危险因素对胃黏膜癌前病变中血管内皮生长因子表达的影响

王 锐，于永强

河北北方学院附属第一医院消化科，河北 张家口075000

预防和延缓胃黏膜癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer，PLGC)是减少胃癌发病率的重要途径，但对于胃黏膜的恶变机制尚未完全清楚，癌前病变的预防及治疗效果还不是很理想。血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor，VEGF)与胃癌的发生、发展及预后相关，参与胃黏膜演变过程的因子之一，研究比较透彻，但是在癌前病变中研究相对较少，且与胃癌危险因素关系的研究未见报道。本文旨在探讨PLGC 的危险因素与VEGF 表达的关系，了解不同危险因素的致病途径，以帮助我们制定更好的临床干预方案。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012 年12 月-2013 年12 月河北北方学院附属第一医院消化科门诊胃镜室就诊患者，根据胃镜及病理结果提示肠上皮化生组和异性增生的患者120 例，并对个体情况进行询问。排除有严重心脑血管、肝、肾疾病，肿瘤，血液系统疾病，胃部手术病史等基础疾病患者。120 例PLGC 患者男68 例、女52 例，年龄35 ～72 岁，中位年龄58.9 岁。

1.2 方法 (1)胃黏膜活检标本置于10%甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋、切片，应用免疫组化进行VEGF 检测(鼠抗人VEGF 单克隆抗体，北京中杉金桥生物有限公司)。阅片由专业病理科医师来进行判断。(2)本研究列入的危险因素有吸烟(平均每天＞5 支且超过1 年)、饮酒(每周超过2 次且每次超过500 ml 啤酒或250 ml 黄酒或50 ml 白酒;高盐饮食(定义为每日盐量＞6 g);经常食用烟熏炙烤食品(平均每周超过2 次)，阿司匹林等非甾体抗炎药的使用即连续服用超过3 个月;肿瘤家族史包括一、二、三级亲属在病例被调查患消化道肿瘤情况);H. pylori 感染史。对每个入组患者进行调查问卷。(3)以上危险因素发生赋值为1，未发生赋值为0。

1.3 结果判断 VEGF 阳性判定:VEGF 主要位于细胞浆，免疫组化阳性反应为黄棕褐色颗粒。阳性细胞数计算方法为:每张切片随机观察5 个高倍视野，每个视野计100 个细胞中的阳性细胞数，取均值，以百分数表示细胞阳性指数。染色强度:无染色为0 分;浅黄色为1 分;黄色为2 分;棕黄或棕褐色为3 分。阳性细胞百分率:无阳性细胞为0 分;阳性细胞数＜25%为1分;阳性细胞数25% ～50%为2 分;50% ～75%为3分;阳性细胞数≥75% 为4 分。2 项相加:0 分为(-);1 ～2 分为(+)，3 ～4 分为(+ +)，5 ～7 分为(+ + +)，+ ～+ + +均为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0 软件分析，单因素分析组间分类资料比较用χ2检验。将单因素分析中确定有统计学意义的变量进行多元Logistic 回归分析方法，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 单因素分析结果 有5 项危险因素包括吸烟、胆汁反流、肿瘤家族史、慢性萎缩性胃炎个人史和H.pylori 感染，VEGF 表达阴性组、阳性组比较差异有统计学意义(P ＜0.05);两组在饮酒、高盐饮食、经常食用烟熏炙烤食品和长期服阿司匹林等比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表1)。

表1 不同危险因素对PLGC 中VEGF 表达影响Tab 1 Effects of different risk factors on the expression of VEGF in PLGC

2.2 Logistic 回归分析 对吸烟、胆汁反流、肿瘤家族史、慢性萎缩性胃炎个人史和H.pylori 感染5 项因素进行多元Logistic 回归分析。结果表明，吸烟、胆汁反流、H.pylori 感染对PLGC 中VEGF 表达有影响，Exp(B)值分别是3.386、3.027、3.884，Exp(B)195%CI 分别为. 373 ～8. 349、1. 176 ～7. 795、1. 345 ～11.212(见表2)。

表2 不同危险因素的Logistic 回归分析结果Tab 2 Results of Logistic regression analysis of different risk factors

3 讨论

PLGC 包括胃黏膜肠化生和异性增生［1］，是胃癌发生的关键点。但目前癌前病变演变为胃癌的具体机制尚不清楚。研究显示VEGF 是目前研究较明确的参与胃黏膜演变过程，与胃癌的发生、发展及预后相关。了解不同危险因素与VEGF 高表达的相关性，可为我们制定有效的预防措施及寻找有效的干预手段。既往研究发现不良生活饮食习惯增加PLGC 的危险性，包括吸烟、饮酒、高盐饮食、经常食用烟熏炙烤肉类食品、家族史、慢性萎缩性胃炎个人史、H.pylori 感染等［2-3］。

个人习惯方面，本研究显示，吸烟是诱发癌前病变VEGF 高表达的危险因素，单因素分析差异有统计学意义，多元Logistic 回归分析OR 值为3.386。吸烟对影响VEGF 表达情况报道不一。国内王恋等［4］发现吸烟可诱发VEGF 表达升高。而Berent 等［5］报道VEGF 的表达未受吸烟的影响。本研究显示吸烟是相关危险因素，提示吸烟能够通过VEGF 途径促进胃黏膜癌变。饮酒经单因素分析差异无统计学意义，不属于诱发癌前病变VEGF 高表达的危险因素。Lu 等［6］研究发现酒精可以通过刺激VEGF 依赖性的血管生成促进乳腺肿瘤的生长。Tan 等［7］实验研究中发现长期饮酒会刺激VEGF 的表达，促进肿瘤血管生成，与酒精摄入量相关，与本文研究结果不一致，究其原因，可能本研究未对患者的饮酒量进行分类等因素有关。同时，高盐饮食、经常食用烟熏炙烤肉类食品无相关性，表明其可能通过其他因子途径促进胃黏膜恶变，而非VEGF。

个体情况包括服阿司匹林等非甾体药、胆汁反流、慢性萎缩性胃炎个人史、H. pylori 感染。其中服用阿司匹林等非甾体药物单因素分析，差异有统计学意义，研究报道［8］在体外实验中阿司匹林对骨髓瘤细胞具有抗增殖和抗凋亡的作用，其机制为通过调控Bcl-2和Bax 途径抑制VEGF 的表达。本研究发现胆汁反流、慢性萎缩性胃炎个人史.H.pylori 感染经单因素分析差异有统计学意义，但多元Logistic 回归分析显示慢性萎缩性胃炎个人史不是诱发VEGF 表达升高的危险因素。胆汁反流、H.pylori 感染是诱发癌前病变VEGF高表达的危险因素。并且发现脱氧胆酸比熊去氧胆酸在食管癌细胞中的表达有更强的促进作用，提示该胆汁盐具有更强的潜在致癌性［9］。H.pylori 是人类胃癌的Ⅰ类(即肯定的)致癌原。H. pylori 感染是触发PLGC 的重要致病因子，与胃癌发生密切相关，H. pylori感染可上调胃癌患者VEGF 的表达［10］。H.pylori 感染可能诱导COX-2 在PLGC 中的表达，COX-2 高表达进一步又上调VEGF 的表达［11］。而且H. pylori 在胃上皮细胞通过低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)依赖性途径诱导VEGF 的产生［12］。

综上所述，本研究结果提示吸烟、胆汁反流、H.pylori 感染是PLGC 中VEGF 表达升高的危险因素。不过，本研究样本量相对较小，可能存在研究结果的代表性不够和选择性偏倚。因此，尚需临床进行大样本前瞻性试验进一步验证本研究结果。相信不久的将来，随着研究的深入，各种危险因素的致病途径明确，对临床治疗和预防癌前病变有重要指导意义。

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