胃癌及癌前病变中COX－2和VEGF－C蛋白表达及COX－2与H.pylori的相关性研究

陈美霓　郭巍　郭浩　郝琴　赵菊梅　魏晓丽　王爱红　庞秋霞

胃癌及癌前病变中COX－2和VEGF－C蛋白表达及COX－2与H.pylori的相关性研究

陈美霓郭巍郭浩郝琴赵菊梅魏晓丽王爱红庞秋霞

【摘要】目的研究COX－2蛋白和VEGF－C蛋白在胃癌及癌前病变中的表达，探讨COX－2蛋白与幽门螺旋杆菌(H.pylori)的相关性。方法应用免疫组化SP法检测胃癌和其他非癌胃黏膜病变组织中COX－2、VEGF－C的阳性表达情况;对所有病例采用甲苯胺蓝染色法测定H.pylori感染状况。结果COX－2、VEGF－C在胃癌中的阳性表达率分别为64.4%，57.7%;胃癌组中H.pylori感染的COX－2表达率较未感染组显著升高(P＜0.01)。在H.pylori感染的胃癌组与不典型增生组、慢性萎缩性胃炎组之间差异均有统计学意义(P＜0.01)。H.pylori感染的胃癌COX－2表达在高－中分化与低分化之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论COX－2、VEGF－C在胃癌组织中存在过度表达; H.pylori感染导致胃癌组织中COX－2的表达上调，促进其他非癌组织胃黏膜病变中COX－2的表达。

【关键词】COX－2; VEGF－C;幽门螺旋杆菌;胃肿瘤;免疫组化

收稿日期:( 2015－03－17) ( 2015－01－09)

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【中图分类号】R 735.2

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386(2015)18－3735－03

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.18.004

【Abstract】Objective To investigate the expression of COX－2 and VEGF－C protein in gastric cancer and precancerous lesions，and to explore the relationship between COX－2 protein and Helicobacter pylori(H.pylori).Methods The expression levels of COX－2 and VEGF－C were detected by immunohistochemistry(SP)in gastric cancer and precancerous lesions.The H.pylori infection status was detected by Toluidine Blue Staining for all the subjects.Results The positive expression rates of COX－2 and VEGF－C in gastric cancer were 57.7%，64.4%，respecticvely.The positive expression rates of COX－2 in gastric cancer with H.pylori infection group were significantly increased，as compared with those in gastric cancer without H.pylori infection group(P＜0.01).Moreover there were significant differences between gastric cancer with H.pylori infection group and atypical hyperplasia group，chronic atrophic gastritis group(P＜0.01).However there were no significant differences in the expression levels of COX－2 in gastric cancer with H.pylori infection group between high－differentiation，median－differentiation and low－differentiation(P＞0.05).Conclusion There exists overexpression of COX－2 and VEGF－C in gastric cancer tissues.Moreover H.pylori infection can result in the up－regulation of COX－2 in gastric cancer tissue，and promot the expression of COX－2 in non cancer gastric mucosal lesions.

项目来源:陕西省卫生厅科学研究项目(编号: 2014D32);延安市科学技术研究发展计划项目(编号: 2013－KW15);陕西省高水平大学建设专项资金资助项目(编号: 2013SXTSO2)

作者单位: 716000陕西省延安市，延安大学医学院实验中心(陈美霓、郝琴、赵菊梅、魏晓丽、王爱红、庞秋霞);延安大学医学院附属医院(郭巍、郭浩)

通讯作者:郭浩，716000陕西省延安市，延安大学医学院附属医院;

E－mail: fir07@ hotmail.com

Study on the expression and significance of COX－2，VEGF－C protein in gastric carcinoma and precancerous lesion

CHENMeini*，GUO Wei，GUO Hao，et al.*Medical Experiment Center，Yan’an Medical College of Yanan University，Shanxi，Yan’an 7160050，China

【Key words】COX－2; VEGF－C; H.pylori; gastric carcinoma; immunohistochemistry

研究显示，胃癌是全球最常见肿瘤第四名，我国的胃癌发病率仍有上升趋势［1］。中国胃癌的防治刻不容缓，幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染导致慢性炎症的发生是胃癌产生、发展的重要因素［2］。本实验对不同胃黏膜病变采用免疫组织化学SP染色法检测中COX －2、VEGF－C的表达，探讨COX－2、VEGF－C在胃癌及癌前病变表达的差异;结合COX－2在非癌组织及胃癌中H.pylori感染的关系，分析COX－2与H.py-

lori之间可能的致癌机制。

1　材料与方法

1.1材料收集2008年1月至2009年12月延安大学医学院附属医院病理科胃癌根治术胃癌标本45例和胃镜活检癌前病变标本107例，其中慢性浅表性胃炎28例、慢性萎缩性胃炎25例、不典型增生54例，包括23例轻度不典型增生，31例中至重度不典型增生。其中胃癌标本男26例，女19例;病理高－中分化30例、低分化15例;无淋巴转移13例，有淋巴转移32例;临床早期29例，晚期16例。

1.2试剂与检测方法兔抗人COX－2多克隆抗体、兔抗人VEGF－C多克隆抗体购于北京中杉生物科技有限公司; SP(含DAB染色液)试剂盒购于武汉博士德生物科技有限公司。采用SP免疫组织化学法，染色步骤严格按试剂盒说明书进行。抗原修复采用枸橼酸钠缓冲液高压热修复。COX－2、VEGF－C均为1∶100稀释，以PBS代替一抗作为阴性对照。H.pylori感染采用甲苯胺蓝染色法。

1.3结果判定由两位病理科医生诊断结果，以试剂公司提供的阳性切片为阳性对照。COX－2、VEGF－C主要为细胞浆着色，以出现棕黄色颗粒为阳性表达。细胞染色强度等级判断标准:无着色为阴性，淡黄色为弱阳性，棕黄色为中等阳性，深棕色为强阳性。H.pylori感染阳性以镜下见到染成蓝紫色典型的螺旋形细菌为准。

1.4统计学分析应用SPSS 16.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1 COX－2、VEGF－C蛋白在胃癌、非胃癌病变中的表达COX－2、VEGF－C在胃癌中的阳性表达率分别为29/45(64.4%)、26/45(57.7%)。COX－2表达在胃癌与慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、轻度不典型增生间差异均有统计学意义(P＜0.05)，胃癌与重－中度不典型增生之间差异无统计学意义(P＞0.05)。VEGF －C表达在胃癌与其他非癌胃黏膜病变组织之间差异均有统计学意义(P＜0.05)。见图1，表1。

图1　COX－2、VEGF－C在胃癌中的阳性表达(SP×400)

2.2 H.pylori感染情况与COX－2蛋白表达的关系

2.2.1不同疾病COX－2表达比较:慢性浅表性胃炎与慢性萎缩性胃炎组、不典型增生组、胃癌组间相比，H.pylori感染率差异有显著性(P＜0.05)。在不同胃组织中，COX－2阳性表达在H.pylori感染与未H.pylori感染之间比较(慢性浅表性胃炎因例数少不进行统计学分析)，慢性萎缩性胃炎组、不典型增生组和胃癌组间差异均有统计学意义(χ2分别为1.103、1.174、

表1　COX－2、VEGF－C蛋白在胃癌、非胃癌病变中的表达例(%)

6.774，P＜0.05)。在H.pylori感染的不同胃组织中(慢性浅表性胃炎因例数少不进行统计学分析)，慢性萎缩性胃炎、不典型增生与胃癌之间比较，差异有统计学意义(χ2分别为7.456、7.323，P＜0.01);慢性萎缩性胃炎、不典型增生组间差异无统计学意义(χ2= 0.236，P＞0.05)。见表2。

表2　H.pylori感染与胃癌、非胃癌病变中COX－2表达的关系例

2.2.2不同分化程度COX－2表达比较: H.pylori感染的胃癌COX－2表达在高－中分化与低分化之间比较差异无统计学意义(P =0.675，P＞0.05)。高－中分化胃癌及低分化胃癌中COX－2表达在有无H.pylori感染间比较差异无统计学意义(P =0.132，P＞0.05)。见表3。

3　讨论

胃癌的演变过程是多因素、多步骤的，从慢性浅表性胃炎→慢性萎缩性胃炎→肠上皮化生→异型增生→胃癌。COX－2为可诱导型，一般正常组织较少表达，但可在炎症中高水平表达。有研究证实，在癌前病变组织中可检测到VEGF－C与COX－2表达［2，3］。COX－2在乳腺癌［4］、结肠癌［5］等组织中高表达。本实验结果显示，VEGF－C与COX－2表达在癌前病变中的表达相对较少，在胃癌组织中呈高表达。VEGF－C在慢性浅表性胃炎，萎缩化生性病变中无表达，在轻度不典型增生组、中－重度不典型增生组、胃癌组呈逐步上升的趋势。在慢性浅表性胃炎，萎缩化生性病变，不典型增生组、胃癌组中COX－2表达呈逐步上升的趋势。除COX－2胃癌组与中－重度不典型增生外，VEGFC、COX－2其余各组与胃癌组相比均有统计学意义(P ＜0.05)。提示VEGF－C与COX－2在癌前病变中有重要作用，VEGF－C、COX－2异常表达很可能是胃癌的发生、发展中的重要危险因素。

表3　H.pylori感染对不同分化程度胃癌COX－2阳性表达的影响例

H.pylori感染是引起胃黏膜炎症重要病因之一。在有H.pylori感染的胃癌中，肿瘤细胞容易发生细胞的迁移和淋巴转移。COX－2在胃癌的发生、发展中密不可分。有学者将胃癌细胞株与H.pylori一同孵育，发现该组胃癌细胞中的COX－2及PGE2表达水平比胃癌细胞株与大肠杆菌共孵育组高［6］。另学者对小鼠制造H.pylori感染模型，再对小鼠进行抗H.pylori治疗，发现小鼠胃黏膜COX－2表达水平与动物体内H.pylori感染状态具有一致的波动［7］。目前H.pylori影响COX－2的机制尚不清楚，可能原因:(1)在H.pylori相关胃癌中，H.pylori导致的胃上皮细胞COX－2启动子甲基化丧失导致细胞凋亡和增殖平衡失调来促进此类胃癌发生［8］;(2)H.pylori与COX－2基因－1195G＞A多态位点的作用复杂，可直接导致COX－2蛋白水平的表达［9］。本实验结果显示，全部病例H.pylori感染率为53.9%，胃癌前病变组H.pylori的检出率最高，下来为胃癌组，其次为浅表性胃炎，说明H.pylori参与了胃癌前病变和胃癌的发展过程。各组感染率与浅表性胃炎组相比较均有统计学意义(P＜0.05)。本次实验结果显示，不同的胃黏膜病变中COX－2阳性表达率与有无H.pylori感染之间差异具有统计学意义(P＜0.05)，胃癌COX－2阳性表达与有无H.pylori感染之间具有显著地统计学差异(P＜0.01)，提示H.pylori感染促进不同胃黏膜COX －2的表达。实验还发现，不同分化程度的胃癌COX －2阳性表达与有无H.pylori感染无统计学差异(P ＞0.05)，认为H.pylori感染对不同分化程度胃癌的COX－2表达无相关。提示H.pylori感染诱导不同胃黏膜病变中COX－2的表达，但与胃癌分化程度无关。总之，H.pylori感染诱发多种致炎因子导致胃部的炎症发生［10］，使COX－2表达的增加。H.pylori通过促进不同胃黏膜病变中COX－2的表达上调，致胃黏膜慢性活动性炎症的加重，促进胃癌的发生，是胃癌的重要致病因素之一。

综上所述，COX－2、VEGF－C共同促进胃癌的淋巴转移，可作为临床判断肿瘤的侵袭性及转移潜能的参考指标。H.pylori与COX－2的复杂交互作用在恶性转化过程中发挥了重要的作用。H.pylori感染可导致胃癌组织中COX－2的表达水平上调，并胃癌发展具有促进的作用。根除H.pylori可抑制胃黏膜病变COX－2表达，是降低胃癌潜在危险的一个重要途径。

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