TLR4/NF-κB与急性冠脉综合征的相关性及通心络的干预作用

TLR4/NF-κB与急性冠脉综合征的相关性及通心络的干预作用

李玉红谢萍1李远2谢辉袁跃龙洪有勤徐光旭侯明英

(重庆市永川区人民医院心内科，重庆402160)

摘要〔〕目的检测不同类型冠心病患者炎性因子的变化及通心络的稳定斑块作用。方法选择冠心病患者66例，正常对照组24例，比较各组间Toll样受体(TLR)4、核因子(NF)-κB及肿瘤坏死因子(TNF)-α变化。将急性冠状动脉综合征(ACS)患者分为常规治疗组和通心络治疗组，治疗4 w后再次检测上述指标。结果ACS患者TLR4、NF-κB、TNF-α的表达较稳定性心绞痛组和正常对照组显著增高(P<0.01)。治疗后两组TLR4、NF-κB和TNF-α水平均降低(P<0.05)。且通心络治疗组TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低更显著(P<0.05)。结论通心络可减轻动脉的炎症反应，干预动脉粥样斑块的进展，有望成为新的稳定斑块药物。

关键词〔〕急性冠脉综合征；Toll样受体4；核因子-κB；肿瘤坏死因子-α

中图分类号〔〕R544.1〔文献标识码〕A〔

基金项目：重庆市卫生局医学科研计划项目(2012-2-303)；重庆市永川区科委软科学指导项目

1甘肃省人民医院心内科

2重庆医科大学附属永川医院中心实验室

第一作者：李玉红(1971-)，女，副主任医师，硕士，主要从事冠心病基础与临床研究。

Toll样受体(TLR)是介导先天免疫和炎症反应的主要受体，是连接先天免疫和获得性免疫的桥梁。TLR4被激活，启动胞内信号转导，最终激活核因子(BNF)-κB，从而参与冠心病的发生、发展。早期发现并稳定易损斑块对降低心血管事件有重要作用。目前对于冠状动脉内斑块不稳定或破裂的药物干预研究多局限于他汀类药物。最近有研究显示〔1〕，通心络能干预动脉粥样硬化斑块发展、有效预防斑块破裂。但是对于通心络能否通过抑制TLR4/NF-κB信号通路，从而发挥稳定斑块的作用，目前尚不明确。本实验通过观察急性冠脉综合征(ACS)患者通心络治疗前后TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α的变化，了解通心络对炎症反应的抑制作用，探讨通心络治疗ACS的可能机制。

1资料与方法

1.1一般资料46例ACS患者，其中不稳定性心绞痛24例，急性心肌梗死22例，男29例，女17例，年龄(60.01±12.08)岁，体重指数〔BMI,(23.26±1.98)kg/m2〕，吸烟15例，高血压21例。将其随机分为常规治疗组22例，男14例、女8例，平均年龄(59.20±12.01)岁，BMI(22.10±1.87)kg/m2，吸烟6例，高血压11例；通心络治疗组24例，男15例、女9例，平均年龄(60.21±12.86)岁，BMI(24.13±1.57)kg/m2，吸烟9例，高血压10例。常规治疗组给予ACS的常规治疗，包括阿司匹林、低分子肝素、β受体阻滞剂、硝酸酯类等。通心络治疗组在常规治疗的基础上合用通心络(2粒，3次/d，河北以岭药业公司生产)。

稳定性心绞痛患者20例，男12例，女8例，平均年龄(61.06±13.03)岁，BMI(25.03±2.01)kg/m2,吸烟7例，高血压8例。不稳定性心绞痛、急性心肌梗死和稳定性心绞痛均按美国心脏病学会/美国心脏协会标准，且均经冠状动脉造影证实。排除急性感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病、血管疾病、严重肝肾疾病、近1 w内有手术或外伤史者。

正常对照组为以胸痛住院，既往无高血压、糖尿病和冠心病史，经心电图、心肌酶学和冠状动脉造影排除冠心病的患者24例，其中男13例，女11例，平均年龄(56.80±8.30)岁，BMI(23.14±2.12)kg/m2，吸烟12例，无高血压患者。ACS组、稳定性心绞痛组及正常对照组，在年龄、性别、BMI、吸烟量及血脂等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。常规治疗组和通心络治疗组在年龄、性别、体重指数、吸烟量及血脂等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2标本采集所有入选患者治疗前1 d和治疗4 w后分别清晨空腹采集肘静脉血5 ml，其中3 ml用乙二胺乙酸二钾(EDTAK2)抗凝，另外2 ml不抗凝，立即用3 000 r/min低温离心机分离血浆，留取血清-75℃冰箱保存，备用。

1.3TLR4的测定流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4表达，取100 μl用EDTA-K2抗凝的全血，加入20 μlPE标记鼠抗人TLR4单抗(美国，Biolegend公司)，混匀后室温孵育30 min，用标本处理仪进行细胞固定和破膜，离心后弃上清，用2 ml Stain缓冲液(ph 7.4的磷酸缓冲液加2%小牛血清加0.1%叠氮钠)洗两遍，细胞沉淀用500 ml Stain缓冲液重悬后上流式细胞仪(美国，Coulter公司)检测，同时设不加标记抗体的阴性对照管。

1.4NF-κB的测定采用酶联免疫法测定NF-κB的水平。

1.5TNF-α的测定采用放射免疫法测定TNF-α的水平。

1.6统计学分析采用SPSS18.0进行方差分析、t检验。TLR4与NF-κB、TNF-α之间的关系采用Spearman相关分析。

2结果

2.1外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达和血清TNF-α的水平的变化ACS组外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达和血清TNF-α水平较稳定性心绞痛组和正常对照组显著增高(P<0.01)，稳定性心绞痛组和正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2ACS患者TLR4、NF-κB与TNF-α的相关性ACS患者外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达与NF-κB、TNF-α的水平呈正相关(r=0.717、0.721,P<0.05)。

2.3ACS患者治疗前后TLR4、NF-κB表达和TNF-α水平的变化治疗前通心络治疗组和常规治疗组外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达和血清TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达和血清TNF-α水平均降低(P<0.05)。且通心络治疗组外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达和血清TNF-α水平较常规治疗组降低更显著(P<0.05)。见表2。

表1　各组TLR4、NF-κB、 TNF-α水平比较

与正常对照组比较：1)P<0.01；与稳定性心绞痛组比较：2)P<0.01

表2　ACS患者治疗前后TLR4、NF-κB 、TNF-α水平的变化

与本组治疗前比较：1)P<0.05；与常规治疗组治疗后比较：2)P<0.05

3讨论

ACS确切机制尚未阐明，冠脉粥样斑块不稳定是其基本病理生理特点。参与斑块不稳定或破裂的可能机制较为复杂。目前研究表明炎症在其中起重要的作用。TLR4是介导免疫炎症反应的主要模式识别受体，当病原体入侵或损伤和硬化的动脉处存在有内源性配体如低度修饰的低密度脂蛋白时TLR通路即被活化，启动胞内信号转导，最终激活NF-κB。NF-κB是具有多向性调节作用的核转录因子，主要调控与免疫、炎症反应相关的基因的表达〔2〕。作为上游信号分子的NF-κB对炎性细胞因子及toll受体等因子的基因转录发挥重要的调控作用。NF-κB的活化诱导单核/巨噬细胞产生TNF-α等免疫炎性细胞因子、共刺激分子以及黏附分子等，参与冠心病的发生、发展〔3〕。Methe等〔4〕研究表明，ACS患者外周血单核细胞TLR4表达明显增加，且与斑块稳定性相关。TNF-α是一种具有多生物活性的炎性细胞因子，与机体的免疫炎症反应关系密切，参与动脉粥样硬化及冠心病的发生、发展。本研究结果提示外周血单核细胞TLR4、NF-κB与TNF-α水平明显增高与ACS发生、发展显著相关。或许TLR4、NF-κB、TNF-α不仅可以作为冠心病的危险因子，也可作为冠心病心血管事件发生的预测和预后指标。通心络是由人参、水蛭、土鳖虫、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、降香、冰片等药物组成，具有益气养血、活血通络的作用。其治疗冠心病已10多年，确切疗效已成共识。有研究在冠状动脉硬化大白兔模型实验中发现通心络有稳定斑块作用，且其作用相当于小剂量辛伐他汀〔5〕。有研究表明通心络能降低细胞胞质氧化型低密度脂蛋白胆固醇浓度，抑制动脉的炎症反应，减缓动脉粥样硬化进程〔6〕。本研究表明通心络能减轻动脉粥样硬化斑块炎症反应，有稳定斑块作用。此作用可能与其抑制TLR4过度表达，及其信号通路下游炎性细胞因子TNF-α的分泌，从而稳定冠状动脉粥样硬化易损斑块，减少心血管事件发生。

4参考文献

1Zhang L，Liu Y，Lu XT，etal.Traditional Chinese medication Tongxinluo dose-dependently enhances stability of vulnerable plaques：a comparison with a high-dose simvastatin therapy〔J〕.AM J Physiol Heart Circ，2009;297(6)：H2004-H2014.

2Zhang GL，Sankar Ghosh.Toll-like receptor-mediated NF-κB activation：a phylogenetically conserved paradigm in innate immunity〔J〕.J Clin Invest,2001；107(1)：13-9.

3Wyss CA，Neidhart M，Altwegg L，etal.Cellular actors，Toll-like receptors，and local cytokine profile in acute coronary syndromes〔J〕.Eur Heart J，2010；31(12)：1457-69.

4Methe H，Kim JO，Kofler S，etal.Expansion of circulating TLR4-positive monocytes in patients with ACS〔J〕.Circulation，2005；111(20)：2654-61.

5李震，杨跃进，秦学文，等.通心络与辛伐他汀对兔粥样硬化斑块不稳定性干预的对比研究〔J〕.中华医学杂志，2006；86(44)：3149-50.

6吴以岭，游佳华，袁国强，等.通心络超微粉对高脂饮食兔胸主动脉NF-κB、胞间粘附分子1及血管细胞粘附分子1表达的影响〔J〕.中华心血管病杂志，2007；35(3)：271-4.

〔2014-02-16修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)