S100P与Ki-67在肾盂尿路上皮癌中的表达及意义

李　云， 李胜水，许　华，韩晓春，刘海霞，王丽丽，张凤梅，李双标，赵　倩

(1.河北省沧州中西医结合医院，河北　沧州　061001；2.河北省沧州市妇幼保健院 病理科,河北　沧州　061001；3.河北省吴桥县中西医结合医院妇产科，河北　吴桥　061800)

S100P与Ki-67在肾盂尿路上皮癌中的表达及意义

李云1， 李胜水1，许华1，韩晓春1，刘海霞2，王丽丽3，张凤梅1，李双标1，赵倩1

(1.河北省沧州中西医结合医院，河北沧州061001；2.河北省沧州市妇幼保健院 病理科,河北沧州061001；3.河北省吴桥县中西医结合医院妇产科，河北吴桥061800)

[摘要]目的:观察S100P与Ki-67蛋白在肾盂尿路上皮癌组织中的表达，分析其与肾盂尿路上皮癌临床病理特征的关系及探讨两者与肾盂尿路上皮癌发生、发展的相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肾盂尿路上皮癌与46例正常肾盂黏膜组织中S100P、Ki-67的表达情况。结果：S100P在肾盂尿路上皮癌组织中的阳性表达率(86.5% 45/52)明显高于正常对照组(30.4% 14/46)(P<0.05)，同样Ki-67在肾盂尿路上皮癌组织中的阳性表达率(80.8% 42/52)明显高于正常对照组(26.1% 12/46)(P<0.05)；S100P、Ki-67在肾盂癌组织中的阳性表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)，却与病理分级、临床分期有关(P<0.05)；在肾盂癌组织中，S100P与Ki-67表达呈正相关，具有统计学意义(P<0.05)。结论：S100P与Ki-67过表达提示其在肾盂尿路上皮癌的发生、发展中具有重要作用，因此联合检测两者可能有助于判断肾盂尿路上皮癌生物学行为及预后评估。

[关键词]肾盂尿路上皮癌；S100P；Ki-67；免疫组织化学

Abstract：ObjectiveTo Investigate the expressions of S100P protein and Ki-67 in urothelial carcinoma of the renal pelvis,and analyze their expression correlation and clinical significance in urothelial carcinoma of the renal pelvis.MethodThe expressions of S100P and Ki-67 were analyze by immunohistochemical in 52 cases of urothelial carcinoma of the renal pelvis and 46 cases of normal pelvis mucosa.ResultsThe positive rate of S100P protein in urothelial carcinoma of the renal pelvis(86.5% 45/52)was significantly higher than that in normal pelvis mucosa(30.4% 14/46)(P<0.05)，Similarly，The positive rate of Ki-67 protein in urothelial carcinoma of the renal pelvis(80.8% 42/52)was significantly higher than that in normal pelvis mucosa(26.1% 12/46)(P<0.05)；The expression of S100P、Ki-67 was not associate with patient′ gender and age(P>0.05)，but was associate with pathological degree andclinical stages(P<0.05)；meanwhile there was a positive correlation between expression of S100P and Ki-67.ConclusionThe over-expression of S100P、Ki-67 is important for the development and progression of renal previc carcinoma，and It is helpful to detect the two markers together for predicting urothelial carcinoma of the renal pelvis biological behavior and prognosis.

通讯作者：李胜水

[收稿日期：2015-02-12编校：郑英善]

Expressions of S100P and Ki-67 in urothelial carcinoma of the renal pelvis and their clinical significanceLIYun1，LISheng-shui1,XUHua1,etal(1.CangzhouHospitalforIntegratedChineseandWesternMedicine，Cangzhou061001,China；2.Departmentofpathology,Cangzhoumaternalandchildhealthcare，Cangzhou061001,China;3.Departmentofgynaecologyandobstetrics,WuqiaoHospitalforIntegratedChineseandWesternMedicine，Wuqiao061800,China)

Key Words:Urothelial carcinoma of the renal pelvis；S100P；Ki-67；Immunohistochemistry

尿路上皮癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，研究发现有5%发生在上尿路，其中肾盂尿路上皮癌相对多见，且近年来有逐年升高的趋势。肾盂尿路上皮癌易发生浸润转移，较膀胱癌相比预后较差。因此对尿路上皮癌的发生、发展的研究已成为热点和重点[1]。近年来有文献报道S100P可以参与细胞增殖、分化、免疫反应的活动，与肿瘤的浸润和转移有密切关系[2]。Ki-67作为增殖细胞相关核抗原，是界定细胞凋亡和增殖的有价值的生物标记物，能准确反应肿瘤细胞增生情况，可以判断肿瘤恶性程度及预后[3]。本文应用免疫组化SP法检测S100P、Ki-67在肾盂癌中的表达及两者的相互关系，研究其与肾盂尿路上皮癌临床病理因素的关系。

1资料与方法

1.1标本：选自河北省沧州中西医结合医院2009年5月~2014年5月肾盂尿路上皮癌52例手术切除的标本，其中男35例，女17例，年龄42~86(平均59)岁。术后经病理明确诊断为肾盂尿路上皮癌，所有患者术前均未接受放疗、化疗等治疗。标本分别在无坏死癌灶及远端正常黏膜组织取材，其中正常肾盂黏膜组织46例作为对照组。

1.2主要试剂：兔抗人S100P多克隆抗体(即用型，香港Abcam公司)，鼠抗人Ki-67多克隆抗体(即用型)、SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂均购于福州迈新公司。

1.3方法：采用免疫组化SP方法染色，将切片脱蜡后进行微波修复，用山羊血清封闭后，滴加S100P抗体置于4℃冰箱过夜。用已知阳性组织做阳性对照，以PBS替代一抗做阴性对照。 次日加入二抗孵育，DAB显色，苏木精复染。

1.4免疫组织化学结果判定：S100P主要定位于胞浆中，少数在胞核或胞膜表达，呈棕黄色或棕褐色。光镜下随机选择5~10个视野，计数100~200个癌细胞，胞浆及胞核黄染者为阳性，计算出阳性细胞百分率。结果评分标准：阳性细胞数<5%为0分，5%~25%为1分，26%~50%为2分，51%~75%为3分，> 75% 为4分；染色强度判定，无色为0分，淡黄色为1分，黄色或棕黄色为2分，棕褐色或褐色为3分。染色强度与阳性细胞百分比的乘积<1分为阴性，1~3分为弱阳性，4~6分为阳性，>6分为强阳性。Ki-67表达于细胞核，染色为棕黄色。随机选取5个高倍视野，共计数1 000个细胞中阳性细胞数值并以百分数确定，根据着色强度、范围和分布分为4级，无明显阳性细胞为阴性，阳性细胞数<25%为弱阳性，阳性细胞数25%~50%为阳性，阳性细胞数>50%为强阳性。

1.5统计学分析：应用SPSS17.0统计软件，使用χ2检验进行率的比较，相关关系采用Spearman等相关分析，P<0.05表示具有统计学意义。

2结果

2.1正常肾盂组织与肾盂尿路上皮癌组织中S100P、Ki-67两种蛋白表达情况：S100P、Ki-67两种蛋白在正常对照组与肾盂尿路上皮癌组表达均有显著性差异(P<0.05)。S100P在肾盂尿路上皮癌组织中的阳性表达率(86.5% 45/52)明显高于正常对照组(30.4% 14/46)，同样Ki-67在肾盂尿路上皮癌组织中的阳性表达率(80.8% 42/52)明显高于正常对照组(26.1% 12/46)。

表1肾盂尿路上皮癌组织中S100P、Ki-67表达与病理临床特征的关系

生物学指标例数S100P - + 　 　 Ki-67 - + 　 　 年龄(岁) <602746896687 ≥602537784678性别 男29478107688 女2337673767病理分级① 低级别1653537333 高级别3621012123101211临床分期② 非肌层浸润性1453336233 肌层浸润性3821213114111310

2.2S100P、Ki-67与肾盂尿路上皮癌组织的病理分级及临床分期的关系在肾盂尿路上皮癌组织中S100P、Ki-67的阳性表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)却与病理分级、临床分期之间具有统计学意义(P<0.05)。S100P、Ki-67的阳性表达率均随病理分级及临床分期升高而增高。见表1。

2.3S100P、Ki-67在肾盂尿路上皮癌组织中表达的相关性：在肾盂尿路上皮癌中S100P、Ki-67两种蛋白的表达呈正相关，且两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2S100P、Ki-67在肾盂尿路上皮癌组织中表达的相关性(例)

S100PKi-67 + - 合计+39645-347合计421052

3讨论

3.1S100P蛋白在肾盂尿路上皮癌的表达及意义：S100P最初从人类胎盘获得，由95个氨基酸残基组成，属于S100蛋白家族的一个亚型[3]。近来研究证实，S100P不仅在许多肿瘤如胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌及卵巢癌等[4]中高表达，而且与肿瘤的生长、转移密切相关。S100P是作为一种小型钙离子结合蛋白，发现其与钙周期结合蛋白、埃兹蛋白、晚期糖基化终末产物等靶蛋白结合，参与信号转导过程，进而对细胞异常增生、细胞恶变、肿瘤细胞运动性及浸润力增强具有重要作用[5]。Higgins等采用cDNA微阵列技术研究了5例尿路上皮癌和5例前列腺癌中基因表达谱变化，结果发现S100P仅出现在尿路上皮癌中[6]。本研究发现S100P在肾盂尿路上皮癌组织中的表达明显高于正常肾盂组织，说明S100P与肾盂尿路上皮癌的发生有关，而且也发现S100P在不同分期和分级的肾盂尿路上皮癌表达有明显差异，也说明S100P可能参与肾盂尿路上皮癌的进展过程，可作为一个很有价值的新的标志物，用于肾盂尿路上皮癌的诊断及预后评估。

3.2Ki-67蛋白在肾盂尿路上皮癌的表达及意义：Ki-67作为一种与增殖细胞相关的核抗原，存在于细胞周期G1后期、S、G2、M期，参与细胞有丝分裂。Ki-67高表达是细胞增生活跃的重要标志，提示肿瘤的恶性程度越高越容易侵袭、转移及预后较差[7]。本实验研究发现，Ki-67蛋白在肾盂尿路上皮癌组织中的表达明显高于正常肾盂组织，且与病理分级和临床分期有关，这与其他研究结果一致[8]。

3.3S100P与Ki-67两种蛋白表达的相关性：通过对两者的相关性分析，发现在肾盂尿路上皮癌中，我们推测可能细胞内S100P蛋白通过介导Ca2+依赖性的信号传导途径，调节蛋白磷酸化及部分酶的活性，进而调节细胞周期性生长及增殖[9],从而表现为Ki-67蛋白表达增加，但是情况是否如我们推测，以及具体作用机制仍不明确，需要进一步探索研究。

参考文献4

[1]Ehsani L,Osunkoya AO.Expression of MLH1 and MSH2 in urothelial carcinoma of the renal pelvis[J].Tumour Biol,2014，35(9):8743.

[2]Arumugam T1，Logsdon CD.S100P：a novel therapeutic target for cancer[J].Amino Acids，2011，41(4):893.

[3]Stathopoulos GP,Malamos NA,Markopoulos C,et al.The role of Ki-67 in the proliferation and prognosis of breast cancer molecular classification subtypes[J].Anticancer Drugs，2014，25(8):950.

[4]Emoto Y，Kobayshi R，Akatsuka H，et al.Purificati on and characterizati on of a new member of the s100 protein family from human placenta[J].Biochem Biophys Res Commun,1992,182(3):1246.

[5]Barry S，Chelala C，Lines K，et al. S100P is a metastasis-associated gene that facilitates transendothelial migration of pancreatic cancer cells[J].Clin Exp Metastasis，2013，30(3):251.

[6]Higgins JP，Kaygusuz G，Wang L，et al. Placental S100 (S100P) and GATA3：markers for transitional epithelium and urothelial carcinoma discovered by complementary DNA microarray[J].Am J Surg Pathol，2007，31(5):673.

[8]Hashimoto H,Sue Y,Tokumitsu M,et al.Overexpression of c-erbB-2 and p53 oncoprotein in renal pelvic and ureteral carcinomas with reference to the expression of Ki-67 antigen as a proliferation marker[J].Nihon Hinyokika Gakkai Zasshi，1997，88(6):605.