痒停擦剂抗炎止痒作用实验研究

痒停擦剂抗炎止痒作用实验研究

张俊威，许庆瑞，霍金海，王伟明*

(黑龙江省中医药科学院，哈尔滨 150036)

摘要：目的对痒停擦剂的抗炎、止痒和抗过敏作用进行实验研究，为其临床应用提供科学依据。方法分别采用豚鼠局部瘙痒、二甲苯致小鼠耳肿、蛋清致大鼠足跖肿胀和小鼠迟发型超敏反应模型评价痒停擦剂止痒、抗炎及抗过敏作用。结果痒停擦剂能降低磷酸组胺所致豚鼠局部瘙痒的阈值(P<0.01)；减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀率和蛋清致大鼠足跖肿程度(P<0.05，P<0.01)；降低5%DNCB至小鼠耳廓迟发性超敏反应模型的耳肿程度(P<0.01)。结论痒停擦剂具有止痒、抗炎、抑制迟发超敏反应及调节免疫功能的药理作用。

关键词：痒停擦剂；止痒；抗感染；迟发超敏反应

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.05.024

中图分类号：R285.5文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)05-0511-04

基金项目:黑龙江省应用技术研究与开发计划项目(PC13S18)。

作者简介:张俊威(1973-),女,硕士,副研究员,从事中药药理研究。

收稿日期:(责任编辑：张瑞彬2014-08-15)

*通信作者:王伟明，电话-(0451)55665478，电子信箱-yjs-163163@163.com

Effect of Yangting embrocation anti-inflammatory and anti-pruritus

ZHANG Junwei,XU Qingrui,HUO Jinhai,WANG Weiming*

(Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150036,China)

Abstract:ObjectiveStudy on the pharmacological effect of Yangting embrocation anti-inflammatory,anti-pruritus and antianaphylaxis.MethodsRespectively used Guinea pigs to the local itching,mice ear swelling caused by xylene and egg white in rats foot metatarsus swelling and delayed-type hypersensitivity in mice model to evaluate stop itch liniment itching,anti-inflammatory and anti-allergic effects.ResultsYangting embrocation could increase itch-threshold of cavy caused by histamine phosphate (P<0.01),reduce the rate of mouse ear swelling caused by xylene and egg white degree of swell in rats (P<0.05,P<0.01),reduce 5% DNCB to mice auricle late-onset allergic reaction model of the ear swelling degree (P<0.01).ConclusionYangting embrocation has the pharmacological effects of anti-pruritus,anti-inflammatory,antianaphylaxis,inhibiting delayed-type hypersensitivity and adjusts the immune function.

Keywords:Yangting embrocation;anti-pruritus;anti-infection;delayed-type hypersensitivity

痒停擦剂由冰片、黄柏、苦参、百部、地肤子等组成，为中药外用酊剂，具有清热除湿杀虫，疏风止痒作用，用于湿疹、皮肤瘙痒症、荨麻疹及过敏性皮炎等症。痒停擦剂做为黑龙江省中医医院的院内制剂在临床应用多年，具有良好的疗效。本实验分别采用磷酸组胺致豚鼠局部瘙痒模型、二甲苯致小鼠耳肿、蛋清致大鼠足跖肿胀及2，4-二硝基氯苯(DNCB)致小鼠耳廓迟发性超敏反应模型从止痒、抗炎和抗过敏作用等方面观察痒停擦剂的药效，为临床应用提供可靠的实验依据。

1实验材料

1.1受试药物及试剂痒停擦剂(受试药)，黑龙江省中医医院制剂室，批号：100302。复方醋酸曲安奈德溶液(阳性对照药)，广东恒诚制药有限公司，国药准字H10930202。40%乙醇溶液(溶剂对照)。生理盐水，哈尔滨三联医药有限公司，国药准字H23020612，批号：080513A17。2，4-二硝基氯苯(DNCB)，天津市光复精细化工研究所，批号：20070713。

1.2动物清洁级ICR小鼠，18～22 g，雌雄兼用；清洁级Wistar大鼠，180～220 g,雌雄兼用，均由吉林大学白求恩医学院试验动物中心提供，合格证号SCXK-(吉)2007-0003。普通级豚鼠,250～350 g，雌雄各半，由哈尔滨市松北区华宇养殖场提供，合格证号SCXK-(黑)2007-003。实验动物设施使用许可证号：(黑)2006-040。

2实验方法

2.1对豚鼠局部瘙痒的影响豚鼠36只，体质量200～250 g，常规饲养7 d后随机分为6组,分别为痒停擦剂高、中、低剂量组，阳性对照药组，溶剂对照组和空白对照组，每组6只,雌雄各半。将各组豚鼠右后足背剃毛，用粗砂纸轻轻擦伤豚鼠剃毛处，形成面积1 cm×1 cm的表皮破损创面。各组豚鼠按实验所设剂量于创面处涂抹相应药物:痒停擦剂高、中、低剂量组分别涂抹痒停擦剂0.1，0.05，0.025 mL；阳性对照药组涂抹复方醋酸曲安奈德溶液0.05 mL；溶剂对照组涂抹40%乙醇溶液0.05 mL；空白对照组涂抹等容积的生理盐水0.05 mL。给药30 min后在创面处滴0.01%磷酸组织胺0.05 mL/只，此后每隔3 min按0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%递增浓度,至出现豚鼠回头舔后足为止。累计各组每只豚鼠所用磷酸组胺总量(μg)为致痒阈,以给药后的致痒阈为评价指标。如滴至0.1%磷酸组织胺豚鼠仍未舔后足，则以滴加总量为致痒阈。

2.2对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响清洁级ICR小鼠60只，体质量18～22 g，常规饲养7 d后随机分为6组，组别同实验2.1，每组10只，雌雄各半。各组小鼠按实验所设剂量于右耳涂抹相应药液：痒停擦剂高、中、低剂量组分别涂抹痒停擦剂0.1、0.05、0.025 mL；阳性对照药组涂抹复方醋酸曲安奈德溶液0.05 mL；溶剂对照组涂抹40%乙醇溶液0.05 mL；空白对照组涂抹等容积的生理盐水0.05 mL。给药30 min后，将二甲苯0.05 mL均匀涂于小鼠右耳，30 min后剪下左右耳廓，用打孔器同时取下两耳片称重，按下式计算小鼠耳肿胀率。

2.3对蛋清致大鼠足跖肿胀的影响[5]清洁级Wistar大鼠60只，体质量180～220 g，常规饲养7 d后随机分为6组，组别同实验2.1，每组10只，雌雄各半。各组大鼠按给药剂量设计于右后足涂抹相应药液，给药剂量同实验2.1。涂药后30 min在大鼠右后肢足跖皮下注射新鲜的10%蛋清溶液0.1 mL/只，分别于致炎后0.5、1、2、4 h用无弹性的软皮尺测量踝关节周长，计算足跖肿胀率(%)。

2.4对DNCB致小鼠耳廓迟发性超敏反应的影响清洁级ICR小鼠70只，正常饲养7 d后随机分为7组，分别为痒停擦剂高、中、低剂量组，阳性对照药组，溶剂对照组，模型对照组和空白对照组，每组10只，雌雄各半。各组小鼠致敏前24 h腹部去毛(3 cm×3 cm)，同时于小鼠左耳涂抹相应剂量药液，1次/d，连续9 d。给药剂量同实验2.1，模型对照组涂抹0.05 mL的生理盐水溶液。给药第2天各组小鼠致敏：除空白对照组外，其余小鼠于腹部去毛处均匀涂抹5%的2，4-二硝基氯苯(DNCB)丙酮液致敏，空白对照组涂抹等容积的生理盐水，2 d后强化1次。给药第9天，小鼠左耳涂抹药液30 min后，将1%DNCB丙酮液均匀涂于小鼠左耳正反两面，建立Ⅳ型变态反应小鼠动物模型(空白对照组涂抹生理盐水)。于涂抹DNCB溶液1 h后处死小鼠，称体质量，取其胸腺、脾脏称重，计算脏器指数；取下双耳耳片称重，计算耳肿胀度。

3结果与结论

3.1对豚鼠局部瘙痒的影响与空白对照组比较，阳性对照药组和痒停擦剂各剂量组的致痒阈明显升高，均具有极显著差异(P<0.01)，痒停擦剂各组的止痒作用随着给药剂量的增加而增强，呈现明显的量效关系；溶剂对照组致痒阈虽高于空白组但差异无统计学意义。与溶剂对照组比较，痒停擦剂各剂量组致痒阈明显升高且差异有统计学意义(P<0.01)。提示痒停擦剂可以提高磷酸组胺对豚鼠的致痒阈，具有明显的止痒作用，而溶剂不具有止痒作用。结果见表1。

3.2对小鼠耳肿胀率的影响与空白对照组比较，阳性对照药组和痒停擦剂各剂量组的小鼠耳肿胀率明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。痒停擦剂各剂量组的耳肿胀率随着剂量的增加而降低，提示痒停擦剂具有抗炎作用且呈现明显的量效关系。溶剂对照组与空白对照组比较，耳肿率明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05),但与痒停擦剂各剂量组比较，耳肿胀率明显升高且差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。说明虽然40%乙醇溶剂有抗炎作用,但其抗炎效果明显弱于全方，提示痒停擦剂的主要抗炎有效成分来自于全方中溶于乙醇的各药物组分。结果见表2。

表1　痒停擦剂对豚鼠局部瘙痒模型的影响 ± s, n=6)

注:与空白对照组比较,## P<0.01;与溶剂对照组比较,△△ P<0.01

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与溶剂组比较，△P<0.05，△△P<0.01

3.3对大鼠足跖肿胀程度的影响与空白对照组比较，各给药组大鼠的足跖肿胀程度均有不同程度的减轻，尤其是阳性对照组和痒停擦剂中、高剂量组，致炎后0.5 h即可明显减轻10%蛋清引起的大鼠足肿程度并持续至4 h，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；溶剂对照组的足肿程度虽有降低，但至2 h后差异有统计学意义(P<0.05)。与溶剂对照组比较，痒停擦剂各剂量组大鼠足肿程度均减轻，尤以中、高剂量组显著(P<0.05，P<0.01)。提示痒停擦剂及其溶剂均具有抗炎作用。40%乙醇溶剂虽有一定的抗炎作用,但起效较慢，抗炎效果较弱。而痒停擦剂全方的抗炎作用起效快，作用时间持久，能快速、持续抑制炎症引起的肿胀。 结果见表3。

表3　痒停擦剂对大鼠足跖肿胀程度的影响 ± s, n=10)

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与溶剂对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01

3.4对DNCB致小鼠耳廓迟发超敏反应的影响与空白对照组比较，模型对照组小鼠耳肿胀程度明显升高且差异有统计学意义(P<0.01)，说明DNCB致敏1周后经致敏源激发可引起小鼠迟发超敏反应，模型复制成功。与模型对照组比较，阳性对照组和痒停擦剂各剂量组小鼠耳廓肿胀程度均明显减轻，差异有统计学意义(P<0.01),且痒停擦剂各剂量组的肿胀程度随着痒停擦剂给药剂量的增加而降低，呈现明显的量效关系。提示痒停擦剂具有抑制迟发超敏反应的作用。阳性对照组小鼠的脾指数和胸腺指数与空白对照组比较明显降低，胸腺指数具有极显著差异(P<0.01)。提示阳性对照药复方醋酸曲安奈德溶液可能是通过抑制T淋巴细胞的增殖而减轻超敏反应程度,具有免疫抑制作用。而痒停擦剂各剂量组的耳肿程度虽然明显降低，但对致敏小鼠的脾指数和胸腺指数均无影响，说明痒停擦剂虽然可以抑制Ⅳ型变态反应引起的耳肿胀程度，但对机体的细胞免疫和体液免疫功能均无抑制作用。结果见表4。

表4　痒停擦剂对小鼠耳廓迟发超敏反应耳肿胀程度的影响 ± s, n=10)

注：与模型对照组比较，##P<0.01；；与溶剂对照组比较，△P<0.05,△△P<0.01

4讨论

中医认为多因湿热内蕴，复感风邪，湿热互结化燥生风致痒，或湿热郁久化生为虫致痒，所以止痒的关键在于“除湿热”，外治法则以清热燥湿祛风，杀虫止痒为主[1-2]。黄柏苦寒为君，外用能燥湿敛疮；冰片苦辛性凉为臣，外用能清热消肿、止痒止痛，苦参清热燥湿，地肤子祛风止痒，百部外用止痒杀虫，共为佐剂。5味药以活血行血，驱风散寒的酒剂为使，缓和诸药的寒性，共行清热除湿杀虫，疏风止痒之功效。

本实验中，痒停擦剂能显著提高组胺引起的豚鼠皮肤瘙痒的致痒阈，且呈现出较好的量效关系，提示全方具有良好的抗组胺止痒效果。

急性炎症是湿疹、荨麻疹及过敏性皮炎等皮肤疾病的共同临床症状。通过二甲苯致小鼠耳肿和蛋清致大鼠足跖肿胀实验证实，痒停擦剂能降低化学物质引起的皮肤急性炎症反应程度，具有抗炎作用并呈现出较好的量效关系。

过敏是皮肤病的主要病因之一，目前多认为湿疹的发病机理是由复杂的内外激发因子引起的迟发型变态反应[3]。通过DNCB致敏并激发复制小鼠迟发变态反应模型，测量激发后小鼠的耳肿胀程度和免疫器官系数的变化，观察药物对迟发超敏反应的抑制程度及机体免疫机能的影响。

本实验阳性对照药采用的是复方醋酸曲安奈德溶液，为醋酸曲安奈德和水杨酸的复方制剂。曲安奈德是中强氟化糖皮质激素，具有外用皮质激素的抗炎、抗过敏及收缩血管的作用，但长期使用会造成激素的依赖性[4]。

通过动物实验观察，证实痒停擦剂和复方醋酸曲安奈德溶液都具有良好的抗炎、止痒、抗过敏作用，但痒停擦剂对急性炎症的抑制不仅起效更快，抑制程度更强而且作用时间更长；复方醋酸曲安奈德溶液属于激素类制剂，具有免疫抑制功能，通过对细胞免疫功能的抑制作用降低迟发超敏反应引起的肿胀程度，表现为阳性对照组的胸腺指数明显降低。长期使用可引起机体免疫功能的降低，增加感染机率。而痒停擦剂不仅消肿作用强而且对脾指数和胸腺指数均无影响，说明其对机体免疫功能无抑制作用。

参考文献：

[1]杨凡,谭正怀,石锦萍，等.蛇黄乳膏止痒功效相关机制[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(18):210-213.

[2]朱深瑶.燥湿止痒洗剂熏洗治疗女阴湿疹40例临床观察[J].吉林中医药,2013,33(6):593-594.

[3]郭青云,潘成军,林清,等.复方黄倍软膏抗过敏及止痒作用的实验研究[J].解放军药学学报,2013,29(1):39-41.

[4]李卫红,徐植园.姜黄酊治疗丘疹鳞屑型足癣疗效观察[J].长春中医药大学学报,2008,24(1):94-96.