肿瘤相关巨噬细胞在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

程枫 王伟斌 朱磊

[摘要] 目的 观察肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在甲状腺乳头状癌（PTC）的表达，探讨其在PTC侵袭转移中的作用。方法 选取我院2010年10月～2013年10月期间经病理诊断为PTC患者80例，取病理标本，采用免疫组化法检测TAMs表达，对其临床特征进行分析。 结果 TAMs在PTC中存在较高的表达（3～66/HP），高密度TAMs组肿瘤组织直径（1.6±0.1）cm明显大于低密度TAMs组（1.0±0.1）cm（P<0.01）。高密度TAMs组较低密度TAMs组肿瘤浸润深度更深，且有更多的淋巴结转移，Ⅲ期以上病例数也更多。 结论 TAMs有促进PTC生长的作用，在PTC的侵袭和转移中发挥促进作用。

[关键词] 肿瘤相关巨噬细胞；甲状腺乳头状癌；免疫组化；侵袭转移

[中图分类号] R736.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）34-0011-03

The expression and clinical significance of tumor-associated macrophages in papillary thyroid carcinoma

CHENG Feng1 WANG Weibin2 ZHU Lei1

1.Department of General Surgery，the Central Hospital of Lishui City in Zhejiang Province， Lishui 323000， China；2.Department of Oncology Surgery，the First Affiliated Hospital to College of Medicine of Zhejiang University， Hangzhou 310003， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of tumor-associated macrophages（TAMs） in human papillary thyroid carcinoma （PTC） and the role of TAMs in invasion and metastasis of PTC. Methods Eighty patients who underwent surgeries after being diagnosed with PTC from Oct 2010 to Oct 2013 were included. Their paraffin-embedded tumor tissues were investigated using immunohistochemistry （IHC） and the clinical characteristics according to TAMs density was evaluated. Results The TAM densities varied from 3-66/HP， and tumors in the high density group were larger than those in the low density group [（1.6±0.1） cm vs （1.0±0.1） cm，P<0.01]. Meanwhile， in the high density group， the tumor infiltration was deeper， and more lymph node metastasis and the number of post-phase Ⅲ cases were found. Conclusion TAMs has an effect on promoting the growth of the PTC， and plays an important role in invasion and metastasis of PTC.

[Key words] Tumor-associated macrophages； Papillary thyroid carcinoma； Immunohistochemistry； Invasion and metastasis

肿瘤相关的巨噬细胞（tumor-associated macrophages，TAMs），早在上世纪80年代被描述，是一类与肿瘤相关有复杂功能的单核-巨噬细胞的总称，由外周血单核细胞在一些趋化因子和肿瘤坏死因子的作用下定向迁移至肿瘤组织中分化而成。TAMs是一种分泌功能很强的细胞，可分泌多种细胞生长、转移因子、降解细胞基质的酶等，从多方面影响肿瘤细胞局部的微环境，加速肿瘤的浸润及转移[1，2]。TAMs作用有一定的组织特异性，高密度TAMs存在于肿瘤晚期并提示预后差，像乳腺癌、肺癌、膀胱癌等[3-5]。尽管高密度的TAMs存在于低分化的乳头状甲状腺癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）有被报道，但其分布和功能在PTC中仍未被研究清楚。我们讨论TAMs在PTC组织中表达并结合临床特征研究TAMs在PTC发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料来源

于2010年10月～2013年10月在我院住院患者行甲状腺全切或次切术，同时行颈部中央区淋巴结清扫，术后经病理诊断为乳头状甲状腺癌，有或无淋巴结转移。全部病例在术前均无放疗、化疗及免疫抑制治疗史，无甲状腺功能亢进、类风湿、糖尿病等疾病。标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm切片。

1.2 TAMs免疫组化染色

用免疫组织化学SP法检测TAMs的分子标记物CD68，微波修复抗原，将已脱蜡的组织切片放入已预热至100℃的EDTA修复液（1 mmol，pH 8.0）中保持15 min，加一抗4℃过夜，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。一抗、二抗及SP试剂盒等均购于上海生工生化公司。PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 阳性结果判定及分组

CD68阳性表达于巨噬细胞的胞质内，细胞质含清晰的黄褐色至棕黄色颗粒状者为阳性细胞。低倍光学显微镜下找到5个CD68阳性细胞聚集最多的“热点”（hot spot）后，在200倍高倍光学显微镜下计数每个“热点”区的5个视野，计算每个视野阳性细胞的平均值标记为该标本中TAM的浸润密度。参考其他同类文献，取本组所有甲状腺癌病例的TAMs浸润密度的中位数作为高低密度的分界点，按TAM浸润密度分为低密度组和高密度组。

1.4 统计学分析

采用SPSS16.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率表示，采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般临床特征

回顾性分析我院2010年10月～2013年10月期间住院患者80例，其中女60例（75%），平均年龄（54.1±10.2）岁（38～79岁），肿瘤组织直径大小（1.3±0.1）cm，淋巴结转移占32例（40%），侵犯包膜占50例（62.5%），按照国际抗癌协会联盟（UICC）和美国抗癌联合会（AJCC）的TNM分期标准，Ⅲ期以上24例（30%），见表1。

2.2 TAMs染色结果及分组

免疫组化染色的切片中CD68阳性的巨噬细胞呈棕红色颗粒状，胞浆和（或）胞膜着色，细胞体积较大，形态多样，呈不规则形，在癌组织中弥散或聚集分布，见图1A、B。80例甲状腺癌病理切片中TAM为3～66/HP，其中位数为30.5/HP。以中位数为界将甲状腺癌组分为两组：TAMs高密度组和TAM低密度组。高密度组40例，TAM中位数为48（31～66）/HP；低密度组40例，TAM中位数为12（3～30）/HP。

2.3 两组临床特征比较

两组患者的年龄、性别等无显著差异，TAMs高密度组肿瘤直径显著高于低密度组[（1.6±0.1） cm vs. （1.0±0.1） cm，P<0.01]，高密度TAMs组较低密度TAMs组肿瘤浸润深度更深，有更多的淋巴结转移，Ⅲ期以上例数也更多，见表1。

3 讨论

TAMs是一类与肿瘤相关、有复杂功能的单核-巨噬细胞的总称，近年越来越多的研究表明肿瘤组织通过表达CD68分子的巨噬细胞（TAMs）参与肿瘤血管生成、免疫抑制等多种机制促进肿瘤的进展，在促进肿瘤生长、侵犯和转移中起重要作用，临床研究表明在肺癌、结肠癌、乳腺癌、膀胱癌、经典型霍奇金氏淋巴瘤组织中TAMs浸润密度与肿瘤患者的生存密切相关，可能是独立的预后因子[6-15]。然而，TAMs在PTC中的作用尚存争议，相关研究的资料目前仍十分有限，尤其是基础方面的研究。

本研究显示TAMs在PTC中存在较高的表达，高密度TAMs组肿瘤组织体积明显大于低密度组，同时更多的淋巴结转移、更多的包膜侵犯等发生在高密度TAMs组，但差异无统计学意义。基于这些发现，我们认为TAMs有促进PTC癌细胞生长作用，并在肿瘤转移和侵犯中发挥重要作用。与既往的一些研究相似。Ryder[16]等发现TAMs密度在低分化的PTC和间变的甲状腺癌中均高于分化良好的PTC，Qing[17]等报道TAM密度在3期肿瘤组织中更高。然而，Fiumara[18]等用CD68免疫组化发现TAMs避免了肿瘤在部分病人转移，这些患者有更少的血管浸润、远处转移、淋巴细胞浸润等。虽说研究结果不一致，但总的来说，倾向于TAMs有促进甲状腺癌增长的报道多一些。

TAMs在肿瘤或PTC生长、浸润、转移中的作用机制是多方面的，结合既往研究结果，其可能的原因有[19-24]：①TAMs在肿瘤微环境中经肿瘤细胞作用下丧失了杀灭肿瘤作用而转为促进肿瘤生长效应，从而造成肿瘤的免疫逃逸。②肿瘤细胞生存和转移依赖新生血管生成，TAMs多集聚在血管紊乱、肿瘤坏死的低氧区，低氧又促进TAMs聚集，参与肿瘤血管生成及细胞外基质（ECM）降解。③肿瘤组织中都有大量免疫细胞浸润，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK 细胞和TAMs，而TAMs数量常占显著优势。TAMs多具M2表型，抗原递呈能力弱，抗肿瘤效应被抑制，具有促肿瘤生长和转移作用。

在本研究中我们也观察了TAMs形态学，发现尽管TAMs存在，但甲状腺癌组织的形态学特征仍被保持，因此，我们怀疑TAMs并没有对PTC发展起到特别巨大的作用，这也和我们的研究结果基本一致，如虽然更多的淋巴结转移、更多的包膜侵犯等发生在高密度TAMs组，但差异无统计学意义。

关于TAMs在甲状腺癌中的研究今年来逐渐增多，特别是国外，但是关于机制的研究数据仍然很少。甲状腺癌因为其增殖速度慢，有相对良好的进程，因此，其病理生理过程中并没有特别适合TAMs的作用。当前，TAMs的作用仅仅在侵袭性的乳腺癌、肺癌和膀胱癌有相对一致的意见。我们的研究结果显示TAMs同样存在于PTC，其作用在癌症的发展中是存在的。不管怎么说，更大样本的、前瞻性的研究在接下来是必需的。

[参考文献]

[1] 吴婷，周武雄. 肿瘤相关巨噬细胞的极化与肿瘤的发展[J].现代肿瘤医学，2015，23（12）：1753-1756.

[2] 王荣荣，刘红.TAMs为靶点的抗肿瘤治疗研究进展[J]. 中国肿瘤临床，2014，（11）：745-748.

[3] Meng F，Li C，Li W，et al. Interaction between pancreatic cancer cells and tumor-associated macrophages promotes the invasion of pancreatic cancer cells and the differentiation and migration of macrophages[J]. IUBMB Life，2014，66（12）：835-846.

[4] Omatsu M，Kunimura T，Mikogami T，et al. Difference in distribution profiles between CD163+ tumor-associated macrophages and S100+ dendritic cells in thymic epithelial tumors[J]. Diagn Pathol，2014，9（1）：215-218.

[5] 朱玉芬，李崖青，付丽. 肿瘤相关巨噬细胞与乳腺癌关系的研究进展[J]. 天津医科大学学报，2014，2（6）：499-505.

[6] 周锡进，李国华. 肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的作用[J]. 中国肿瘤临床，2013，40（20）：1261-1263.

[7] Sato S，Hanibuchi M，Kuramoto T，et al. Macrophage stimulating protein promotes liver metastases of small cell lung cancer cells by affecting the organ microenvironment[J].Clin Exp Metastasis，2013，30（9）：333-344.

[8] 韩尚容，潘燕，李学军. 肿瘤相关巨噬细胞靶向治疗研究进展[J]. 中国临床药理学杂志，2015，37（6）：478-481.

[9] 王艳，汪洪志. 直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞与淋巴管密度间相关关系[J]. 现代肿瘤医学，2014，22（12）：2926-2928.

[10] Mouchemore KA，Sampaio NG，Murrey MW，et al. Specific inhibition of PI3K p110δ inhibits CSF-1-induced macrophage spreading and invasive capacity[J]. FEBS Journal，2013，280（21）：5228 -5236.

[11] Hakim F，Wang Y，Zhang SXL，et al. Fragmented sleep accelerates tumor growth and progression through recruitment of tumor associated macrophages and TLR4 signaling[J]. Cancer Res，2014，74（5）：1329 -1337.

[12] Rietk？觟tter E，Menck K，Bleckmann A，et al. Zoledronic acid inhibitsmacrophage/microglia- assisted breast cancer cell invasion[J]. Oncotarget，2013，4（9）：1449-1460.

[13] Ryder M，Gild M，Hohl TM，et al. Genetic and pharmacological targeting of CSF-1 /CSF-1Rinhibits tumor associated macrophages and impairs BRAF-induced thyroid cancer progression[J]. PLoS One，2014，8（1）：e54302.

[14] Lin Y，Wei C，Liu Y，et al. Selective ablation of tumor associated macrophages suppresses metastasis and angiogenesis[J]. Cancer Sci，2013，104（10）：1217-1225.

[15] 宁程程，单伟伟，杨冰义，等. 肿瘤相关巨噬细胞促进Ⅰ型子宫内膜癌细胞增殖和侵袭[J]. 复旦学报（医学版），2014，41（4）：447-453.

[16] Ryder M，Ghossein RA，Ricarte-Filho JC，et al. Increased density of tumor-associated macrophages is associated with decreased survival in advanced thyroid cancer[J].Endocr Relat Cancer，2008，15（3）：1069-1074.

[17] Qing W，Fang WY，Ye L，et al. Density of tumorassociated macrophages correlates with lymph node metastasis in papillary thyroid carcinoma[J]. Thyroid，2012，22（5）：905-910.

[18] Fiumara A，Belfiore A，Russo G，et al. In situ evidence of neoplastic cell phagocytosis by macrophages in papillary thyroid cancer[J]. J Clin Endocrinol Metab，2007，82（8）：1615-1620.

[19] 吴小丽，张婷，王昕婧，等. 肿瘤相关巨噬细胞通过分泌IL-10 影响上皮性卵巢癌肿瘤微环境中T 细胞亚群Treg/Th17 失衡[J]. 中国免疫学杂志，2014，30（12）：1585-1590.

[20] 刘小艳，许新华. 肿瘤相关巨噬细胞在肺癌中的研究现状[J]. 重庆医学，2014，43（16）：2079-2081.

[21] 安杰，刘伟，刘爽，等. HIF-1α 及肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌组织中的表达及其意义[J]. 中国普通外科杂志，2014，23（11）：1572-1574.

[22] Cannarile MA，Ries CH1，Hoves S，et al. Targeting tumor-associated macrophages in cancer therapy and understanding their complexity[J]. Oncoimmunology，2014， 3（9）：e955356.

[23] Franklin RA，Li MO. The ontogeny of tumor-associated macrophages：A new understanding of cancer-elicited inflammation[J]. Oncoimmunology，2014，3（9）：e955346.

[24] Su S，Wu W，He C，et al. Breaking the vicious cycle between breast cancer cells and tumor-associatedmacrophages[J]. Oncoimmunology，2014，3（8）：e953418.

（收稿日期：2015-06-09）