综合康复对大鼠受压坐骨神经微血管生成的影响

陈峰 杜震生 曹惠萍 艾名洋 赵一强 宋维永518105广东省深圳市松岗人民医院

综合康复对大鼠受压坐骨神经微血管生成的影响

陈峰 杜震生 曹惠萍 艾名洋 赵一强 宋维永
518105广东省深圳市松岗人民医院

目的：探讨康复训练联合针刺疗法对大鼠卡压坐骨神经微血管生成的影响。方法：造模成功的雄性SD大鼠40只，随机分为4组。取大鼠卡压神经中段标本石蜡切片进行CD34、血管内皮生长因子（VEGF）免疫组化染色，观察神经微血管密度（MVD）及VEGF表达。结果：B、C、D组MVD及VEGF表达均高于A组（P＜0.05）。D组MVD及VEGF表达均高于B组和C组（P＜0.05）。结论：康复训练及针刺疗法对大鼠受卡压坐骨神经微血管生成有促进作用，二者联合运用，效果更优。

康复训练；针刺疗法；坐骨神经；神经微血管生成；血管内皮细胞生长因子

周围神经卡压是手足外科常见、多发的损伤。精湛的显微外科技术能精确地解除卡压，然而，周围神经受压后，如何防止压迫性神经传导功能受损，恢复周围神经的传导功能，仍是当前研究的难点和热点。稳定的微循环可保证周围神经的正常传导功能，神经再生、功能恢复的关键是神经微血管的生成［1,2］。本实验采用免疫组织化学方法观察康复训练联合针刺疗法对大鼠卡压坐骨神经微血管生成的影响，探讨其可能的意义。

资料与方法

主要试剂和动物分组：小鼠抗大鼠VEGF单抗、SABC免疫组化染色试剂盒、兔抗大鼠CD34多克隆抗体、SP染色试剂盒、DAB显色试剂盒均由武汉博士德生物技术有限公司提供。其他试剂均为国产AR级。选用雄性SD大鼠40只（广州中医药大学实验动物中心提供），体质量230～250 g。所有大鼠均在同一条件温室饲养，光照12 h/d，自由进食、饮水。造模成功后的雄性SD大鼠40只简单随机化摸球法等分为4组：A组（对照组）：仅祛除卡压；B组（康复训练组）：祛除卡压后行康复训练；C组（针刺组）：祛除卡压后行电针治疗；D组（康复训练+针刺组）：祛除卡压后行康复训练加电针治疗。

大鼠坐骨神经卡压模型的建立及各组处理：①动物模型制作：动物模型参照经典Mackinnon大鼠坐骨神经卡压模型制作［3］。模型实验动物于同一动物饲养室适宜环境下适应性饲养1周。实验动物于术前8 h禁食水，常规麻醉、手术，制作坐骨神经卡压模型。②康复训练［4］：祛除卡压术后第2周开始游泳训练，1次/d，第1天10min，逐日增加3min，术后第3周开始每天游泳30min，直到术后第3周结束取材为止。③电针治疗［5］：穴位电针刺激于祛除卡压术后第2天开始，在特别的支架上固定，按实验针灸学进行穴位定位，电针正极接在近心端，负极接在远心端。分别夹在“足三里”和“环跳”穴处的针柄上。具体操作严格按文献进行，直到术后第3周结束取材为止。

CD34免疫组化染色及MVD测定［6］：取卡压神经中段标本石蜡切片，进行CD34免疫组化染色（具体步骤按照试剂盒说明书进行）。光学显微镜下观察神经微血管密度（MVD）：CD34阳性染色微血管呈棕黄色至深棕色。参照Weidner微血管计数方法［7］，呈现棕色内皮细胞群或单个内皮细胞记为一个血管，选择染色切片的血管密集区，在200倍视野下选5个再生神经视野，计数其中微血管量，求其平均值。

VEGF表达检测：取卡压神经中段标本石蜡切片，采用免疫组化染色（具体步骤按照试剂盒说明书进行）。利用德国Simple PCI图像分析系统测量灰度，将免疫组化染色结果转化为灰度值进行定量分析。阳性细胞着色部位为细胞膜或细胞浆，颜色为棕黄色。每张切片以组织间质空白处入射光的值为定标，每张切片选取5个视野（200倍），测定灰度值，取其平均值。

统计学方法：录入SPSS 19.0软件完成统计分析。所有数据均以（x±s）表示，两组均数比较，采用t检验。以P＜0.05表示有统计学意义。

结果

与A组比较，B、C、D组MVD含量均高于A组（P＜0.05）；与B、C组分别比较，D组MVD含量均高于B组和C组（P＜0.05）。大鼠坐骨神经微血管密度的测定，见表1、图1。

与A组比较，B、C、D组VEGF表达均高于A组（P＜0.05）；与B、C组分别比较，D组VEGF表达均高于B组和C组（P＜0.05）。血管内皮细胞生长因子的表达，见表1、图2。

讨论

周围神经卡压是因为其特定部位受压后导致其传导功能受损的疾病，是手足外科常见疾病之一。神经卡压导致其微循环改变，引起不同程度的感觉和运动功能障碍，其机制［8,9］：①周围神经微循环障碍和机械性损伤导致其固有结构受损。②周围神经的血液供应主要来自于其周围的肌肉和筋膜，而周围肌肉的萎缩和筋膜的受损导致卡压神经缺血、缺氧。③周围神经的血液供应是其再生的决定性因素，但卡压神经出现的炎性反应增加了耗氧量，从而加重了卡压神经的缺氧。④神经损伤后MVD下降，血管数量减少以及血管通透性的增加，都是导致卡压神经缺血、缺氧的重要因素。Weerasriya通过实验发现神经受损后其微循环中血管通透性达最高蜂的时间3 h［10］。Podhajsky发现损伤神经早期血管半径和周长增加［11］，而血管数量减少，神经修复期血管数量和密度增加，而血管数量增加促进受损神经再生。

杨米雄等通过实验发现主动运动可以明显改善大鼠卡压后坐骨神经的传导功能和促进其再生［12-13］。张立宁等认为电针可促进受损神经再生［14］。但对康复训练联合针刺疗法的综合康复促进神经血管再生的实验研究较少。

神经再生过程中其微循环中血管生成是主要的因素，而血管内皮生长因子（VEGF）又是血管生成的决定性因素［15］。 CD34是跨膜细胞表面糖蛋白，是毛细血管的内皮细胞标记物，故常用其标记新生血管［16-17］。

表1 大鼠坐骨神经MVD含量及VEGF表达的变化（x±s）

图1 大鼠受压坐骨神经各组CD34免疫组化染色（×200）

图2 大鼠受压坐骨神经VEGF在各组的表达（×200）

本研究采用康复训练和针刺疗法治疗周围神经卡压，观察该2种疗法是否促进血管内皮细胞生长因子的表达，探讨其对于神经微血管生成和功能恢复的影响，为临床治疗周围神经损伤提供一些新的思路。在本实验中，与A组比较，B、C、D组MVD含量及VEGF表达均高于A组（P＜0.05）；与B、C组分别比较，D组MVD含量及VEGF表达均高于B组和C组（P＜0.05）。说明康复训练和针刺疗法均能促进受损伤大鼠坐骨神经微血管生成，且二者联合效果更明显，从而证实了康复训练联合针刺疗法的综合康复能促进受卡压大鼠坐骨神经再生修复，对神经功能的修复有积极的影响，为临床从神经微循环角度治疗神经损伤提供了理论依据。

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Influence of com prehensive rehabilitation on them icrovascular generation of com pressed sciatic nerve in rat

Chen Feng,Du Zhensheng,Cao Huiping,AiMingyang,Zhao Yiqiang,SongWeiyong Songgang People'sHospitalofShenzhen City,Guangdong Province 518105

Objective：To explore the influence of rehabilitation training combined acupuncture therapy on the microvascular generation of compressed sciatic nerve in rat.Methods：40 cases ofmale SD ratswith successfulmodeling were random ly divided into four groups.The paraffin section ofmiddle specimen from compressed nerve in ratwere given immunohistochemical staining for CD34,vascular endothelialgrowth factor（VEGF）,the nervemicrovascular density（MVD）and VEGF expression were observed. Results：TheMVD and VEGF expression of the group B,group C,group Dwere higher than thatof the group A（P＜0.05）.The MVD and VEGF expression of the group D were higher than that of the group B and group C（P＜0.05）.Conclusion：Rehabilitation training and acupuncture therapy had promoting effecton themicrovascular generation of compressed sciatic nerve in rat,and the both jointhad bettereffect.

Rehabilitation training；Acupuncture therapy；Sciatic nerve；Nerve microvascular generation；Vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.24.1