胆管结扎诱导大鼠肝纤维化模型的建立

·经验交流·

胆管结扎诱导大鼠肝纤维化模型的建立

崔万丽(

吉林医药学院生理学教研室，吉林 吉林132013)

关键词：胆管结扎；肝纤维化；模型

文章编号：1673-2995(2015)06-0450-02

中图分类号：R364.1

作者简介：崔万丽(1979-)，女(汉族)，讲师，硕士.

收稿日期：(2015-03-14)

肝纤维化是各种致病因素长期刺激肝脏引起炎症而形成的肝损伤，属于肝硬化的早期阶段。目前，国内研究者多采取腹腔注射CCl4或二甲基亚硝胺以及硫代乙胺诱导肝纤维化的形成，但由于其存在着药物具有毒性以及价格昂贵等问题。因此，为了寻求一种更安全以及更适于实验操作的模型，我们参考国外的文献，建立了结扎大鼠的胆总管而使胆汁反流造成肝细胞损伤来诱导肝纤维的模型。

1　材料与方法

1.1　实验材料

清洁级雄性Wistar大鼠，体重180～220 g，由吉林大学动物实验中心提供，合格证号：scxk(吉)2007-0003。谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、透明质酸(HA)、层连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基端(PⅢNP)等试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2　模型建立

雄性Wistar大鼠自由进食、饮水，适应性饲养一周，按体重随机分成两组，假手术组、模型组，每组12只。造模方法：实验前禁食12 h，自由饮水。模型组：将大鼠用10%的水合氯醛按照3.5 mL/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，手术视野消毒，去毛，逐层沿腹正中线打开腹腔，在十二指肠起始端找到胆总管并分离，并于胆总管下方穿两根棉线，分别结扎，并于结扎线中间剪断胆管，关腹[1]。假手术组：打开腹腔，游离胆总管，关腹。术后给予抗炎治疗，连续五天青霉素腹腔注射。5周后处死，处死前禁食12 h，自由饮水。麻醉后，腹主动脉取血，离心。血清-80 ℃保存备用。

1.3　指标检测

酶标仪测定大鼠血清AST、ALT、AKP的OD值;

酶联免疫吸附法测定大鼠血清总胆汁酸的水平及血清HA、LN、PⅢNP的水平。

2　结　果

2.1　血清肝功能指标的变化

由表1可知，与假手术组比较，模型组大鼠血清的ALT、AST、AKP显著升高，说明造模后大鼠的肝功能有损伤。

2.2　血清胆汁酸的变化

血清总胆汁酸是反应胆汁淤积的一个特异性指标。实验结果显示，与假手术组(13.8 ng/L±0.7 ng/L)比较，模型组总胆汁酸水平(19.9 ng/L±0.8 ng/L)显著升高，P<0.05，说明胆管结扎成功。

2.3　血清纤维化指标的变化

血清HA、LN、PⅢNP的水平与肝纤维化呈正相关，是筛选肝纤维化的敏感指标[2]。由表2可知，与假手术组比较，模型组大鼠血清的HA、LN、PⅢNP显著升高，说明大鼠肝组织形成了纤维化。

表 1　胆管结扎后大鼠ALT、AST、AKP变化

与假手术组比较， *P<0.05

与假手术组比较，*P<0.05

3　讨　论

肝纤维化是各种慢性肝脏疾病的共同反应，而肝纤维化如果不早期干预治疗则会发展为肝癌。所以肝纤维的预防和治疗是预防肝癌发生的关键，因此本实验研究肝纤维化模型的制备，能够模拟人类胆管阻塞而造成的肝损伤，一方面为研究肝纤维化的发病机制提供条件，另一方面也为筛选抗纤维化药物打下基础。

参考文献：

[1]Tarcin O,Basaranoglu M,Tahan V,et al.Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats[J].BMC Gastroenterol,2011,11:45.

[2]Homsi J,Daud AI.Spectrum of activity and mechanism of action of VEGF/PDGF inhibitors[J].Cancer Control,2007,14(3):285-294.