血清midkine检测在非小细胞肺癌辅助诊断及预后评估中的价值

顾勤花 沈琦斌 李冬 谢忠海 李鸿伟

血清midkine检测在非小细胞肺癌辅助诊断及预后评估中的价值

顾勤花 沈琦斌 李冬 谢忠海 李鸿伟

目的 探讨血清中期因子（S-MK）检测对非小细胞肺癌（NSCLC）辅助诊断的价值。方法选择NSCLC患者120例（观察组），同期因肺部良性肿瘤住院的患者62例（肺良性肿瘤组）及健康对照组64例，采用ELISA法测定观察组患者术前及术后（S-MK）水平，以及肺良性肿瘤组和健康对照组的S-MK水平。结果NSCLC组（术前）S-MK水平为（285．70±20．52）pg/ml，高于肺良性肿瘤组（211．88±15．69）pg/ml和健康对照组（189．06±12．92）pg/ml（t=2．402、3．257，均P＜0．01）。NSCLC组（术后1个月时）S-MK水平（218．26±10．77）pg/ml，低于术前（285．70±20．52）pg/ml，差异有统计学意义（t=3．303，P＜0．01）。结论NSCLC患者S-MK水平升高，且术后出现一定程度的下降，S-MK水平可作为一种临床肿瘤标志物，为NSCLC的诊断、疗效评价提供一定的依据。

中期因子 非小细胞肺癌 肿瘤标记物 预后

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCKC）是最常见的恶性肿瘤之一，约占肺癌总数的80%，但因其极易复发和转移，5年生存率不足15%[1]，因此NSCKC的早期诊断尤为重要。中期因子（Midkine，MK）是一种肝素结合性生长因子，在多种肿瘤细胞和组织中MK呈现高表达[2]，包括肺癌、胃癌、结直肠癌、食管癌和胰腺癌等，而在周边正常组织中MK低表达甚至不表达[3]。此外，在肿瘤早期、潜伏期和癌前病变阶段，MK也呈高表达状态[4]。重要的是MK蛋白是一种分泌型蛋白，当肿瘤组织分泌大量的MK蛋白时，血清MK（serum MK，S-MK）表达水平也会相应升高。已有研究显示，S-MK的表达程度与多种肿瘤的分期相关[5-7]，且与不良预后及转移也密切相关[8]。然而S-MK蛋白表达与NSCKC的相关性鲜有报道。本研究通过检测NSCKC患者S-MK水平，旨在探讨S-MK用于NSCKC辅助诊断及预后评估的意义，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 收集2009年1月至2014年6月本院收治并确诊为NSCKC的患者120例（观察组），其中男72例，女48例，年龄38～77（62.6±14.8）岁；鳞癌58例，腺癌62例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期88例；病理检查均确诊为NSCKC，临床资料完整，术前均未接受放化疗。选择同期因肺部良性肿瘤入住本院的患者62例（肺良性肿瘤组），其中男40例，女22例，年龄35～79（58.2±16.8）岁。另选择同期在本院行健康体检者64例为健康对照组，男40例，女24例，年龄32～74（57.2± 13.8）岁。3组性别、年龄差异均无统计学意义（均P＞0.05）。本研究经本院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法 采集观察组术前及术后1个月时，肺良性肿瘤组和健康对照组体检时外周静脉血5ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，3 000r/min离心10min提取血清，于-80℃冰箱中保存备用。S-MK检测采用EKISA法，Midkine EKISA试剂盒购自美国PeproTech公司，严格按照试剂盒说明书进行操作。将羊抗人MK多克隆包被抗体按每孔100μl加入96孔板中，4℃孵育过夜。次日弃去抗体包被液，用洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入300μl封闭液室温封闭1h。弃去封闭液，用洗涤缓冲液清洗4次。按照说明书配置标准品（2倍倍比稀释）。在空白孔，标准孔和样品孔分别加入100μl稀释液，标准品和样本（各做2个复孔），4℃孵育过夜。次日弃去96孔板中液体，用洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μl检测抗体，室温孵育2h。弃去96孔板中液体，用洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μl Avidin-HRP溶液，室温孵育30min。弃去96孔板中液体，用洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μl 1X TMB溶液，室温孵育30min。每孔加入100μl终止液。用酶联免疫分析仪在405nm波长下检测吸光度（A）值。

1.3 统计学处理 应用GraphPad统计软件，计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验。计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 3组S-MK水平的比较 NSCKC组（术前）S-MK水平为（285.70±20.52）pg/ml，高于肺良性肿瘤组（211.88± 15.69）pg/ml和健康对照组（189.06±12.92）pg/ml（t= 2.402、3.257，均P＜0.01），而肺良性肿瘤组与健康对照组比较差异无统计学意义（t=1.126，P＞0.05）。

2.2 NSCKC组手术前后S-MK水平的比较 NSCKC组术后1个月时S-MK水平（218.26±10.77）pg/ml，较术前明显下降，差异有统计学意义（t=3.303，P＜0.01）。

3 讨论

在过去10年中，全球新靶点、新作用机制的抗肿瘤药物不断涌现，为临床提供了更多用药选择，然而一个客观现实是，现有的抗肿瘤药物对肺癌患者仍只能起到缓解病情的作用。2006年发表在新英格兰医学的一项研究表明，患有NSCKC并在1A期进行手术的患者，其10年生存率高达92%。早期发现肺癌并进行手术是目前唯一有可能治愈肺癌的方法。由于肺癌在早期没有明显的临床特征，肺癌的发现非常困难，大部分有临床特征的患者在诊断时已经是肺癌中晚期，从而失去了最佳的手术机会。目前，低剂量螺旋CT被认为是肺癌高危人群早期筛查的重要工具，然而随着低剂量螺旋CT的广泛应用，其检查结果的高假阳性的弊端逐渐显现。以往的研究也显示目前常用的肿瘤标记物，包括癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）、糖原19-9（CA19-9）检测对肺癌的诊断有一定的价值，但特异性并不高[9]。

MK是肝素结合性生长因子家族中新发现的一类成员，是一种分泌型肝素结合生长因子。近年来的研究显示，MK在多种人类肿瘤组织中高表达，包括肺癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、甲状腺癌、食管癌和胰腺癌等，当肿瘤组织分泌大量的MK蛋白时，S-MK表达水平也会相应升高，并参与恶性肿瘤发生、炎症和组织细胞修复过程，能抑制细胞凋亡，与肿瘤的侵袭、转移、炎性疾病的发生密切相关[10]，而在周边正常组织中MK低表达甚至不表达[3]。此外，MK在肿瘤潜伏期、早期和癌前病变期间也可呈高表达状态，提示MK可能可以作为肿瘤的早期筛查和诊断的工具。本研究结果显示，NSCKC患者（术前）S-MK水平为（285.70± 20.52）pg/ml，均高于肺良性肿瘤组（211.88±15.69）pg/ml和健康对照组（189.06±12.92）pg/ml，这与以往对于NSCKC S-MK表达水平的研究一致[11]。因此，S-MK表达水平可能是一个监测NSCKC发展进程的潜在标志物，也是一个预测肺部占位性质的良好指标。

恶性肿瘤的复发与转移对于患者的预后影响极大，很多研究者尝试各种方式寻找敏感的肿瘤指标用来预测恶性肿瘤的复发和转移，尤其是常规检查无法发现的早期微转移。Shimada等[5]通过比较食管鳞癌手术前后S-MK水平，提示食管鳞癌患者手术后S-MK水平明显下降。同时，Meng等[8]对甲状腺乳头状癌手术前后S-MK水平分析，提示甲状腺乳头状癌术后S-MK水平也明显下降，而且发现S-MK≥300pg/ml的甲状腺乳头状癌患者的5年生存率明显低于S-MK＜300pg/ml的患者。恶性肿瘤患者S-MK水平手术前后的改变提示S-MK可能可以作为肿瘤术后复发的监测指标。因此，为进一步研究S-MK表达水平与NSCKC发展的相关性，本研究对120例行手术治疗的NSCKC患者进行随访，将NSCKC患者术后1个月时S-MK水平与术前进行比较，发现NSCKC组术后S-MK水平（218.26±10.77）pg/ml，低于术前（285.70±20.52）pg/ml，提示S-MK水平可以为NSCKC患者临床疗效评价提供依据，具有一定的临床价值。

总之，本研究结果显示NSCKC患者S-MK水平升高，且术后出现一定程度的下降，S-MK水平可作为一种肿瘤标志物，为NSCKC的诊断、疗效评价提供一定的依据。

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Detection of serum midkine in patients with non-small cell lung cancer and its clinical significance

GU Oinhua, SHEN Oibin, LI Dong. et al. Department of Thoracic Surgery.Huzhou Central Hospital. Huzhou 313000. China

ObjectiveTo detect serum midkine(S-MK)in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC)and to evaluate its clinical significance．MethodsThe S-MK values were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) in 64 healthy controls,62 patients with benign lung disease(LBD),and 120 patients with NSCLC before surgery．The S-MK values were re-examined in NSCLC patients 1 month after surgery．ResultsThe S-MK values in patients with NSCLC were significantly higher than those in patients with LBD or healthy controls(285．70±20．52pg/ml vs．211．88±15．69pg/ml or 189．06± 12．92,P＜0．01)．S-MK significantly decreased in NSCLC patients 1month after surgery(218．26±10．77 pg/ml,P＜0．01)．ConclusionThe S-MK may be a useful serologic tumor biomarker for diagnosis and prognosis of NSCLC．

Midkine Non-small cell lung cancerTumor biomarkerPrognosis

2015-12-25）

（本文编辑：马雯娜）

湖州市级一般公益性科研基金项目（2013GY21）

313000 湖州市中心医院胸外科

顾勤花，E-mail：guqinhua0204@163.com