小儿双金清热口服液体内外抗菌效果研究

小儿双金清热口服液体内外抗菌效果研究

朱金媛1，邹凤1，何军2，郝信东2，田景振1，崔清华1

(1.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；2.山东润华药业有限公司，山东 济南 250335)

摘要：目的观察小儿双金清热口服液体内外的抗菌作用。方法采用平皿二倍稀释法测定小儿双金对多种临床分离菌的MIC值，以评价小儿双金的体外抗菌活性；通过小鼠体内腹腔注射法感染给药小鼠，观测给药小鼠在染菌后7 d内的死亡率。结果小儿双金清热口服液对包括革兰阳性菌和革兰阴性菌在内的多种细菌均具有一定的体外抗菌活性，对细菌引起小鼠死亡有一定的保护作用。结论小儿双金清热口服液具有明显的抗菌作用。

关键词：小儿双金清热口服液；体内外；抗菌；变形杆菌；金葡菌

基金项目：山东省中医药抗病毒协同创新中心项目(No.XTCX2014C-02)；山东中医药大学2014年SRT项目(No.2014180),本项目在山东中医药大学大学生创新创业训练平台完成

作者简介：朱金媛，女，研究方向：制药工程，E-mail：1741032608@qq.com

通讯作者：崔清华，女，研究方向：中药制剂分析，Tel:0531-89628597，E-mail：user753951@163.com

中图分类号：R285.5文献标识码：A

Study on antibacterial effects of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid in vitro and in vivo activity

ZHUJin-yuan1,ZOUFeng1,HEJun2,HAOXin-dong2,TIANJing-zhen1,CUIQing-hua1

(1.ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250335,China；2.Shandong

RunhuaPharmaceuticalCo.,Ltd.,Jinan250335,China)

Abstract：ObjectiveTo observe the antibacterial effects of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid in vitro and in vivo.MethodsUsing the method of two-fold agar dilution to determine the MIC values of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid for a variety of clinical isolates,and evaluate the antibacterial activity in vitro of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid;Using the method of intraperitoneal injection to infect the mice,then observe the rates of mice mortality within 7 d.ResultsXiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid had certain antibacterial activity in vitro on bacteria including a variety of gram positive and gram negative bacteria,it afforded some protection for the death of mice by bacteria.ConclusionXiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid had obvious antibacterial effects.

Key words:Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid;In vitro and in vivo;Antibacterial;Proteus;Staphylococcus aureus

小儿双金清热口服液主要由金银花、蒲公英、大青叶、板蓝根、赤芍、柴胡、秦艽、荆芥等多味中药组成，根据现代制备工艺研制而成，具有疏风化湿、解毒清热之功效，临床上用于小儿外感发热初期，治疗低热、咳嗽、咽喉红肿等症。现代药理研究表明该组方中各味药如金银花[1，2]、蒲公英[3]、大青叶[4]、板蓝根[5]、柴胡[6]等均具有一定的解热、抗炎、抗菌等药理作用。本实验主要考察了小儿双金清热口服液的体内外抗菌作用。

1实验材料

1.1动物昆明种小鼠，雄性，体重12~15 g，山东鲁抗实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(鲁)20130001。

1.2实验菌种金黄色葡萄球菌ATCC6538，大肠埃希菌(山东中医药大学附属医院临床分离2株)，铜绿假单胞菌(山东中医药大学附属医院临床分离2株)，福氏志贺菌(山东中医药大学附属医院临床分离2株)，变形杆菌CMCC(B)49005，均为标准菌株，山东中医药大学微生物教研室提供。

1.3药品及主要试剂小儿双金清热口服液(山东润华药业有限公司，批号：140112)；生理盐水(山东克伦药业有限公司)；青霉素(北京悦康凯悦制药有限公司，批号：06121005)；链霉素(北京悦康凯悦制药有限公司，批号：08111103)；庆大霉素(北京悦康凯悦制药有限公司，批号：09021012)。

1.4仪器96孔培养板(Fisher scientific)；MK3酶标仪(Labsystems)；全自动高压灭菌锅(YMS-280B型，宁波镇海金鑫)；超净工作台(北京市半导体设备一厂)。

2实验方法

2.1体外抗菌实验[7]

2.1.1供试品的制备取药液50 mL，加乙醇至含醇量为70%，4 ℃下静置24 h，取上清液，回收乙醇，药液加水稀释至100 mL，备用。

2.1.2体外抑菌实验参照NCCLS标准采用微量稀释法进行。取灭菌96孔板，双倍稀释法用MH肉汤培养基稀释“2.1.1”项下供试品药液，同样方法接种到含1 mg·mL-1双抗(青霉素、链霉素)培养基孔内，作为阳性药对照管；接种到不含药液的培养基孔内，作为菌液对照管；另设立不接种的含64 mg·mL-1受试药培养基对照孔，37 ℃培养24 h，酶标仪600 nm波长下检测OD值，以确定细菌无生长的最低抑菌浓度。

2.2体内抗菌实验[8]

2.2.1最小致死菌量(MLD)的测定将细菌种到普通肉汤培养基中培养18 h后，进行细菌计数，4 ℃保存待用。选取健康昆明种小鼠，随机分为6组，每组8只，分别为5个菌液稀释组和一个空白组。每组分别腹腔注射生理盐水溶液稀释的菌溶液(稀释浓度分别为10-1、10-2、10-3、10-4)1 mL，感染后观察并记录48 h内小鼠死亡数，已引起小鼠80%~100%死亡的最低剂量作为MLD，用该剂量作为体内保护实验的感染剂量。

2.2.2细菌感染小鼠保护实验按细菌种类分组，每组选取健康小鼠90只，体重12~15 g，随机分为6组，即空白对照组、模型对照组、庆大霉素(青霉素)对照组、小儿双金大剂量组0.027 mL·g-1(相当于临床用量的2倍)，中剂量组0.013 5 mL·g-1(相当于临床用量)，小剂量组0.006 8 mL·g-1(相当于临床用量的1/2倍)。各组动物按剂量连续灌胃给药7 d(空白和模型组给予等剂量生理盐水，庆大霉素对照组染菌前一天给药1次)，每天1次。第5天给药30 min后选用“2.2.1”项下细菌浓度小鼠腹腔注射给药1 mL，造成感染(空白组注射等剂量生理盐水)。观察7 d内各组小鼠死亡数。采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理，P<0.05为差异有统计学意义。

3实验结果

3.1体外抗菌实验小儿双金清热口服液体外抗菌效果较好，其中对铜绿假单胞菌、痢疾杆菌、变形杆菌3种菌株的MIC为32.34 mg·mL-1。对金葡菌、大肠埃希菌MIC为64.69 mg·mL-1，见表1。

表1　小儿双金的体外抑菌活性( n=2)

3.2体内抗菌实验

3.2.1不同细菌MLD测定结果见表2。

表2　不同细菌MLD测定结果

3.2.2细菌感染小鼠保护实验实验结果表明，小儿双金清热口服液可使腹腔感染金葡菌、痢疾杆菌、变形杆菌的小鼠的死亡率明显降低，保护率明显提高(P<0.05或0.01)，对感染大肠埃希菌和铜绿菌的小鼠亦有一定的保护作用，结果见表3。

表3　小儿双金清热口服液对细菌感染小鼠

注：与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05

4结论

4.1小儿双金清热口服液为纯中药复方制剂，临床治疗小儿感冒多年，全方共由16味药组成，大部分中药已有文献报道具有抗菌抗病毒作用，是本方抗菌抗病毒的药理学基础。实验结果表明小儿双金清热口服液体外抗菌效果较好，其中对铜绿假单胞菌、痢疾杆菌、变形杆菌3种菌株的MIC为32.34 mg·mL-1。对金葡菌、大肠埃希菌MIC为64.69 mg·mL-1。体内抗菌结果表明，小儿双金清热口服液可使腹腔感染金葡菌、痢疾杆菌、变形杆菌的小鼠的死亡率明显降低，保护率明显提高(P<0.05或0.01)，对感染大肠埃希菌和铜绿菌的小鼠亦有一定的保护作用。体内外实验均有效的证明了小儿双金清

热口服液的抗菌作用。

4.2实验中发现，小鼠死亡情况与体重成正比，体重越小，注射菌种后致死率越高。这一现象可能与小鼠的免疫力发育情况有关。

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