苹果青霉病菌在苹果组织中的分布检测

张悦丽+张博+田淑慧+戴争+齐军山+马立国+李长松+任凤山

摘要：为评估苹果感染青霉病后的食用安全性，本试验检测了苹果青霉病菌（Pnicilliumsp.）在苹果组织中的分布。结果表明：病斑处青霉菌菌落数最高，为2800cfu/g；病斑外延1.Ocm处，青霉菌菌落数为120cfu/g；病斑外延1.5cm处，青霉菌菌落数为18cfu/g；病斑外延2.0cm处，未检测到苹果青霉病菌。

关键词：苹果青霉病菌；分布检测；展青霉素；食品安全

中图分类号：S436.611.1+9+TS201.6文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）04-0103-03

苹果青霉病又称水烂病，危害苹果、梨、葡萄等成熟及近成熟果实，多发生在贮藏中后期，从机械损伤和病虫害伤口入侵发病，造成大量烂果，是苹果贮运中最严重的烂果病，塑料袋装苹果发病尤为严重。该病的发生与贮藏环境有密切联系，温度高、温度大发病较重，反之则轻。国外报道苹果青霉病多由展青霉（P.expansum）[1]引起，而国内则报道常现青霉（P.frequentan）[2]、圆弧青霉（P.cyclopium）和壳青霉（P.crustosum）[3]也可引起。青霉病菌在代谢过程中可产生对植物和动物有毒性的次生代谢产物，如扩展青霉在侵染果品过程中能产生展青霉素（patulin）。展青霉素又叫棒曲霉毒素，对植物和动物具有很强的毒性，可引起人呕吐、反胃[4]。食品添加剂联合专家委员会（JECFA）研究报告表明，展青霉素对胚胎有毒性，同时伴随有母体毒性展青霉素在相当大的剂量范围内，可使小鼠大脑、肾脏、肝脏中的DNA链破裂，其中大脑是最重要的靶器官[5]。此外，展青霉素对成年哺乳动物和胚胎动物的肾脏也有毒害作用[6]。展青霉素直接接触皮肤，可引起DNA损伤，从而造成细胞周期阻滞和内部介导细胞凋亡，积累大量具有皮肤毒性的聚胺产物[7].我国相应标准[8，9]规定苹果山楂等半成品中展青霉素的限量为100μg/kg，且关于展青霉索的去除及工艺正在进一步的研究中[10]。因此，明确青霉菌（Penicilliumsp.）在苹果组织中的分布情况至关重要。为了弄清苹果染青霉病后青霉病菌在苹果健康组织中的分布情况，进行了本试验，以期为其风险情况做出评估。

收稿日期：2014-12-08

基金项目：国家农产品质量安全风险评估重大专项（GJFP2014002）

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试苹果购自市场罹患青霉病的苹果，品种为黄金帅。

1.1.2培养基PDA培养基。

1.2试验方法

1.2.1取样将感染青霉病的苹果，取病斑处及病斑外延1.0、1.5、2.0cm处苹果组织，每处各取样25g，匀浆后备用。

1.2.2培养称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1：10稀释液。取1：10稀释液1mL注入含有9mL无菌水的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸，此液为1：100稀释液。依次稀释。根据对样品污染状况的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液（可包括原液），分别取1mL于2个无菌平皿内，同时取1mL灭菌蒸馏水加入2个无菌平皿作空白对照。及时将15～20mL冷却至46℃的PDA培养基倒入平皿，转动平皿使其混合均匀。待培养基凝固后，将平板倒置，（28±1）℃培养5d，观察并记录。

1.2.3菌落计数按照2010年版食品微生物学标准提供的食品微生物学检验霉菌计数方法，肉眼观察，必要时可用放大镜，选取菌落数在10～150cfu的平板，根据菌落形态分别计数青霉菌。青霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。

2结果与分析

经过菌落计数，本试验在苹果青霉病病斑外延1.5cm范围内都检测到了青霉病菌的存在，病斑外延2.0cm范围外未检测到青霉病菌的存在，并确定了适合菌落计数的样品稀释倍数。在苹果青霉病病斑处取样的最佳稀释倍数为1000倍，青霉菌菌落数为2800cfu/g；病斑外延1.0cm处，最佳稀释倍数为100倍，青霉菌菌落数为120cfu/g；病斑外延1.5cm处，最佳稀释倍数为10倍，青霉菌菌落数为18cfu/g；病斑外延2.0cm处，所有稀释浓度均无任何菌落生长，对照培养皿中未发现任何菌落。

3结论与讨论

对苹果青霉病菌在病果内部的分布范围进行检测，病斑处分离到的青霉菌菌落数最高，为2800cfu/g；腐烂斑外延1.0cm处，最佳稀释倍数为100倍，青霉菌菌落数为120cfu/g；腐烂斑外延1.5cm处，最佳稀释倍数为10倍，青霉菌菌落数为18cfu/g；病斑外延2.0cm处，所有稀释浓度均无任何菌落生长。在苹果青霉病病斑外延2.0cm及以外范围内未检测到青霉菌，但此范围内是否有毒素存在（包括何种毒素及毒素含量），需要进一步的研究。endprint