HPLC法测定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量

HPLC法测定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量

陈健

(重庆市涪陵食品药品检验所，重庆408000)

摘要：目的建立含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量测定的高效液相色谱方法。方法色谱柱为Agilent C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(75∶25)；流速为1.0 mL·min`(-1)；检测波长为321 nm；柱温为30 ℃。结果白花前胡甲素质量浓度在10.13～200.26 μg·mL`(-1)范围内呈良好的线性关系(r=0.999 2)，加样回收率为98.9%，RSD为0.46%(n=6)；白花前胡乙素质量浓度在10.36～200.72 μg·mL`(-1)范围内呈良好的线性关系(r=0.999 1)，加样回收率为98.6%，RSD为0.55%(n=6)。结论该方法简单、准确、重复性好，可用于含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量测定。

关键词:白花前胡甲素；白花前胡乙素；含化上清片；高效液相色谱法

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.010

中图分类号：R927.2

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2015)03-0251-03

Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Hanhuashangqing Tablets. Methods Agilent C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with methanol-water(75∶25) as the mobile phase.The detection wavelength was 321 nm;The flow rate was 1.0 mL·min`(-1). The column temperature was 30 ℃.Results The sample of praeruptorin A in the range of 10.13-200.26 μg·mL`(-1) showed the good linear relation with the peak area (r=0.999 2).The average recovery rate was 98.9%，and RSD was 0.46%(n=6).The sample of praeruptorin B in the range of 10.36-200.72 μg·mL`(-1)showed the good linear relation with the peak area (r=0.999 1).The average recovery rate was 98.6%，with RSD 0.55%(n=6).Conclusion The method is simple, accurate and reproducible.It can be used to determine praeruptorin A and praeruptorin B in Hanhuashangqing Tablets.

收稿日期：(2014-10-29)

Determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Hanhuashangqing Tablets by HPLC

CHEN Jian(Fuling Institute for Food and Drug Control, Chongqing 408000，China)

Key words: praeruptorin A；praeruptorin B；Hanhuashangqing Tablets；HPLC

含化上清片由前胡、桔梗、天花粉等7味中药组成，具有利咽生津、清喉散火的功效。方中的前胡是主药，有效成分为白花前胡甲素和白花前胡乙素等。原标准未作前胡的含量测定[1]，笔者参考文献[2-5]，采用高效液相色谱法对含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量进行测定。

1仪器与试药

1.1仪器安捷伦1260高效液相色谱仪；Sartorius-ME215S电子天平。

1.2试药含化上清片(漳州片仔癀药业股份有限公司，批号20140101， 20140113,20140301)；白花前胡甲素对照品(中国药品生物制品检定所，批号111904-201203，质量分数98.0%)；白花前胡乙素对照品(中国药品生物制品检定所，批号111711-200602，质量分数100.0%)；甲醇为色谱纯(经0.45 μm滤膜过滤)；水为超纯水；其余试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Agilent C18柱；流动相为甲醇-水(75∶25)；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为321 nm；柱温为30 ℃。

2.2溶液制备精密称取白花前胡甲素对照品20.26 mg、白花前胡乙素对照品20.72 mg，置于20 mL量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，作为母液；再精密量取2 mL，置于50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，即得对照品溶液。精密取样品约2 g，置于锥形瓶中，加入三氯甲烷100 mL，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)15 min，放冷，滤过，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按含化上清片制备工艺，制备缺前胡的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

2.3.1阴性干扰实验按拟定的色谱条件，取2.2项下3种溶液，依法进行测定。结果在供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处有一致的色谱峰，阴性对照品溶液无此色谱峰，见图1。

2.3.2线性关系考察取2.2项下的母液对照品，分别精密量取1,5,10,15,20 mL，分别定容于100 mL量瓶中，按2.1项下色谱条件测定，以质量浓度(X)为横坐标、以峰面积(Y)为纵坐标，得回归方程：白花前胡甲素:Y=14 561X+1.455 8,r=0.999 2,质量浓度在10.13～200.26 μg·mL-1范围内线性关系良好。白花前胡乙素:Y=18 911X+43.213，r=0.999 1，质量浓度在10.36～200.72 μg·mL-1范围内线性关系良好。

图1HPLC图

A.阴性对照品； B.对照品； C.供试品 ；1.白花前胡甲素；2.白花前胡乙素

Fig.1 HPLC chromatograms

A.sample withoutRadixpeucedani;B.reference substances;C.sample;1.praeruptorin A;2.praeruptorin B

2.3.3精密度实验取2.2项下对照品溶液，进样量10 μL，连续测定6次，结果白花前胡甲素、白花前胡乙素的峰面积的RSD为0.64%和0.72% (n=6)。

2.3.4重复性实验取批号为20130901的样品，依法制备6份供试品溶液，分别测定含量，白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量的RSD为0.53%和0.57% (n=6)。

2.3.5稳定性实验取同一供试品溶液，分别于制备后0,2,4,8,12和24 h后进样10 μL，考察其稳定性，结果白花前胡甲素、白花前胡乙素峰面积的RSD分别为0.67%和0.73% (n=6)。

2.3.6加样回收实验取批号为20140101的样品6份，精密加入白花前胡甲素对照品(质量浓度为0.040 52 mg·mL-1)和白花前胡乙素对照品(质量浓度为0.041 44 mg·mL-1)适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定，计算回收率,结果白花前胡甲素平均回收率为 98.87%，RSD%为0.46%(n=6)；白花前胡乙素平均回收率为 98．64%，RSD%为0.55(n=6)，结果见表1。

表1回收实验结果

Tab. 1 Results of recovery tests

( n=6)

2.4样品测定按拟定含量测定方法测定3批样品，以外标法计算含量。结果3批(批号20140101，20140113 ，20140301)中含化上清片白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量分别为0.261 2和0.103 1,0.251 8和0.094 2,0.257 5和0.091 6 mg·g-1。

3讨论

取白花前胡甲素和白花前胡乙素对照品溶液，在200～400 nm波长处进行紫外扫描，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素对照品均在320 nm处有最大吸收，参照《中国药典》2010年版一部 “前胡”项下的检测波长，将检测波长定为321 nm。

参考文献：

[1]WS3-B-3217-98，国家药品标准·中药成方制剂第17册[S].

[2]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010:248.

[3]李洪斌，余翔，李洪刚.HPLC法测定尿毒清颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量 [J].西北药学杂志，2012，27(3)：221-222.

[4]赵迪，周悌强，冯素香，等,HPLC-ELSD-UV法同时测定氨酚那敏三味浸膏胶囊中长梗冬青苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量[J].中成药，2012，34(10)：1908-1912.

[5]吴文玲，陈佳佳，刘守金，等，HPLC同时测定前胡中3种香豆素成分的含量[J].中国中药杂志，2009，34(9)：1121-1123.