乳酸左氧氟沙星注射液光学杂质测定的不确定度评定

乳酸左氧氟沙星注射液光学杂质测定的不确定度评定

刘斐1，周维利1，王维剑1，杜亮2

(1.山东省食品药品检验研究院，山东 济南 250101；2.济南军区联勤部疾病预防控制中心，山东 济南 250014)

摘要：目的建立盐酸左氧氟沙星注射液光学杂质测定的不确定度评定方法。方法建立数学模型，对含量测定过程中各影响因素进行分析评估。结果通过计算各变量的不确定度，合成不确定度，最终得出测定结果的扩展不确定度。结论该评定方法适用于高效液相色谱法测定乳酸左氧氟沙星光学杂质的不确定度评定。

关键词：左氧氟沙星；光学杂质；不确定度

基金项目：国家科技重大专项课题-重大新药创制(No.2009ZX09313-023)

作者简介：刘斐，女，副主任药师，研究方向：药物分析，E-mail:827170070@qq.com

通讯作者：杜亮，女，研究方向：药学，Tel:0531-81216507，E-mail:michael19790623@hotmail.com

中图分类号：R927.11文献标识码：A

Evaluation of uncertainty for the optical impurity test of Levofloxacin Lactate Injection

LIUFei1，ZHOUWei-li1，WANGWei-jian1，DULiang2

(1.ShandongInstituteforFoodandDrugControl，Jinan250101，China；2.Center

forDiseasePreventionandControlofJinanMilitaryCommand，Jinan250014，China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method of uncertainty evaluation for the optical impurity test of Levofloxacin Lactate Injection.MethodsThe uncertainty was evaluated by an established mathematical model and the analysis of various factors affecting sample detection.ResultsEach componet of uncertainty was calculated and then the combined uncertainty was finally obtained by synthesizing the uncertainties of various component variables.ConclusionThis method was appropriate to be used in the uncertainty evaluation for the optical impurity test of Levofloxacin Lactate Injection.

Key words:Levofloxacin;Optical impurity;Uncertainty

测量不确定度就是对测量结果质量的定量表征，不确定度的大小反应了测量结果的可信程度以及测量方法的合理性。近年来，不确定度评定已经广泛应用于国际上各个行业的测量/校准实验室，国内药品检验行业的不确定度评定工作起步较晚，但目前已经引起了行业内部的足够重视，尤其是进行药品检测实验室认可时，检测和校准实验室认可准则(ISO/IEC 17025-2005)要求检测和校准实验室，都必须建立并实施测量不确定度的评估程序，以评价测试结果的准确性和可靠性[1]。

本文以乳酸左氧氟沙星(Levofloxacin)注射液为例，根据国家质量技术监督局批准发布的JJF1059—1999计量技术规范《测量不确定度评定与表示》[2]，并参考有关文献[3~9]，建立其光学杂质(光学异构体)测定的不确定度评定方法，对实验过程中各影响因素进行分析评估，最终计算得出测定结果不确定度值。

1仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪(检定证书给出不确定度0.49%，K=3)；BP211D电子天平(d=0.01 mg/0.1 mg)。

乳酸左氧氟沙星注射液(鲁抗辰欣制药有限责任公司，批号：09051152011)；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯；玻璃器皿均为A级。

2方法

2.1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；硫酸铜D-苯丙氨酸溶液(取D-苯丙氨酸1.32 g与硫酸铜1 g，加水1 000 mL，加氢氧化钠试液调节pH值3.5)-甲醇(82∶18)；检测波长：293 nm；进样量：20 μL；流速：1.0 mL·min-1；柱温：40 ℃。

2.2供试品溶液的配制精密量取本品适量，加水稀释制成1.0 mg·mL-1的溶液。

2.3对照溶液的配制精密量取供试品溶液5 mL，置500 mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度。

3结果

3.1数学模型

X：光学杂质含量(%)

At：供试品中光学杂质峰面积

As：对照峰面积

Vs：对照溶液稀释倍数

由供试品溶液的制备过程可知Vs=500 mL/5 mL=100，实验测得As=467.21,At=124.70,则灵敏系数为：

3.2不确定度分量来源的分析 (因果图)见图1。

图1　不确定度的来源分析图

3.3不确定度的量化分析(各不确定度分量的计算结果见表3)

u(Vs) =urel(Vs)×Vs=0.185

3.3.2对照峰面积引起的相对标准不确定度urel(As)取对照溶液连续进样5次，计算不确定度，峰面积结果见下表。

表1　对照品溶液测定结果

高校液相色谱仪引入的相对标准不确定度为：urel(A)=检定证书给出的不确定度/K=0.49%/3=0.001 63(K=3)

u(As)=urel(As)×As=1.611 87

3.3.3供试品峰面积引起的相对标准不确定度urel(At)取对照溶液连续进样5次，计算不确定度，峰面积结果见表2。

表2　供试品溶液侧定结果

高校液相色谱仪引入的相对标准不确定度为：urel(A)=检定证书给出的不确定度/K=0.49%/3 =0.001 63(K=3)

u(At)=urel(At)×At=0.645 95

3.3.4合成标准不确定度供试品溶液的峰面积、对照溶液的峰面积、对照溶液稀释体积等的不确定度相互独立，故将上述数据合成，得合成相对标准不确定度u(X)为：

表3　相对标准不确定度一览表

3.4扩展不确定度计算得盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的含量的测定结果X=0.27%，测量结果的合成标准不确定度u(X)=0.001 74%。按惯例，若取包含因子K=2(95%的置信区间)，得测

量结果的扩展不确定度：

U=K×u(X)=0.004%

3.5测量结果的表示供试品盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的含量可表示为：X=0.27%±0.004%，K=2(95%的置信区间) 。

4讨论

灵敏系数反映了该输入量标准不确定度对输出量不确定度贡献的灵敏程度，而且标准不确定度只有乘以该灵敏系数才能构成一个不确定度分量，即和输出量有相同的单位，因此在不确定度评定过程中灵敏系数不能被忽视。

参考文献：

[1]中国实验室国家认可委员会.检测与校准实验室认可准则[S].CNAL/AC01:2005(ISO/IEC17025:2005),2005.

[2]国家质量技术监督局.测量不确定度评定与表示[S].中华人民共和国国家计量技术规范JJF1059-1999，1999.

[3]粟晓黎，李冠民，金少鸿.药品检验一般检测项目不确定度评定研究-1.B类评定[J].药物分析杂志，2005，25(6)：699-705.

[4]王维剑,凌霄,谭会洁,等.HPLC法测定中药中掺入双氯芬酸钠含量的不确定度评定[J].药物分析杂志,2009,29(1):130-133.

[5]凌霄,解斐,吴敬德.HPLC法测定降糖宁胶囊中格列本脲含量的不确定度分析[J].山东大学学报(医学版)，2009，47(11):124-127.

[6]王维剑,谢元超,刘琦,等.左氧氟沙星的有关物质研究进展[J].中国抗生素杂志，2010，35(11):820-825.

[7]钟丽红,刘颖,王维剑.采用HPLC法测定左氧氟沙星杂质A含量的不确定度分析[J].药物分析杂志,2011,31(11):2191-2195.

[8]王维剑,杨娜，谢元超.HPLC法标定头孢呋辛对照品含量的不确定度分析[J].药物分析杂志,2009,29 (5):864-867.

[9]刘翔,李文莉,田洪,等.盐酸特比萘芬片有关物质测定的不确定度评定[J].中国药师,2013,16 (2):305-308.