高效液相色谱法测定天香丹颗粒中红景天苷和丹参酮ⅡA的含量

高效液相色谱法测定天香丹颗粒中红景天苷和丹参酮ⅡA的含量

孙芸1,2， 施洋1， 宫海燕3， 安冬青1,2

(1新疆名医名方与特色方剂学重点实验室； 新疆医科大学2中医学院；3第五附属医院， 乌鲁木齐830011)

摘要:目的建立测定天香丹颗粒中红景天苷和丹参酮ⅡA含量的高效液相色谱法。方法色谱条件：色谱柱为Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm，5 μm)；乙腈-0.03%磷酸水溶液(7:93) 作为流动相；检测波长220 nm；流速为1.0 mL/min。结果红景天苷在5.44～16.32 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.998 6)；丹参酮ⅡA在0.074～0.222 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 5)。红景天苷平均回收率为 101.45%，RSD为1.78%(n=6)；丹参酮ⅡA平均回收率为101.78%，RSD为1.71%(n=6)。天香丹颗粒中红景天苷含量为1.57 mg/g，丹参酮ⅡA含量为0.58 mg/g。结论本法快捷、简便，结果准确、可靠、重复性好，可作为天香丹颗粒中红景天苷和丹参酮ⅡA的测定方法。

关键词：红景天苷； 丹参酮ⅡA； 高效液相色谱法

中图分类号：R914文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.04.014

[收稿日期：2014-06-17]

基金项目：国家自然科学基金(81374027)

作者简介：郭玉婷(1971-)女，硕士，副研究员，研究方向：维药研究。

Determination of Salidroside and Tanshinone ⅡAin Tianxiangdan Granule by HPLC

SUN Yun1,2, SHI Yang1, GONG Haiyan3, AN Dongqing1,2

(1XinjiangKeyLaboratoryofFamousPrescriptionandScienceofFormulas,

Urumqi830011,China;2SchoolofTraditionalChineseMedicine,3TheforthHospitalAffiliated,

XiajiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a HPLC method for determination on salidroside and tanshinone ⅡA in Tianxiangdan granule. Methods The HPLC system consisted of chromatographic column of Hypersil ODS2 (4.6 mm×250 mm, 5 μm); acetonitrile -0.03% phosphoric acid solution (7∶93) as mobile phase; the 220 nm detection wavelength; and 1 mL/min flow rate. ResultsSalidroside in the range of 5.44 -16.32 μg and the peak area had a good linear relationship (r=0.9986); Tanshinone ⅡA in the range of 0.074-0.222 μg and the peak area had a good linear relationship (r=0.9995). The average recovery rate of Salidroside was 101.45% and RSD was 1.78% (n=6); the average recovery rate of Tanshinone ⅡA was 101.78% and RSD was 1.71% (n=6). The content of Salidroside was 1.57 mg/g and Tanshinone ⅡA was 0.58 mg/g in Tianxiangdan granule. ConclusionThis method, quick, simple, accurate, reliable, with good reproducibility, can be used as a method for the determination on salidroside and tanshinone ⅡA in Tianxiangdan granule .

Key words: Salidroside; Tanshinone ⅡA; HPLC

近年来．冠心病在我国的发病率和病死率呈迅速上升趋势，已成为威胁人民健康的重要疾病。安冬青教授根据冠心病本虚标实之证候特点，研制出具有益气补虚、和血通络、化痰散结功效的天香丹颗粒，用来治疗气虚血瘀痰阻型冠心病，在临床上取得较好疗效[1-2]。

天香丹颗粒临床主要用于治疗心气虚损、心脉瘀阻所致的胸痹心痛[3]。该方由红景天、丹参、降香等药组成，为了有效控制天香丹颗粒的质量, 保证其临床疗效，本研究采用高效液相色谱法对天香丹颗粒中主要药材中的红景天苷和丹参酮ⅡA含量进行了测定，现报道如下。

1仪器与试剂

1.1仪器LC-6AD高效液相色谱仪，SIL-20A型自动进样器、CTO-10ASvp型柱温箱(日本岛津公司)，CBM-20A色谱工作站，KQ-400DBC超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，智能恒温电热套(郑州长城科工贸有限公司)。

1.2试剂与样品红景天苷对照品、丹参酮ⅡA对照品均购自成都曼思特生物科技有限公司(批号分别为：MSUT-12102401, MSUT-13061404)。甲醇(色谱纯，广州化学试剂厂)，乙腈(色谱纯，德国MERCK公司)，水为娃哈哈饮用纯净水，天香丹颗粒购自新疆医科大学附属中医医院。

2方法[4-6]与结果

2.1色谱条件选择Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，大连依利特)，流动相: 流动相A为甲醇，B为水。梯度洗脱：0～15 mim 80%～80% B，15～20 min 80%～10% B，20～30 mim 10%～10% B，30～40 min 10%～10% B，40～50 min 10%～80% B，50～55 min 80%～80% B。流速1.0 mL/min，柱温20℃，检测波长270 nm，进样量5 μL。在上述色谱条件下分析，理论塔板数按红景天苷计算不低于10 000，按丹参酮ⅡA计算不低于12 000，见色谱图1～3。

图1对照品溶液色谱图图2阴性样品色谱图图3供试品溶液色谱图

a: 红景天苷; b: 丹参酮ⅡA

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液分别精密称取红景天苷、丹参酮ⅡA(标准品)，用甲醇溶解并定容，制成红景天苷浓度为3.26 mg/mL、丹参酮ⅡA浓度为0.22 mg/mL的对照品溶液。混合标准品溶液的制备：红景天苷1 mL，丹参酮ⅡA 0.2 mL。

2.2.2供试品溶液取天香丹颗粒2 g，置研钵中研细，置锥形瓶中，加50 mL甲醇，精密称重，超声提取(超声功率200 W, 40 KHz)30 min，补足损失重量，0.45 μm微孔滤膜滤过，得供试品溶液。

2.3线性范围的考察依次分别精密量取红景天苷、丹参酮ⅡA标准品溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。按“2.1”项下的色谱条件，记录色谱峰面积。以对照溶液浓度为横坐标(C，mg/mL)，以峰面积为纵坐标(A)作图，得红景天苷、丹参酮ⅡA的回归方程分别为：Y=78 277.900 0X+93 077.300 0(r2=0.998 6), Y=174 828.200 0X+187 714.800 0(r2=0.999 5)。结果表明，红景天苷在 5.44～16.32 μg范围内、丹参酮ⅡA在0.074～0.222 μg范围内与峰面积均呈良好的线性关系。

2.4精密度试验吸取对照混合溶液(红景天苷质量浓度为3.26 mg/mL、丹参酮ⅡA质量浓度为0.22 mg/mL)，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，重复进样6次，测得峰面积，计算RSD分别为0.51%、0.85% ，表明仪器精密度良好。

2.5重复性试验取样品，按“2.2” 项下的方法制备供试溶液，平行制备6份，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，测得红景天苷、丹参酮ⅡA的含量，计算RSD分别为1.91%、2.01%，表明该方法重复性良好。

2.6稳定性试验取供试品溶液，室温放置，分别于2、4、6、8 h，按“2.1”项下的色谱条件分析。计算红景天苷、丹参酮ⅡA色谱峰面积的RSD分别为1.81%、1.93%，结果表明供试溶液室温放置8 h内稳定。

2.7回收率试验精密吸取按“2.2”项下方法制备、已知含量的样品6份，每样吸取5 mL，分别精密加入红景天苷0.1 mL、丹参酮ⅡA对照品溶液0.5 mL，按照“2.1”项下方法测定含量，同时计算回收率。结果测得的红景天苷平均回收率为101.45%，RSD为1.78%(n=6)；丹参酮ⅡA平均回收率为101.78%，RSD为1.71%(n=6)，结果见表1、2。

表1　红景天苷回收率试验结果(n=6)

表2　丹参酮回收率试验结果(n=6)

2.8样品含量测定取3批天香丹颗粒，按“2.2.2”项下方法制备供试溶液，按“2.1” 项下的色谱条件分析，代入标准曲线计算红景天苷、丹参酮ⅡA的含量，结果红景天苷含量为1.57 mg/g，丹参酮ⅡA含量为0.58 mg/g。

3结论

本实验通过对院内制剂天香丹颗粒中的君药红景天中红景天苷含量、丹参中丹参酮ⅡA含量的测定，为天香丹颗粒的质量控制提供实验数据，采用高效液相色谱法，梯度洗脱方法简单、稳定，以期更好地控制天香丹颗粒的质量。本法操作简便，结果可靠，可作为天香丹颗粒质量的有效检测方法，为天香丹制剂的质量控制提供测量方法。

参考文献：

[1]杨建梅,安冬青,王晓峰.天香丹颗粒治疗冠心病心绞痛33例[J].上海中医药大学学报, 2006, 20(2):29-31.

[2]安冬青,赵明芬,胡金霞,等.天香丹治疗胸痹之通补开泄法理论探讨[J].新疆医科大学学报，2007,30(5):429-433.

[3]加力肯,安冬青.天香丹对冠心病稳定型心绞痛患者生活质量的影响及疗效分析[J].新疆医科大学学报,2006,29(11):1053-1055.

[4]张海英,田红林,姜林.HPLC测定天香丹胶囊中丹酚酸B含量[J].中成药,2009,31(3):483-485.

[5]辛禄德,于谦,刘宏炳,等.RRLC法测定异常黑胆质成熟颗粒中甘草酸的含量[J].新疆医科大学学报，2011,34(11):1241-1243.

[6]刘红英,付九梅.HPLC 法测定景天祛斑片中红景天苷的含量[J].中国中医药信息杂志,2006, 13(9 ):55-56.

(本文编辑施洋)

通信作者：赵保胜，男，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：中药药效与物质基础研究，E-mail：zhaobs1973@163.com。

通信作者：耿直,男，研究员，研究方向：中维药研究，E-mail：gengzhi003@163.com。