乌鸡白凤丸抗炎、镇痛及抗应激的药效学研究

乌鸡白凤丸抗炎、镇痛及抗应激的药效学研究

陈家艺，吴清和，黄萍，操红缨*

(广州中医药大学，广州511400)

摘要：目的探讨乌鸡白凤丸抗炎、镇痛及抗应激作用，为其临床应用提供科学的理论依据。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、蛋清致大鼠足趾肿胀实验以及大鼠棉球肉芽肿实验，观察乌鸡白凤丸的抗炎作用；应用小鼠热板法、醋酸扭体法观察该药的镇痛作用；通过小鼠耐疲劳、耐缺氧、耐寒冷实验观察该药的抗应激作用。结果抗炎方面：乌鸡白凤丸可显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度及大鼠致炎后足肿胀度，降低大鼠肉芽肿系数；镇痛方面：乌鸡白凤丸可提高热板法引起的小鼠痛阈值，抑制醋酸所致小鼠扭体反应；抗应激方面：乌鸡白凤丸能增加小鼠负荷游泳时间，延长小鼠常压耐缺氧的存活时间，降低小鼠在低温环境中的死亡率。结论乌鸡白凤丸具有显著的抗炎、镇痛及抗应激作用。

关键词:乌鸡白凤丸；抗炎作用；镇痛作用；抗应激作用

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.012

中图分类号：R965

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2015)03-0256-05

Abstract:ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory, analgesic and anti-stress effects of Wujibaifeng Pills.Methods The anti-inflammatory action of Wujibaifeng Pills was assessed by ear edema induced by using xylene in mice and injected egg white in rats； the analgesic effect was tested by using the rat body torsion test and hot-plate test；antifatigue, anti-anoxia and low temperature-resistant tests were used for evaluating the effects on anti-stress. ResultAnti-inflammatory aspects: Wujibaifeng Pills high-dose can significantly inhibit mouse auricle swelling caused by dimethylbenzene and rats foots swelling， in addition can also decrease the granuloma of rats. Analgesic aspects: Wujibaifeng Pills can increase the pain threshold，inhibit body torsion reaction caused by acetic acid.Stress resistance aspect:Wujibaifeng Pills can obviously increase the weight loaded swimming time in mice，and can prolong the survival time of bearing hypoxia at normal pressure in mice and significantly reduce the mortality rate of mice in the low temperature environment in mice. Conclusion Wujibaifeng Pills have significant anti-inflammatory, analgesic action and can improve the ability of the body′s resistance to stress.

基金项目：中央财政支持地方高校发展专项资金项目(编号：财教[2013]338号)

作者简介：陈家艺，女，在读硕士研究生

收稿日期：(2014-12-22)

Study on the anti-inflammatory, analgesic and anti-stress effect of Wujibaifeng Pills

CHEN Jiayi，WU Qinghe，HUANG Ping，CAO Hongying*(Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 511400，China)

Key words: Wujibaifeng Pills；anti-inflammatory；analgesia；anti-stress

*通信作者：操红缨，女，副教授，博士

乌鸡白凤丸系明代龚廷贤《寿世保元》中乌鸡丸的加减方，由乌骨鸡、人参、黄芪、丹参、当归、白芍、川芎等20味中药组成，集温补、涩敛、滋阴、调和等法为一方，具有补而不滞、温而不燥的特点[1]。近年来，乌鸡白凤丸药理作用研究主要集中在补血、止血、调脂、保肝、治疗慢性前列腺炎及骨质疏松症等方面[2]，但关于乌鸡白凤丸作为妇科良药临床常用于调经止带、抗炎镇痛的药理作用却少见较为全面的药效学研究，缺乏科学的理论依据。因此本研究根据乌鸡白凤丸的临床应用，较为全面地开展了其抗炎镇痛以及提高机体抗应激方面的药效学研究，为其临床应用提供科学的理论依据，也为其进一步的机制探讨奠定基础。

1仪器与材料

1.1仪器YLS-6A智能热板仪(山东省医学科学院)；118-3型电热鼓风远红外恒温干燥箱(萧山永发电器有限公司汝南实验仪器厂)；BS110S电子天平(Sartorius 公司)；TE2000S Nikon倒置荧光数码照相显微镜；三用电热恒温水浴箱(上海跃进医疗器械厂)。

1.2试药乌鸡白凤丸(广州陈李济药厂，批号20070903)；阿司匹林(印尼拜耳公司，批号BTA6EA)；醋酸地塞米松片(浙江仙琚制药股份有限公司，批号071032)；十全大补丸(九芝堂股份有限公司，批号20070921)；二甲苯(Xylene)(天津市富宇精细化工有限公司产品，批号20061117)；水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司，批号T20070725)；青霉素(白云山天心制药股份有限公司，批号060974)；链霉素(华北制药股份有限公司，批号060905)；醋酸(天津市富宇精细化工有限公司，批号070420)。

1.3动物SD系大鼠，由广东省医学实验动物中心提供(合格证号:粤监证字2007A003)；KM系小鼠，由广州中医药大学实验动物中心(合格证号:粤监证字2007A013)提供。

2方法

2.1抗炎作用

2.1.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响昆明种雄性小鼠60只，体质量18～22 g，随机分为对照组、阳性药阿司匹林组及乌鸡白凤丸低、中、高(0.532，1.064和2.129 g·kg-1)剂量组，每组10只。灌胃给药(0.02 mL·g-1)，每天1次，连续3 d，对照组给予等容积蒸馏水。末次给药1 h后，将二甲苯100 μL均匀滴于小鼠右耳两面，左耳不涂作为对照。1.5 h后将小鼠脱颈椎处死，用直径8 mm打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称质量，以左、右耳片质量之差作为肿胀度[3]。

2.1.2对大鼠蛋清性足肿胀的影响SD雄性大鼠60只，体质量180～200 g，随机分为对照组、阳性药阿司匹林组及乌鸡白凤丸低、中、高(0.377，0.755和1.509 g·kg-1)剂量组，每组10只。灌胃给药(0.01 mL·g-1)，每天1次，连续3 d，对照组给予等容积蒸馏水。实验前每只鼠左后足踝关节处用记号笔作一清晰横线，排水法测鼠足正常体积。末次给药1 h后，每鼠左后足跖皮下注射鲜鸡蛋清0.05 mL，测量致炎后1，2，3和4 h的足肿容积，减去基础值，作为足肿胀度。

2.1.3对大鼠棉球肉芽肿的影响SD雄性大鼠60只，体质量180～200 g，随机分为对照组、阳性药地塞米松组及乌鸡白凤丸低、中、高(0.532，1.064和2.129 g·kg-1)剂量组，每组10只。腹腔注射体积分数为10%水合氯醛3.5 mL·kg-1麻醉，胸部皮肤用碘酒消毒，用体积分数75%酒精棉球脱碘后，切开1 cm长小口，将2个20 mg的高压灭菌棉球(经青霉素和链霉素混合液0.2 mL浸泡，烘干)从切口处植入双侧腋下部皮下，随即缝合皮肤。从手术当日开始灌胃给药(0.1 mL·kg-1)，每天1次，对照组给予蒸馏水，连续给药6 d，第7天打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放进烘箱中60 ℃烘干，称质量。将称得的质量减去棉球原质量即得肉芽肿质量，计算肉芽肿系数。

肉芽肿净质量(mg)=干燥后棉球肉芽肿质量(mg)-原棉球质量(mg)

肉芽肿系数(mg/100 g)=肉芽肿净质量(mg)/大鼠体质量(100 g)

2.2镇痛作用

2.2.1热板实验昆明种雌性小鼠60只，体质量18～22 g，使用智能热板仪测定小鼠正常痛阈值2次，选取基础痛阈在5～30 s之间的小鼠，取2次痛阈平均值作为该鼠给药前的基础痛阈值。将动物随机分为对照组、阳性药阿司匹林组、乌鸡白凤丸低、中、高剂量组，每组10只。给药剂量及方式同2.1.1，于末次给药后30，60和120 min分别测小鼠痛阈值，计算痛阈提高百分率，若60 s仍无反应，将小鼠取出，以免烫伤，其痛阈值以60 s计算。

2.2.2对醋酸所致小鼠疼痛的影响昆明种小鼠60只，雌雄各半，体质量18～22 g，随机分为对照组、阳性药阿司匹林组及乌鸡白凤丸低、中、高剂组、每组10只。给药剂量及方式同2.1.1，末次给药后1 h，腹腔注射8 mL·L-1醋酸生理盐水溶液0.2 mL/只，记录20 min内小鼠扭体反应次数[4]。

2.3抗应激作用

2.3.1耐疲劳实验昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为对照组、阳性药十全大补丸组及乌鸡白凤丸低、中、高(剂量同2.1.2)剂量组，灌胃给药(0.02 mL·g-1)，每天1次，连续7 d，对照组给予等容积蒸馏水。末次给药后1 h，将小鼠尾根部负荷10%体质量的铁丝，置于水深20 cm玻璃缸内游泳，观察小鼠游泳力竭死亡时间，记录该时间为小鼠的游泳时间[5]。

2.3.2耐缺氧实验昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为对照组、阳性药十全大补丸组、乌鸡白凤丸低、中、高(剂量同2.1.1)剂量组，灌胃给药(0.02 mL·g-1)，每天1次，连续7 d，对照组给予等容积蒸馏水。末次给药后1 h，将小鼠放入盛有5 g钠石灰的广口瓶内，每次1只，将瓶口封住，立即计时，以停止呼吸为指标观察小鼠存活的时间。

2.3.3耐寒冷实验昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为对照组、阳性药十全大补丸组、乌鸡白凤丸低、中、高剂量组，给药方式及剂量同2.3.2。末次给药后1 h，将各组小鼠(单只)置于-l8℃低温环境中，观察记录l h内各组小鼠死亡数，并计算死亡率。

3结果

3.1抗炎作用

3.1.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响与正常对照组相比，乌鸡白凤丸高剂量可显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.05)，阿司匹林亦可显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.01)。结果见表1。

表1乌鸡白凤丸对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

Tab.1 Effect of Wujibaifeng Pills on ear swelling induced by xylene

组别剂量/g·kg-1耳廓肿胀度/mg对照组-17.18±5.49阿司匹林组0.2009.80±5.22**低剂量0.53215.28±4.29中剂量1.06414.24±5.63高剂量2.12912.88±2.56*

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

3.1.2对大鼠蛋清性足趾肿胀的影响与对照组相比，乌鸡白凤丸低剂量可抑制大鼠致炎后3和4 h的足趾肿胀度(P<0.05)，中、高剂量可明显抑制大鼠致炎后1，2，3和4 h的足趾肿胀度(P<0.05)；阿司匹林亦可明显抑制大鼠致炎后1，2，3和4 h的足趾肿胀度(P<0.05～0.01)。结果见表2。

表2乌鸡白凤丸对大鼠蛋清性足趾肿胀的影响

Tab.2 Effect of Wujibaifeng Pills on rat paw edema induced by egg white

组别剂量/g·kg-1足趾肿胀度/mL1h1h3h4h对照组 —0.81±0.120.61±0.150.58±0.120.57±0.16阿司匹林组0.1000.55±0.08**0.46±0.08*0.36±0.10**0.26±0.07**低剂量 0.3770.79±0.180.70±0.100.41±0.18*0.21±0.13*中剂量 0.7550.60±0.13**0.40±0.25**0.25±0.14**0.14±0.10**高剂量 1.5090.55±0.15**0.42±0.15**0.26±0.15**0.16±0.08**

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

3.1.3对大鼠棉球肉芽肿的影响与对照组相比，乌鸡白凤丸低、中、高剂量均可明显降低大鼠肉芽肿系数(P<0.05～0.01)；地塞米松亦可明显降低大鼠肉芽肿系数(P<0.01)。结果见表3。

表3乌鸡白凤丸对大鼠棉球肉芽肿的影响

Tab.3 Effect of Wujibaifeng Pills on cotton granuloma in rat

组别剂量/g·kg-1肉芽肿系数/mg·g-1对照组-46.78±9.65地塞米松组0.0012917.67±7.35**乌鸡白凤丸低剂量0.27735.41±9.83*乌鸡白凤丸中剂量0.75529.61±10.12**乌鸡白凤丸高剂量1.50930.86±9.17**

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

3.2镇痛作用

3.2.1对热刺激所致小鼠疼痛的影响与对照组相比，乌鸡白凤丸低剂量可增加药后60 min的痛阈提高百分率(P<0.05)，中、高剂量可增加药后60和120 min的痛阈提高百分率(P<0.01)，阿司匹林亦可增加药后30，60和120 min的痛阈提高百分率(P<0.05～0.01)，结果见表4。

表4乌鸡白凤丸对热刺激致小鼠疼痛的影响

Tab.4 Effect of Wujibaifeng Pills on pain induced byheatin mice

组别剂量/g·kg-130min痛阈提高百分率/%60min痛阈提高百分率/%120min痛阈提高百分率/%对照组-3.96±0.21-18.22±2.15-10.47±2.97阿司匹林组0.20051.94±7.15*36.90±2.34**58.78±3.28*乌鸡白凤丸低剂量0.53227.84±5.5211.72±3.08*21.67±4.17乌鸡白凤丸中剂量1.06432.05±5.4327.46±3.67**64.57±10.08**乌鸡白凤丸高剂量2.12935.89±4.6240.44±2.50**65.77±7.76**

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

3.2.2对醋酸所致小鼠疼痛的影响与对照组相比，乌鸡白凤丸低、中、高剂量对醋酸所致小鼠扭体反应具有显著的抑制作用(P<0.05～0.01)，阿司匹林对醋酸所致小鼠扭体反应亦有显著的抑制作用(P<0.01)，结果见表5。

表5乌鸡白凤丸对醋酸致小鼠疼痛的影响

Tab.5 Effect of Wujibaifeng Pills on pain induced by acetic acid in mice

组别剂量/g·kg-1扭体次数对照组—33.5±8.76阿司匹林组0.20016.1±4.82**乌鸡白凤丸低剂量0.53227.1±7.31*乌鸡白凤丸中剂量1.06421.0±5.31**乌鸡白凤丸高剂量2.12917.6±6.45**

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

3.3抗应激作用

3.3.1耐疲劳实验与对照组相比，乌鸡白凤丸低、中、高剂量均可明显增加小鼠负荷游泳时间(P<0.05～0.01)；十全大补丸亦可明显增加小鼠负荷游泳时间(P<0.01)，结果见表6。

表6乌鸡白凤丸对小鼠负荷游泳时间的影响

Tab.6 Effect of WujiBaifeng Pills on loaded swimming time of mice

组别剂量/g·kg-1负荷游泳时间/s对照组—128.40±49.75十全大补丸组4.550272.40±114.13**乌鸡白凤丸低剂量0.532224.40±112.64*乌鸡白凤丸中剂量1.064290.10±108.52**乌鸡白凤丸高剂量2.129244.60±69.00**

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

3.3.2耐缺氧实验与对照组相比，乌鸡白凤丸低、中、高剂量均可明显延长小鼠常压缺氧的存活时间(P<0.05～0.01)；十全大补丸亦可明显延长小鼠常压缺氧的存活时间(P<0.01)，结果见表7。

3.3.3耐寒冷实验与对照组相比，乌鸡白凤丸高剂量和十全大补丸可降低小鼠在低温环境中的死亡率(P<0.05)，结果见表8。

表7乌鸡白凤丸对小鼠耐常压缺氧的影响

Tab.7 Effects of Wujibaifeng Pills on anti-anoxia in mice

组别剂量/g·kg-1存活时间/s对照组-604.20±73.48十全大补丸组4.550723.60±84.63**乌鸡白凤丸低剂量0.532698.90±64.47**乌鸡白凤丸中剂量1.064713.80±52.99**乌鸡白凤丸高剂量2.129671.10±50.67*

注：与对照组相比*P<0.05，**P<0.01。

表8乌鸡白凤丸耐寒冷实验

Tab.8 Effects of Wujibaifeng Pills on anti-cold in mice

组别剂量/g·kg-1死亡率/%对照组- 90十全大补丸组4.550 50*乌鸡白凤丸低剂量0.532 90乌鸡白凤丸中剂量1.064 70乌鸡白凤丸高剂量2.129 50*

注：与对照组相比*P<0.05。

4讨论

炎症是指具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的复杂防御反应，是最基本的病理过程，与多种疾病有着密切的联系，如肺炎、肾炎、肝炎以及部分妇科疾病等[6-7]。在炎症的过程中，一般具有3个明显的时相：急性时相，以质变、渗出及水肿为主；亚急性时相，以白细胞和吞噬细胞的浸润为主；慢性增殖相则以增生为主[8-9]。张新新等[10]通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀法观察得出大叶秦艽花及麻花秦艽花具有显著的抗炎作用。本研究主要采用了针对急性及亚急性时相的动物模型：二甲苯致小鼠耳肿胀法及蛋清致大鼠足趾肿胀法；增殖时相的动物模型：大鼠棉球植入法，较为全面地观察乌鸡白凤丸的抗炎作用。在二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验中，乌鸡白凤丸高剂量组可显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.05)；在蛋清致大鼠足肿胀实验中，乌鸡白凤丸低剂量可抑制大鼠致炎后3和4 h的足肿胀度(P<0.05)，中、高剂量可明显抑制大鼠致炎后1，2，3和4 h的足肿胀度(P<0.05)；在大鼠棉球肉芽肿实验中，乌鸡白凤丸各剂量组可降低大鼠肉芽肿系数(P<0.01～0.05)。结果提示，乌鸡白凤丸可能具有较强的抗炎作用，这可能与乌鸡白凤丸方中各药配伍应用、提高机体免疫力、增强其抗炎作用有关，与其临床应用于治疗炎症(如盆腔炎)等相一致。

镇痛药的药效实验方法很多，主要涉及化学性和物理性刺激两大类。朱玲等[11]通过采用小鼠热板法、醋酸扭体法考察盐酸青藤碱二元醇质体(SHBE)凝胶的镇痛效果，结果显示，SHBE凝胶具有显著的抗炎、镇痛作用，且无明显刺激性。本实验分别采用化学刺激造模即醋酸扭体实验、物理性刺激造模即热板法评价乌鸡白凤丸的镇痛作用。研究结果显示，乌鸡白凤丸各剂量组均能不同程度地增加小鼠痛阈提高百分率、减少扭体反应次数，提示乌鸡白凤丸具有显著的镇痛作用，这与其临床应用于月经不调、痛经等相对应。

抗应激实验中采用了3个经典实验即耐疲劳、耐缺氧、耐寒冷实验，综合评估乌鸡白凤丸抗应激作用。乌鸡白凤丸各剂量均能显著延长小鼠负荷游泳时间、常压耐缺氧存活时间(P<0.05～0.01)，高剂量组亦能显著降低小鼠低温环境中的死亡率(P<0.05)，提示乌鸡白凤丸具有显著的抗应激作用。这可能与方中含有人参、黄芪等提高机体免疫力以及抗应激作用的中药有关。

综上所述，本次研究结果显示，乌鸡白凤丸方中各药配伍应用，可能具有较好的抗炎、镇痛作用，同时还能显著地增强机体的抗应激能力，为其临床应用提供了科学的理论依据，但关于其药理作用机制可能是多方面的，有待于进一步探讨。

参考文献：

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