奶牛排卵延迟的综合诊断

文/祖农江•阿布拉 刘贤侠 王汉魁 王海滨 王建梅 王树杰 姜志涛 吴妍妍谷新利 李 明

（1 新疆维吾尔自治区奶业办公室；2 新疆石河子大学动物科技学院；3 新疆西部牧业股份有限公司；4 新疆兵团乳业集团天澳牧业有限公司）

目前，奶牛不孕症已经成为制约奶牛场发展的“瓶颈”因素之一，给规模化奶牛场造成了极大的经济损失，其中奶牛排卵延迟导致的排卵障碍是引起奶牛不孕症的主要原因之一。据国外文献报道，排卵延迟主要会导致奶牛受精失败，多次配种不孕，以致奶牛产犊间隔延长和配种次数增加，最终影响奶牛正常的繁殖力。

对奶牛的排卵延迟，奶牛场应采取“早发现、早诊断、早治疗”的策略，以降低该病的发病率，降低奶牛场的经济损失。临床上诊断奶牛排卵延迟的常用方法是临床症状观察结合直肠检查，但直肠检查容易造成奶牛排卵延迟与不排卵的误诊，尤其是难以鉴别诊断。B超扫查最基础声像图是二维断面图像，应用B超扫查能够提高排卵延迟诊断的准确性。另外，测定患病牛血清中的激素浓度也是鉴别奶牛排卵延迟与不排卵的一种有效手段。本试验通过查阅相关资料、观察临床症状、应用直肠检查结合B超扫查以及激素检测的方法对排卵延迟进行综合诊断，以供同行在诊治奶牛排卵延迟时作为参考。

1 材料与方法

1.1 试验地点和试验动物

在新疆西部牧业股份有限公司牛场、奎屯澳利亚牧业有限公司牧场、克拉玛依绿成农业开发有限责任公司牛场的母牛中，选取无传染病（结核、布病），寄生虫病以及其它疾病（子宫炎、蹄病、乳房炎等）的未孕荷斯坦奶牛，统计试验奶牛的耳号、胎次、产犊日期、发情日期与配种日期、产奶量、体况评分。试验奶牛按规范饲养，饲养方式为散栏饲养，全混合日粮（Total Mixed Ration，TMR）饲喂。

1.2 试验仪器与试剂

1.2.1 试验仪器

50s型Tringa Vet便携式兽用B超仪，配备5.0-7.5 MHz变频线阵探头、配备Ni-MH 12 V充电电池各1 个、2215型NiCd/NiMH charger各1 个，以及配套的50s Tringa communication software version 1.0图像处理软件ODTCOMM和双向红外传输接口，荷兰Piemed ICAL公司生产；Power Wave X32 BioTekB酶标仪，美国BioTek公司生产。

1.2.2 试验试剂

耦合剂，天津市南开区华科医疗器械厂生产的AB-1型医用超声耦合剂，规格250 g；牛雌激素ELISA试剂盒，灵敏度1 pg/mL，产品编号E11E0023，购自于上海蓝基生物技术有限公司；牛孕酮ELISA试剂盒，灵敏度0.1 ng/mL，产品编号E11P0200，购自于上海蓝基生物技术有限公司。

1.3 奶牛超声扫查方法

1.3.1 准备工作

奶牛头颈部在颈枷内保定，奶牛后肢用软绳捆绑保定。向人用避孕套内挤入适量耦合剂，把探头放入其内，以减少探头摩擦造成的损伤，保证图像的清晰。戴上一次性塑料手套，在手套外面涂抹部分石蜡油润滑，先用手掏出直肠内宿粪，然后用直肠检查法初步判定两侧卵巢的位置。

1.3.2 B超扫查方法

用手拿B超探头伸入直肠，用拇指、食指和中指触摸到卵巢，将卵巢进行固定，然后协调配合用手把卵巢固定在线阵探头之下，调整探头和卵巢，探头紧贴直肠壁对卵巢进行扫描，观察实时图像，当显示出卵巢上卵泡或黄体的最大切面图像后，按下冻结键，保存典型声像图。

任何一种理论或学说的诞生都不是凭空创造出来的，都是在一定的理论支撑和现实土壤中萌发并不断成长。毋庸置疑，哈贝马斯以其独特的视角和敏锐的批判分析能力，第一次系统的阐释了科学技术意识形态论，但这一理论，同样是在一定的理论源脉与现实背景即“两种学说争论”与“两股现实潮流”的影响下产生的。

1.4 奶牛血清中雌激素和孕酮的测定方法

1.4.1 血样采集与保存

试验奶牛在B超诊断后，每头颈静脉或尾静脉用一次性塑料采血器采集2 管血液，每管3～4 mL，并对应牛号进行标注。静置数小时后，吸取析出的血清，移血清于1.5 mLEP管中，于-20 ℃冰箱保存待测。同时选取10 头正常发情奶牛作为对照组，颈静脉采血10 mL，处理同上。

1.4.2 血清中雌激素和孕酮测定方法

雌激素和孕酮测定按照试剂盒说明书步骤进行操作。

1.5 奶牛排卵延迟的诊断方法

1.5.1 查阅繁殖记录

1.5.2 临床症状

发情症状和正常发情一样，但发情的持续期延长。

1.5.3 直肠检查

发情期检查卵巢和子宫无明显疾患，卵巢上有卵泡存在，大小正常，人工授精后次日检查成熟卵泡未排卵。

1.5.4 B超检查

人工授精后次日在同一卵巢部位成熟卵泡大小和位置基本未发生变化，声像图显示低回声液性暗区。

2 结果与分析

2.1 排卵延迟奶牛的诊断结果

通过运用常规方法结合B超在排除子宫疾病和其它疾病的基础上共诊断出排卵延迟奶牛38 例。详见表1。

表1 卵巢囊肿和排卵延迟奶牛的诊断结果 单位：头

2.2 排卵延迟奶牛的典型B超声像图

图1中的E～H为澳利亚公司第九牧场6002号、1003号奶牛和西部牧业大丰牛场080024号、03207号奶牛排卵延迟的B超声像图，声像图特征显示卵泡壁呈强回声，边界清晰、光滑，卵泡呈低回声液性暗区，图中E、F、G、H的卵泡直径分别为：18.9、20、20.8、22.7 mm。

图1 排卵延迟奶牛的B 超声像图

2.3 激素测定结果

促卵泡素（Follicle Stimulating Hormone，FSH）的功能是促进卵泡发育和成熟，协同促黄体生成激素（Luteinizing Hormone，LH）促使发育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵；LH的功能是刺激卵泡发育成熟，诱发排卵，此外雌二醇（E2）、孕激素（P4）也对排卵有一定的影响。本文对38 头排卵延迟奶牛中的10 头奶牛进行了以上激素含量的测定（表2）。

表2 正常组与排卵延迟奶牛4 种激素浓度测定结果

从表2的统计分析结果可以看出，P4浓度正常组与排卵延迟组差异显著（P<0.05），FSH浓度正常组与排卵延迟组差异极显著（P<0.01），E2和LH浓度正常组与排卵延迟组差异均不显著（P＞0.05）。以上结果表明，激素的变化对奶牛排卵延迟有一定影响，但LH不是主要影响因素，与其他人的报告结果不是很一致，可能与本试验研究的样本量、采样时间、检测方法等有一定的关系。

3 讨论

3.1 直肠检查和B超扫查诊断结果表明，排卵延迟奶牛外部发情症状正常，直肠检查卵巢和子宫无异常，但发情持续的时间比正常奶牛要长。通过查阅繁殖记录，对发情配种正常但未受孕的奶牛在下次实施人工授精后10～12 h进行直肠检查和B超扫查，如果卵泡仍然存在并且B超声像图上显示为低回声液性暗区，卵泡直径大小和位置也基本未变，连续跟踪检查最终卵泡会发生排卵，由此可诊断为排卵延迟。

3.2 排卵延迟属于卵巢机能不全或排卵障碍，指在发情时有发情的外表症状，但不出现排卵，在奶牛身上时有发生。动物的正常排卵是在下丘脑-垂体-卵巢轴的相互调节下进行的，排卵前成熟卵泡分泌大量的雌激素通过正反馈诱发排卵前的LH峰的出现。所以排卵延迟往往与LH脉冲释放减少或不及时有关，也可能与雌激素合成受阻及某些排卵活性降低有关。

3.3 该病在诊断时要注意与不排卵进行鉴别诊断，虽然二者都属于排卵障碍范畴，并且临床症状比较相似，但不排卵是指在奶牛出现发情后，发情期内卵泡存在的时间超过4 天以上，但在下一发情周期的中期无成熟的黄体生成。因此在临床诊断方面要详细跟踪检查区别不排卵和排卵延迟，以免在临床诊断中误诊。因此，B超跟踪检查，结合病史调查、直肠检查等方法，对初步制定规模化奶牛场奶牛排卵延迟诊断的方法是有益的补充。

3.4 饲养管理不当，应激（过度挤奶、气温突变、温度过低或过高）和遗传也是导致奶牛排卵延迟的重要原因之一，需要继续深入的研究。

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