小茴香挥发性成分GC指纹图谱研究

小茴香挥发性成分GC指纹图谱研究

杨丽萍1， 云琦2， 高晓黎1

(1新疆医科大学药学院， 乌鲁木齐830011；2新疆特丰药业股份有限公司， 乌鲁木齐830054)

摘要：目的建立小茴香挥发性成分气相色谱指纹图谱分析方法，对挥发油成分进行分析，为控制小茴香挥发油质量提供依据。方法采用水蒸气蒸馏法提取小茴香挥发油，对10个产地小茴香进行气相色谱分析，用气相色谱建立挥发油指纹图谱分析法，并用GC-MS对指纹峰进行鉴别。结果指纹图谱中共有10个共有峰，其中8个成分得到鉴定，所建立指纹图谱分析方法学各项目符合规定，各批样品相似度>0.95。结论所建立指纹图谱方法分析简便易行，为更好控制小茴香的质量提供了新的方法。

关键词：小茴香挥发油； 指纹图谱； GC

中图分类号：R914文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.05.014

[收稿日期：2014-12-01]

基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金(2014211C036)

作者简介：肖开提·阿不都哈德尔(1964-), 男(维吾尔族)，本科，副主任医师，研究方向：消化道肿瘤研究。

基金项目：天然药物及仿生药物国家重点实验室(北京大学)开放研究课题(20130215)

作者简介：买尔旦·马合木提(1960-) ,男(维吾尔族),教授,硕士生导师,研究方向:中药民族药，E-mail:maierdan60@sina.com。

On GC fingerprint analysis of fennel volatile constituents

YANG Liping1， YUN Qi2， GAO Xiaoli1

(1CoLLegeofPharmcy,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011China;2XinjiangTefeng

PharmaceuticalCo．Ltd，Urumqi830054,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a GC fingerprint analysis method for the quality control of fennel. MethodsFennel oil was extracted by steam distillation method. The fingerprint analysis of volatile oil was conducted by GC and the fingerprint peaks were identified with GC-MS. ResultsThe batch of fennel were analyzed by GC, and ten common peaks were shown in the fingerprints, nine of which were identified. The established fingerprint analysis method was validated .The similarities of samples were over 0.95. ConclusionThe fingerprint analysis method is simple, practical and suitable for the quality control of fennel.

Key words： fennel oil； fingerprint analysis； GC

小茴香为伞形科植物茴香(Foneiculum vulagre Mill.)的干燥成熟果实，为维吾尔医习用药材。其具有利尿、痛经、健胃、明目的功效[1]，主治寒性或黏液质性疾病，如瘫痪、面瘫、寒性头痛、眩晕、腹胀、耳痛、腹痛、闭尿、闭经胃虚乳少等症[2]。

目前，小茴香主要以反式茴香脑的含量来控制质量。有研究采用指纹图谱方法，但多未采用新疆药材，且未对指纹成分进行鉴定，具有一定的局限性[3]。新疆独特的气候使不同地区小茴香成分可能有较大的差异，本实验收集新疆代表性小茴香进行指纹图谱研究，并采用GC-MS进行成分指认，对系统评价和控制新疆小茴香药材质量有着重要的意义。

1仪器与材料

1.1仪器岛津GC2010-plus(日本岛津)，7890A-5975C 气质联用仪(美国安捷伦科技公司)，智能恒温电热套(郑州长城科工贸有限公司)，电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)，KQ-500DE 数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2材料10批小茴香产地及编号分别为：湖北(1号)、哈密(2号)、博乐(3号)、阿克苏(4号)、伊犁(5号)、和田(6号)、石河子(7号)、阿勒泰(8号)、喀什(9号)、克拉玛依(10号)。各批药材经新疆医科大学药学院帕丽达鉴别为伞形科植物小茴香(Foneiculum vulagre Mill.)干燥成熟果实；对照品反式茴香脑(纯度>98.0%)、葑酮(纯度>98.0%)、爱草脑(纯度>97.0%)、柠檬烯(纯度>95.0%)均购自梯希爱上海化成工业发展有限公司，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1样品测试条件

2.1.1指纹图谱测定GC条件色谱柱：rtx-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，升温程序：初始温度为80℃，保留2 min，以5℃/min的速率升至120℃保留5 min，然后以1℃/min的速率升至130℃，保留2 min。进样量2 μL，分流比30∶1，汽化室温度：80℃，FID温度：275℃。

2.1.2成分指认GC-MS分析条件(1) GC条件: 色谱柱：HP-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；载气：高纯氮气；载气流量：1 mL/min；分流比：30∶1；进样量：0.5 μL；进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；升温程序：起始温度为50℃，然后以10℃/min的速率升至300℃，保持20 min。(2) MS条件: GC-MS接口温度：300℃；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；离子源：EI；电离电压：70 eV；质量扫描范围(m/z)：33～600 amu。

2.2对照品溶液的制备精密量取对照品适量，用二氯甲烷制成浓度为3 μL/mL的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取适量小茴香，加蒸馏水用水蒸气蒸馏提取法提取挥发油，经无水硫酸钠干燥得淡黄色挥发油。精密量取小茴香挥发油适量，用二氯甲烷制成3 μL/mL的溶液，即得。

2.4指纹图谱测定方法学实验

2.4.1精密度试验取和田供试品溶液，连续进样6次，计算各色谱图共有峰相对保留时间，相对峰面积RSD均<3.0%，表明精密度良好。

2.4.2重复性试验取和田样品，依法制备6份样品，分别进行测定。计算各色谱图共有峰相对保留时间，相对峰面积RSD均<3.0%，表明重复性良好。

2.4.3供试品溶液稳定性试验取和田供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，计算各色谱图共有峰相对保留时间，相对峰面积RSD均<3.0%，表明稳定性良好。

2.5指纹图谱的建立

2.5.1指纹图谱的测定各样品依法测定，指纹图谱共标定10个共有峰(图1)。10批小茴香样品相似度>0.95，见表1。

图1　10批小茴香GC指纹图谱

编号12345678910对照11.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0021.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0031.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0041.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0050.980.980.980.981.000.980.980.980.980.980.9961.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0071.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0081.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0091.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.00101.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.00对照1.001.001.001.000.991.001.001.001.001.001.00

2.5.2相对保留时间与相对峰面积考察所建立的指纹图谱10个共有峰占总峰面积95%，非共有峰占总峰面积<5%。其中与总峰面积的比值>20%的共有峰为10号峰,其他9个峰的峰面积均<5%。以7号峰为参照峰，计算各主要共有峰相对保留时间与相对峰面积，结果见表2~4。

2.6指纹成分GC-MS鉴定取6号供试品注入GC-MS分析，通过NIST质谱库检索，8个化学成分得到了鉴定，见表5。

表2　指纹图谱-相对保留时间

表3　指纹图谱-相对峰面积

表4　各批次样品非共有峰面积比值及出峰数

表5　小茴香挥发油GC-MS鉴定结果

3讨论

本实验测定结果表明，不同产地小茴香成分差异较大，如博乐小茴香指纹峰达43个，而阿克苏小茴香指纹峰仅为15个。湖北小茴香与新疆小茴香主要成分相同；活性成分反式茴香脑含量高(>50%)，未鉴别出松烯、香叶烯、α-非兰烯、反式-β-罗勒烯、茴香醛等成分[4]，这可能与茴香生长的生态环境有关。

小茴香挥发油GC-MS共鉴定8个成分，分别为(1S)-(-)-α-蒎烯、邻伞花烃、α-蒎烯、(1S)-(+)-3-蒈烯、D-柠檬烯、葑酮、爱草脑、反式茴香脑。未检出松烯、香叶烯、α-非兰烯等成分。与高莉等[4-7]报道的结果一致。建立的指纹图谱中指纹峰具有多种活性作用，如反式茴香脑和柠檬烯具有抗菌、提高免疫和抗肿瘤等作用。因此，所建立指纹图谱能够更好地控制小茴香的质量，为小茴香药材的质量控制提供新的方法。

参考文献：

[1]顾永寿,顾永福.维吾尔医常用药材[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1992 :12-13.

[2]中国医学百科全书维吾尔医学分册[M].上海:上海科学技术出版社,2005:581-582.

[3]金宏,赵文英,公衍玲.小茴香挥发油GC指纹图谱研究[J].西北药学杂志,2007,22(5): 243-245.

[4]吴枚涵,聂凌云,刘云,等. 气相色谱-质谱法分析不同产地小茴香药材挥发油成分[J].药物分析杂志,2001,21(6):415-418.

[5] 袁斌,王以武.盐酸文拉法辛残留溶剂检测方法的建立[J].川北医学院学报,2013,28(1) :13-16.

[6]刘密新,汪伟.小茴香挥发油的成分分析[J].中草药,1997,28(1):14.

[7]高莉,斯拉甫·艾白.小茴香挥发油成分及抑菌作用的研究[J].中国民族医药杂志,2007,12(12):67-68.

(本文编辑施洋)

通信作者：张文斌，男(回族)，博士，副主任医师，研究方向：胃肠外科， E-mail:zwb3216@sina.com。