长柄侧耳发酵液预防小鼠高脂血症、护肝及抗氧化作用研究*

邓西贝，周 贤，张 楠，李爱欣，王淑敏

（长春中医药大学药学院，吉林 长春 130117）

〈生理生化〉

长柄侧耳发酵液预防小鼠高脂血症、护肝及抗氧化作用研究*

邓西贝，周 贤，张 楠，李爱欣，王淑敏**

（长春中医药大学药学院，吉林 长春 130117）

研究长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠血脂的影响，以及护肝和抗氧化的作用。通过高脂饮食建造小鼠高脂模型，同时以长柄侧耳发酵液灌胃给药，生理盐水作为空白对照，脂必妥片作为阳性对照。连续灌胃45 d后，测定甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白（HDLC）、低密度脂蛋白（LDLC）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、总超氧化物歧化酶（T－SOD）、丙二醛（MDA）、微量还原型谷胱甘肽（GSH）含量。发酵液组较模型组TG、CHO、LDLC、ALT、AST、MDA、GSH含量均有不同程度降低；HDLC、SOD含量有不同程度提高。长柄侧耳发酵液可以预防由高脂饮食造成的小鼠高脂血症，同时具有保护肝脏和抗氧化作用。

长柄侧耳；降血脂；转氨酶；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽

长柄侧耳（Pleurtus Spodotecus Fr.），又名灰白侧耳、匙形侧耳、灰冻菌。属于担子菌纲（Basidiomycetes）、伞菌目 (Agaricales)、侧耳科（Pleurotaceae)的真菌，主要分布于吉林、云南、贵州、西藏等地，是一种常见的食（药）用菌[1]。近年来调查显示，我国成人血脂异常的患病率已达到18.6%[2]，由此导致的高脂血症、脂肪肝等疾病越来越受到关注。

现代研究表明，侧耳属真菌具有较好的提高机体免疫力、降血脂、降血压、抗肿瘤等作用，本项目主要研究长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠高脂血症的预防作用，对肝脏的保护作用及抗氧化作用，为开发利用长柄侧耳提供科学依据。

1 材料与方法

1.1仪器与试药

酶标仪（TECAN）；冷冻离心机（Eppendorf）；AUY220万分之一分析天平，岛津制作所；甘油三酯（TG）试剂盒、总胆固醇（CHO）试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、总超氧化物歧化酶（T－SOD）测试盒、BCA法测定微量蛋白含量试剂盒、谷草转氨酶（AST）测试盒、谷丙转氨酶（ALT） 测试盒、微量还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所；脂必妥片，成都地奥九泓制药厂；长柄侧耳发酵液干粉，由长春中医药大学药用真菌研究所提供。

1.2实验动物

健康昆明小鼠，体重18 g～22 g之间，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供。

1.3实验方法

1.3.1 高脂饲料配制

高脂饲料配方，小鼠基础饲料67%、蛋黄3%、猪油30%。

1.3.2 动物分组和模型建立

健康昆明小鼠80只，体重18 g～22 g，随机分为8组，每组10只，雌雄各半，即空白对照组、模型组、阳性对照组（脂必妥）、不同给药剂量长柄侧耳发酵液组（4 g·kg－1、2 g·kg－1、1 g·kg－1、0.5 g·kg－1、0.25 g·kg－1）。各组小鼠均自由进食饮水，每三天称一次体重，按小鼠体重灌胃给药（0.2 mL/10g）。具体方案见表1。

表1 实验方案Tab.1 Experimental scheme

1.3.3 血脂四项的测定

小鼠连续灌胃给药45 d，末次给药后禁食不禁水12 h，摘眼球取血，置于1.5 mL离心管中，转速3 000 r·min－1离心10 min，分离上层血清，根据相应试剂盒说明书，测定血清中的总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDLC）和低密度脂蛋白（LDLC）含量。

1.3.4 血液中AST、ALT含量的测定

取1.3.3中分离得到的血清，根据相应试剂盒说明书，测定血液中谷草转氨酶（AST）含量、谷丙转氨酶（ALT）含量。

1.3.5 抗氧化指标检测

用生理盐水将肝脏组织块上的血冲洗干净，滤纸吸干水分，准确称取肝脏组织块重量，根据重量（g）和体积（mL）的比例1∶9，准确加入9倍量的生理盐水，在冰水浴的条件下，机械匀浆，然后以2 500 r·min－1的速度离心10 min，分离上清液，得到浓度为10%的肝脏组织匀浆，备用。根据相应试剂盒说明书，用肝脏组织匀浆测定总超氧化物歧化酶（T－SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、微量还原型谷胱甘肽（GSH）含量。

1.3.6 数据处理

测得数据经SPSS13.0进行分析，以均数±标准差表示，组间均数比较采用t检验法（方差不齐，采用非参数检验法），比较组间显著性差异，p＜0.05具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠血脂四项影响

血脂四项测定结果见表2、表3。

由表2和表3可见，与空白组相比，模型组甘油三脂（TG）、总胆固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDLC） 含量明显增高（p＜0.01），高密度脂蛋白（HDLC）含量明显降低（p＜0.01），这说明小鼠高血脂症模型造模成功；与模型组比较，发酵液各组TG、CHO、LDLC含量均明显降低（p＜0.01），发酵液3组、5组HDLC含量明显升高（p＜0.01），说明长柄侧耳发酵液能明显抑制小鼠血清中TG、CHO、LDLC含量，提高HDLC含量；与阳性组比较，发酵液1组、2组、3组、4组血清中TG含量均没有明显差异，说明其降低小鼠血清中TG含量的功效与阳性药接近，发酵液5组与阳性组相比TG含量存在显著差异（p＜0.05），说明其降低TG含量的功效比阳性药更好，发酵液1组、4组中CHO含量较阳性组明显降低（p＜0.05），说明这两组降低CHO含量的功效比阳性组更好，其余各组与阳性组接近，发酵液3组、5组HDLC含量没有显著差别，说明其对小鼠血清中HDLC含量的提高效果与阳性药相近，发酵液各组与阳性组相比，小鼠血清LDLC含量均没有明显差异，说明其对小鼠血清中LDLC的降低效果与阳性药相近。

表2 长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠TG、CHO含量的影响Tab.2 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on TG,CHO content of high－fat diet mouse

表3 长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠HDLC、LDLC含量的影响Tab.3 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on HDLC,LDLC content of high－fat diet mouse

2.2长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠血清中AST、ALT含量的影响

AST、ALT测定结果见表4。

表4 长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠AST、ALT含量的影响Tab.4 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on AST,ALT content of high－fat diet mouse

由表4可知，与空白组相比，模型组小鼠ALT、 AST含量显著提高（p＜0.01）；与模型组相比，阳性组与发酵液各组AST、ALT含量均明显降低（p＜0.01），说明阳性药和长柄侧耳发酵液均具有降低高脂饮食小鼠血清中AST、ALT含量的功效。

2.3长柄侧耳发酵液对高脂饮食小鼠组织中SOD、MDA、GSH含量的影响

SOD、MDA、GSH含量测定结果见表5。

由表5可知，与空白组、模型组相比，阳性组和发酵液各组SOD活性均显著提高（p＜0.01），说明其具有提高小鼠肝脏组织中SOD活性的功效；与空白组、模型组相比，阳性组和发酵液1组、3组、4组、5组MDA含量存在不同程度的降低，且存在显著差异（p＜0.01或p＜0.05），说明上述各组能够降低小鼠肝脏组织中MDA含量，与阳性组相比，发酵液1组、3组MDA含量明显降低（p＜0.01），说明发酵液1组、3组降低MDA含量的能力优于阳性药；与模型组相比，发酵液1组、2组、5组中GSH含量明显提高（p＜0.01），说明其能够提高小鼠肝脏组织中GSH含量，与阳性组相比，发酵液1组、5组中GSH含量存在显著差异（p＜0.01），说明其提高GSH含量的能力优于阳性药。

表5 长柄侧发酵液对高脂饮食小鼠组织中SOD、MDA、GSH含量的影响Tab.5 Influence of Pleurotus spodoleucas zymotic fluid on SOD,MDA,GSH content of high－fat diet mouse

3 讨论

高脂血症是一种比较常见的疾病，是由于血液内血脂含量过高所造成。目前主要分为高胆固醇血症、高甘油三脂血症和二者都高的复合性高脂血症。本文通过小鼠长期的高脂饮食，使血清中的CHO、TG、LDLC含量高于正常值，HDLC含量低于正常值，形成复合性高脂血症。以长柄侧耳发酵液进行灌胃给药后，上述异常指标均能恢复到正常水平，证明长柄侧耳发酵液对高脂血症有显著的预防作用。现代研究发现，高血脂可以直接引起脂肪肝，是形成脂肪肝的重要因素之一[3－8]。当脂肪肝引起的肝功能发生病理改变时，可出现血清中AST和ALT含量增高的现象。长柄侧耳发酵液能使造模小鼠血清AST和ALT含量降至正常值，证明长柄侧耳发酵液在降低血脂的同时，具有保护肝脏的功效。

测定组织中MDA含量的高低可间接反映机体细胞受氧自由基损伤的程度，SOD和GSH是人体重要的抗氧化剂，测定其在组织中的含量可间接反映机体抗氧化的能力[9]。长柄侧耳发酵能够提高小鼠的抗氧化能力，其中以1组、5组抗氧化能力最强。当机体抗氧化能力提高时，可以抑制脂质过氧化作用，从而对高脂血症和脂肪肝起到辅助治疗的作用。

综上所述，长柄侧耳发酵液不仅对高脂血症具有良好的预防作用，而且可以提高机体抗氧化能力，保护肝脏。根据各项指标综合分析，发酵液5组效果最为明显，选定0.25 g·kg－1为小鼠最佳给药计量，为进一步研究长柄侧耳对高脂血症是否有治疗作用以及作用机理奠定基础。

[1]图力古尔，李玉.我国侧耳属真菌的种类资源及其生态地理分布[J].中国食用菌，2001，20（5）：8－9.

[2]中华人民共和国卫生部、科技部、统计局.中国居民营养与健康现状[J].中国心血管病研究杂志，2004，2（12）919－922.

[3]全国高胆固醇血症控制状况多中心协作组.高胆固醇血症临床控制状况多中心协作研究达标率及影响因素[J].中华心血管病杂志，2008，30（2）：109－1l4.

[4]纪求尚，张运，杨晓静.急性心肌梗塞死患者炎症介质的动态变化及意义[J].中国动脉硬化杂志，2006，11（4）：349－351.

[5]曾民德.脂肪肝[J].中华消化杂志，2007，11（3）：117.

[6]Hodel C.Myopethy and rhabdomyolysis with lipid lowering drugs[J].Toxicology Letters,2007,128(1－3):159－168.

[7]李洁琪，赵水平，吴洁.非诺贝特抑制脂肪细胞组织因子表达组织[J].中国动脉硬化杂志，2007，12（5）：565－567.

[8]任静怡，陈红，罗宇.联合应用辛伐他汀和非诺贝特治疗混合型高脂血症的疗效及安全性观察[J].中华心血管病杂志，2005，33（2）：122－126.

[9]李永明，许丽，郑海洪.翻白草对大鼠高血脂模型的降血脂及抗氧化作用[J].畜牧兽医科技信息，2012（7）：23－24.

Research on Pleurotus spodoleucas Zymotic Fluid’s Capability of Preventing Mice’s Hyperlipidemia,Liver Protection and Antioxidation

DENG Xi-bei,ZHOU Xian,ZHANG Nang,LI Ai-xin,WANG Shu-min
(School of Pharmaceutical Sciences Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

The influence of Pleurotus spodoleucas Fr.zymotic fluid on high fat diet mouse’s blood fats,and the capability of liver protection and antioxidation were studied.Building a high－fat model of mice by high－fat diet while giving Pleurotus spodoleucas zymotic fluid,taking zhibituo as the control medicine and physiological saline as blank control,after 45 days of continuous intragastric administration,the content of TG,CHO,HDLC,LDLC,ALT,AST,SOD,MDA,GSH were detected.TG, CHO,LDLC,ALT,AST,MDA,GSH content of zymotic fluid group had decreased in varying degrees compared to model group. HDLC,SOD content had increased in varying degrees.Pleurotus spodoleucas zymotic fluid can prevent hyperlipidemia induced by high－fat diet while possesses the capability of liver protection and antioxidation.

Pleurotus spodoleucas;hypolipidemic;transaminase;superoxide dismutase;glutathione

A

1003-8310（2015）03-0037-04

10.13629/j.cnki.53－1054.2015.03.010

吉林省科技厅项目（201205050）。

邓西贝（1986－），女，在读硕士研究生，研究方向为微生物与生化药物。E－mail:564757205@qq.com

**通信作者：王淑敏（1965－）女，博士，教授，主要从事中药化学分析/药用真菌的研究与开发方面研究工作。E－mail:446097156@qq.com

2015－02－15