲醇液溶解，25 mL容量瓶定容，于511 nm处测定吸光度，根据标准曲线读出样品中总蒽醌化合物的含量。

1.2.4 茜草总蒽醌单因素试验 （1）不同提取次数。准确称取4份茜草样品，在料液比1 g ∶10 mL、提取时间2 h、70%乙醇 100 mL 作为浸提剂的条件下，分别提取1、2、3、4次，过滤、合并所得滤液即为提取液，对提取液进行测定。（2）不同浸提剂浓度。准确称取4份茜草样品，在料液比1 g ∶10 mL、提取时间1 h、提取次数为1次的条件下，分别以浓度为60%、70%、75%、80%乙醇溶液进行提取，并对提取液进行测定。（3）不同提取时间。准确称取4份茜草样品，在料液比为 1 g ∶10 mL、乙醇浓度70%、提取次数为1次的条件下，分别提取1.0、1.5、2.0、3.0 h，对提取液进行测定。（4）不同料液比。准确称取4份茜草样品，在乙醇浓度70%、提取次数为1次、时间1.0 h的条件下，分别以料液比为1 g ∶6 mL、1 g ∶8 mL、1 g ∶10 mL、1 g ∶12 mL加入乙醇溶液进行提取，对提取液进行测定。

1.2.5 正交试验优化工艺设计 以总蒽醌化合物含量为评价指标，采用正交试验设计法L9（34）对茜草样品进行总蒽醌的提取，考察茜草总蒽醌最优提取工艺（表1）。

为B、C、D，即提取时间﹥提取次数﹥料液比﹥乙醇浓度；总蒽醌最佳提取条件为A2B3C3D2，即浸提时间为1.5 h、提取次数为3次、乙醇浓度为70%、料液比为1 g ∶12 mL。在最优提取条件下，茜草总蒽醌的提取率为12.45%。

3 小结

茜草中含有丰富的蒽醌类化合物，本试验详细探讨茜草中蒽醌类物质的提取工艺，为茜草的进一步开发利用提供了有益的参考。虽然提取的次数和时间越多越好，但结合生产实践，最佳提取工艺为浸提时间为1.5 h、提取次数为3次、乙醇浓度为70%、料液比为1 g ∶12 mL，此时，总蒽醌的提取率最高，为12.45%。

参考文献：

[1]国家药典委员会. 中国药典：一部[M]. 2010版. 北京：中国医药科技出版社，2010，218.

[2]杨连荣，周庆华，张哲锋，等. 茜草的化学成分与药理作用研究进展[J]. 中医药信息，2007，24（1）：21-23.

[3]张 琳，彭 亮，胡本祥. 茜草的化学成分研究进展[J]. 现代中医药，2008，28（2）：52-54.

[4]余旭东，杨季菱. 茜草与茜草炭药理作用比较研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2007，13（9）：53-56.

[5]许兰芝，赵世琴，胡庆伟，等. 茜草总蒽醌抗炎抗风湿作用及机制[J]. 潍坊医学院学报，2002，24（1）：11-13.

[6]陈 星，王 侃，单鸣秋，等. UPLC测定茜草炭中4种醌类成分的含量[J]. 中国中药杂志，2012，37（19）：2922-2925.

[7]陈小全，杨晓东，邵辉莹，等. 超声波作用下提取茜草色素及稳定性实验[J]. 泰山医学院学报，2013，34（3）：173-176.

[8]浦益琼，王 冰，张 彤，等. 大孔树脂柱层析法制备茜草总醌提取物的实验研究[J]. 中成药，2013，35（9）：1900-1905.

[9]卫亚丽，梁 芳，汤洪敏. 中药茜草中总蒽醌含量的测定[J]. 贵州农业科学，2011，39（8）：51-53.

[10]苏静慧，吕强三，李红霞. 超声波法提取茜草中蒽醌成分[J]. 河北理工大学学报：自然科学版，2011，33（4）：101-104.

[11]浦益琼，王 冰，张 彤，等. 茜草提取物中大叶茜草素测定的方法研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：94-96.endprint

摘要：利用紫外可见分光光度仪，在400～800 nm范围内对1，8-二羟基蒽醌的吸收光谱进行扫描，确定最大吸收波长；探讨提取次数、提取浓度、提取时间、料液比等单因素对茜草中总蒽醌的提取效果，在此基础上，通过L9（34）正交试验，确定总蒽醌的最佳提取工艺。结果表明，茜草总蒽醌的最大吸收波长为511 nm；对照品1，8-二羟基蒽醌的吸收度与浓度线性关系良好，相关系数r=0.999 46；茜草总蒽醌最佳提取工艺为料液比1 g ∶12 mL、提取时间1.5 h、提取次数3次、乙醇浓度70%。

关键词：紫外分光光度法；茜草；总蒽醌；提取

中图分类号：R284.2 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0268-02

茜草（Rubia Cordifolia L.）为茜草科植物，别称活血草、锯子草、拉拉草、缠老鼠、粘粘草、血见愁等，多年生攀援草本，主产于陕西、江苏、安徽、河南、山东，春、秋2季采挖，根及根茎干燥药用，性寒、味苦，归肝经，具有凉血、止血、祛瘀、通经之功效，临床上用于吐血、崩漏下血、外伤出血、经闭瘀阻、关节痹痛、跌打肿痛等病症^[1-2]，特别对心脑血管疾病疗效显著。

蒽醌类物质不仅在药用方面有极大的发展潜力，而且可作为天然色素用于食品添加剂，安全性高，具有营养和药用价值，逐渐受到人们的重视^[3-5]。茜草蒽醌类物质的研究报道较多^[6-11]，大多是对其组成和结构进行鉴定，对提取工艺的研究报道较少。采用正交试验，研究4因素（乙醇浓度、提取次数、时间、料液比）3水平醇提工艺，采用紫外可见分光光度仪测定总蒽醌含量，确定最佳醇提条件，为工业化提取茜草总蒽醌提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器材料

UV-cary300型紫外可见分光光度仪；W201B恒温水浴锅，上海中生生物技术有限公司生产；AEG-45SM电子天平（1/100 000），日本岛津公司生产；1，8-二羟基蒽醌，中国药品生物制品检定所提供；R-201型旋转蒸发仪，上海中生科技有限公司生产；无水乙醇、三氯甲烷及其他试剂均为分析纯。茜草购自贵阳市医药公司，产地陕西。

1.2 试验方法

1.2.1 最大吸收波长测定 精确称取1，8-二羟基蒽醌标准品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；吸取1 mL水浴蒸干，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，摇匀使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸镁-甲醇溶液作空白溶液，用紫外可见分光光度计对1，8-二羟基蒽醌标准溶液在500～800 nm波长范围内进行光谱扫描，确定其最大吸收波长。

1.2.2 标准曲线的绘制 精确称取1，8-二羟基蒽醌标准品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；分别精确吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL减压蒸干，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，摇匀使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸镁-甲醇溶液作空白，在波长511 nm处测量吸光度，并绘制标准曲线。

1.2.3 茜草总蒽醌的提取和含量测定^[6]精确称取茜草10.0 g，按照不同料液比、提取时间、提取次数和提取剂浓度对茜草总蒽醌进行提取，制成提取液并记录其体积；精确量取10.0 mL提取液于50 mL圆底烧瓶中，减压回收溶剂，加20%硫酸溶液20 mL、10%三氯化铁溶液100 mL，沸水加热回流水解60 min，并不断摇振；回流液冷却至室温，依次加入30、20、20 mL三氯甲烷，回流10 min，吸出三氯甲烷层，反复抽提至三氯甲烷层无色，合并三氯甲烷层，减压回收溶剂；残渣加入0.5%醋酸镁-甲醇液溶解，25 mL容量瓶定容，于511 nm处测定吸光度，根据标准曲线读出样品中总蒽醌化合物的含量。

1.2.4 茜草总蒽醌单因素试验 （1）不同提取次数。准确称取4份茜草样品，在料液比1 g ∶10 mL、提取时间2 h、70%乙醇 100 mL 作为浸提剂的条件下，分别提取1、2、3、4次，过滤、合并所得滤液即为提取液，对提取液进行测定。（2）不同浸提剂浓度。准确称取4份茜草样品，在料液比1 g ∶10 mL、提取时间1 h、提取次数为1次的条件下，分别以浓度为60%、70%、75%、80%乙醇溶液进行提取，并对提取液进行测定。（3）不同提取时间。准确称取4份茜草样品，在料液比为 1 g ∶10 mL、乙醇浓度70%、提取次数为1次的条件下，分别提取1.0、1.5、2.0、3.0 h，对提取液进行测定。（4）不同料液比。准确称取4份茜草样品，在乙醇浓度70%、提取次数为1次、时间1.0 h的条件下，分别以料液比为1 g ∶6 mL、1 g ∶8 mL、1 g ∶10 mL、1 g ∶12 mL加入乙醇溶液进行提取，对提取液进行测定。

1.2.5 正交试验优化工艺设计 以总蒽醌化合物含量为评价指标，采用正交试验设计法L9（34）对茜草样品进行总蒽醌的提取，考察茜草总蒽醌最优提取工艺（表1）。

为B、C、D，即提取时间﹥提取次数﹥料液比﹥乙醇浓度；总蒽醌最佳提取条件为A2B3C3D2，即浸提时间为1.5 h、提取次数为3次、乙醇浓度为70%、料液比为1 g ∶12 mL。在最优提取条件下，茜草总蒽醌的提取率为12.45%。

3 小结

茜草中含有丰富的蒽醌类化合物，本试验详细探讨茜草中蒽醌类物质的提取工艺，为茜草的进一步开发利用提供了有益的参考。虽然提取的次数和时间越多越好，但结合生产实践，最佳提取工艺为浸提时间为1.5 h、提取次数为3次、乙醇浓度为70%、料液比为1 g ∶12 mL，此时，总蒽醌的提取率最高，为12.45%。

参考文献：

[1]国家药典委员会. 中国药典：一部[M]. 2010版. 北京：中国医药科技出版社，2010，218.

[2]杨连荣，周庆华，张哲锋，等. 茜草的化学成分与药理作用研究进展[J]. 中医药信息，2007，24（1）：21-23.

[3]张 琳，彭 亮，胡本祥. 茜草的化学成分研究进展[J]. 现代中医药，2008，28（2）：52-54.

[4]余旭东，杨季菱. 茜草与茜草炭药理作用比较研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2007，13（9）：53-56.

[5]许兰芝，赵世琴，胡庆伟，等. 茜草总蒽醌抗炎抗风湿作用及机制[J]. 潍坊医学院学报，2002，24（1）：11-13.

[6]陈 星，王 侃，单鸣秋，等. UPLC测定茜草炭中4种醌类成分的含量[J]. 中国中药杂志，2012，37（19）：2922-2925.

[7]陈小全，杨晓东，邵辉莹，等. 超声波作用下提取茜草色素及稳定性实验[J]. 泰山医学院学报，2013，34（3）：173-176.

[8]浦益琼，王 冰，张 彤，等. 大孔树脂柱层析法制备茜草总醌提取物的实验研究[J]. 中成药，2013，35（9）：1900-1905.

[9]卫亚丽，梁 芳，汤洪敏. 中药茜草中总蒽醌含量的测定[J]. 贵州农业科学，2011，39（8）：51-53.

[10]苏静慧，吕强三，李红霞. 超声波法提取茜草中蒽醌成分[J]. 河北理工大学学报：自然科学版，2011，33（4）：101-104.

[11]浦益琼，王 冰，张 彤，等. 茜草提取物中大叶茜草素测定的方法研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：94-96.endprint

摘要：利用紫外可见分光光度仪，在400～800 nm范围内对1，8-二羟基蒽醌的吸收光谱进行扫描，确定最大吸收波长；探讨提取次数、提取浓度、提取时间、料液比等单因素对茜草中总蒽醌的提取效果，在此基础上，通过L9（34）正交试验，确定总蒽醌的最佳提取工艺。结果表明，茜草总蒽醌的最大吸收波长为511 nm；对照品1，8-二羟基蒽醌的吸收度与浓度线性关系良好，相关系数r=0.999 46；茜草总蒽醌最佳提取工艺为料液比1 g ∶12 mL、提取时间1.5 h、提取次数3次、乙醇浓度70%。

关键词：紫外分光光度法；茜草；总蒽醌；提取

中图分类号：R284.2 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0268-02

茜草（Rubia Cordifolia L.）为茜草科植物，别称活血草、锯子草、拉拉草、缠老鼠、粘粘草、血见愁等，多年生攀援草本，主产于陕西、江苏、安徽、河南、山东，春、秋2季采挖，根及根茎干燥药用，性寒、味苦，归肝经，具有凉血、止血、祛瘀、通经之功效，临床上用于吐血、崩漏下血、外伤出血、经闭瘀阻、关节痹痛、跌打肿痛等病症^[1-2]，特别对心脑血管疾病疗效显著。

蒽醌类物质不仅在药用方面有极大的发展潜力，而且可作为天然色素用于食品添加剂，安全性高，具有营养和药用价值，逐渐受到人们的重视^[3-5]。茜草蒽醌类物质的研究报道较多^[6-11]，大多是对其组成和结构进行鉴定，对提取工艺的研究报道较少。采用正交试验，研究4因素（乙醇浓度、提取次数、时间、料液比）3水平醇提工艺，采用紫外可见分光光度仪测定总蒽醌含量，确定最佳醇提条件，为工业化提取茜草总蒽醌提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器材料

UV-cary300型紫外可见分光光度仪；W201B恒温水浴锅，上海中生生物技术有限公司生产；AEG-45SM电子天平（1/100 000），日本岛津公司生产；1，8-二羟基蒽醌，中国药品生物制品检定所提供；R-201型旋转蒸发仪，上海中生科技有限公司生产；无水乙醇、三氯甲烷及其他试剂均为分析纯。茜草购自贵阳市医药公司，产地陕西。

1.2 试验方法

1.2.1 最大吸收波长测定 精确称取1，8-二羟基蒽醌标准品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；吸取1 mL水浴蒸干，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，摇匀使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸镁-甲醇溶液作空白溶液，用紫外可见分光光度计对1，8-二羟基蒽醌标准溶液在500～800 nm波长范围内进行光谱扫描，确定其最大吸收波长。

1.2.2 标准曲线的绘制 精确称取1，8-二羟基蒽醌标准品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；分别精确吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL减压蒸干，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液，摇匀使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸镁-甲醇溶液作空白，在波长511 nm处测量吸光度，并绘制标准曲线。

1.2.3 茜草总蒽醌的提取和含量测定^[6]精确称取茜草10.0 g，按照不同料液比、提取时间、提取次数和提取剂浓度对茜草总蒽醌进行提取，制成提取液并记录其体积；精确量取10.0 mL提取液于50 mL圆底烧瓶中，减压回收溶剂，加20%硫酸溶液20 mL、10%三氯化铁溶液100 mL，沸水加热回流水解60 min，并不断摇振；回流液冷却至室温，依次加入30、20、20 mL三氯甲烷，回流10 min，吸出三氯甲烷层，反复抽提至三氯甲烷层无色，合并三氯甲烷层，减压回收溶剂；残渣加入0.5%醋酸镁-甲醇液溶解，25 mL容量瓶定容，于511 nm处测定吸光度，根据标准曲线读出样品中总蒽醌化合物的含量。

1.2.4 茜草总蒽醌单因素试验 （1）不同提取次数。准确称取4份茜草样品，在料液比1 g ∶10 mL、提取时间2 h、70%乙醇 100 mL 作为浸提剂的条件下，分别提取1、2、3、4次，过滤、合并所得滤液即为提取液，对提取液进行测定。（2）不同浸提剂浓度。准确称取4份茜草样品，在料液比1 g ∶10 mL、提取时间1 h、提取次数为1次的条件下，分别以浓度为60%、70%、75%、80%乙醇溶液进行提取，并对提取液进行测定。（3）不同提取时间。准确称取4份茜草样品，在料液比为 1 g ∶10 mL、乙醇浓度70%、提取次数为1次的条件下，分别提取1.0、1.5、2.0、3.0 h，对提取液进行测定。（4）不同料液比。准确称取4份茜草样品，在乙醇浓度70%、提取次数为1次、时间1.0 h的条件下，分别以料液比为1 g ∶6 mL、1 g ∶8 mL、1 g ∶10 mL、1 g ∶12 mL加入乙醇溶液进行提取，对提取液进行测定。

1.2.5 正交试验优化工艺设计 以总蒽醌化合物含量为评价指标，采用正交试验设计法L9（34）对茜草样品进行总蒽醌的提取，考察茜草总蒽醌最优提取工艺（表1）。

为B、C、D，即提取时间﹥提取次数﹥料液比﹥乙醇浓度；总蒽醌最佳提取条件为A2B3C3D2，即浸提时间为1.5 h、提取次数为3次、乙醇浓度为70%、料液比为1 g ∶12 mL。在最优提取条件下，茜草总蒽醌的提取率为12.45%。

3 小结

茜草中含有丰富的蒽醌类化合物，本试验详细探讨茜草中蒽醌类物质的提取工艺，为茜草的进一步开发利用提供了有益的参考。虽然提取的次数和时间越多越好，但结合生产实践，最佳提取工艺为浸提时间为1.5 h、提取次数为3次、乙醇浓度为70%、料液比为1 g ∶12 mL，此时，总蒽醌的提取率最高，为12.45%。

参考文献：

[1]国家药典委员会. 中国药典：一部[M]. 2010版. 北京：中国医药科技出版社，2010，218.

[2]杨连荣，周庆华，张哲锋，等. 茜草的化学成分与药理作用研究进展[J]. 中医药信息，2007，24（1）：21-23.

[3]张 琳，彭 亮，胡本祥. 茜草的化学成分研究进展[J]. 现代中医药，2008，28（2）：52-54.

[4]余旭东，杨季菱. 茜草与茜草炭药理作用比较研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2007，13（9）：53-56.

[5]许兰芝，赵世琴，胡庆伟，等. 茜草总蒽醌抗炎抗风湿作用及机制[J]. 潍坊医学院学报，2002，24（1）：11-13.

[6]陈 星，王 侃，单鸣秋，等. UPLC测定茜草炭中4种醌类成分的含量[J]. 中国中药杂志，2012，37（19）：2922-2925.

[7]陈小全，杨晓东，邵辉莹，等. 超声波作用下提取茜草色素及稳定性实验[J]. 泰山医学院学报，2013，34（3）：173-176.

[8]浦益琼，王 冰，张 彤，等. 大孔树脂柱层析法制备茜草总醌提取物的实验研究[J]. 中成药，2013，35（9）：1900-1905.

[9]卫亚丽，梁 芳，汤洪敏. 中药茜草中总蒽醌含量的测定[J]. 贵州农业科学，2011，39（8）：51-53.

[10]苏静慧，吕强三，李红霞. 超声波法提取茜草中蒽醌成分[J]. 河北理工大学学报：自然科学版，2011，33（4）：101-104.

[11]浦益琼，王 冰，张 彤，等. 茜草提取物中大叶茜草素测定的方法研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：94-96.endprint