不孕症患者自身抗体含量及T细胞亚群的变化

蔡智慧，梁义娟，王伟明，刘金，张惠，张艳艳

（1.河北大学附属医院妇科，河北 保定 071000；2.河北省保定市望都县医院妇产科，河北 保定 071000）

不孕症患者自身抗体含量及T细胞亚群的变化

蔡智慧1，梁义娟1，王伟明1，刘金1，张惠1，张艳艳2

（1.河北大学附属医院妇科，河北 保定 071000；2.河北省保定市望都县医院妇产科，河北 保定 071000）

目的分析不孕症患者自身抗体含量及T细胞亚群的变化。方法选择在该院接受治疗的不孕症患者117作为观察组，其中原发性不孕49例、继发性不孕68例，另取正常妊娠78例作为正常对照组，检测各组患者的抗精子抗体（ASAb）、抗子宫内膜抗体（AEmAb）、抗卵巢抗体（AVoAb）、抗滋养层抗体（ATAb）、抗人绒毛膜促性腺激素抗体（AhCGAb）及抗透明带抗体（AZpAb）等自身抗体含量，T细胞亚群包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平，进一步分析自身抗体含量与T细胞亚群水平的相关性。结果原发性不孕组及继发性不孕组患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量显著高于正常对照组（P＜0.05）；血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于正常对照组（P＜0.05），各组间CD8+水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）；不孕症患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb等自身抗体含量与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平呈负相关。结论不孕症患者的血清相关抗体含量大幅上升，T细胞亚群水平紊乱，可能直接参与不孕症的发生、发展，有望成为治疗不孕症的新靶点。

不孕症；自身抗体；T细胞亚群

不孕症一直是困扰育龄期女性的世界性难题，在不孕症病因中免疫因素占据重要地位，在较多不孕症患者体内检测出高于正常浓度的自身抗体，推测其在不孕症发生、发展过程中发挥重要作用，若对自身抗体进行积极干预有望改变不孕症结局。维持机体正常免疫功能状态有赖于各种免疫细胞尤其是T细胞亚群水平的平衡，适度的免疫应答可以确保机体组织不受损伤[1]。不孕症患者除自身抗体水平存在异常，其T细胞亚群水平也出现紊乱。本次研究主要分析不孕症患者自身抗体含量及T细胞亚群的变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例选择

选取2013年10月-2014年10月在本院确诊的不孕症患者117例，年龄25～39岁，根据病史分为原发性不孕组（49例）、继发性不孕组（68例）。另选取正常体检的孕妇（无自然流产史）78例作为对照组，年龄23～38岁。各组在年龄、其他系统伴发疾病等方面比较差异无统计学差异（P＞0.05）。

1.2 标本采集

入组患者晨起采集空腹静脉血，选择肘静脉采集凝固血2 ml，3 000 r/min，5 min离心取上清后放入-20℃冰箱保存。

1.3 检测仪器及试剂

流式细胞仪（美国BD公司，型号FACSCalibur），酶标仪（美国Bio-tek，型号Multishan Go）。

1.4 检测方法

自身抗体：采用酶联免疫吸附法测定入组对象上清液中抗精子抗体（antisperm antibody，ASAb）、抗子宫内膜抗体（antiendometrium antibody，AEmAb）、抗卵巢抗体（antiovarian antibodies，AVoAb）、抗滋养层抗体（antitrophoblast antibody，ATAb）、抗人绒毛膜促性腺激素抗体（humananti-chorionicgonadotropin-antibody，AhCGAb）及抗透明带抗体（anti-pellucid zone antibody，AZpAb）含量。T细胞亚群：取入组对象外周静脉血，EDTA抗凝后加入单克隆抗体CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，1 200 r/min离心去上清液后，流式细胞仪检测1×104个淋巴细胞。

1.5 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间用t检验、三组间用方差分析，相关性分析用一元线性回归，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组患者的自身抗体含量

原发性不孕组及继发性不孕组患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量显著高于正常对照组（P＜0.05），见附图。

图1 各组患者的自身抗体ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量

2.2 各组患者的T细胞亚群水平

原发性不孕组及继发性不孕组的血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于正常对照组（P＜0.05），各组间CD8+水平比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 各组患者的T细胞亚群水平比较（±s）

表1 各组患者的T细胞亚群水平比较（±s）

组别CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+原发性不孕组63.28±4.18 28.16±2.56 24.82±2.091.09±0.12继发性不孕组65.92±4.73 25.39±2.1 8 25.77±2.1 51.03±0.09对照组77.92±6.16 42.04±5.11 27.13±2.621.62±0.21 F值6.399.280.196.38 P值0.0140.0030.1420.014

2.3 自身抗体含量与T细胞亚群水平的相关性

不孕症患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb自身抗体含量与CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平呈负相关。见表2。

表2 自身抗体含量与T细胞亚群水平的相关性

3 讨论

不孕症的定义为有正常性生活且不采取避孕措施2年内无法生育者。国际卫生组织（WHO）的研究显示，目前全球已婚夫妇中不孕不育者＞10%，其中女性因素占25%～35%。导致女性不孕的原因众多，包括内分泌紊乱、子宫结构及功能异常、输卵管炎症堵塞及免疫因素等，其中免疫性不孕症的治疗难度较大，在不孕症患者发病过程中占据重要地位，是目前临床研究的重点及难点[2]。

ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb是目前与不孕症相关的最主要的6种抗体类型[3]。ASAb是精子抗原产生自身免疫反应的产物，可以活化巨噬细胞并影响精子运行，已经证实其具有抗生育及不孕作用[4]。AVoAb与抗原结合形成抗原抗体免疫复合物可以引起卵巢免疫损伤、卵子退化，产生抗生育效应。AEmAb可以激活补体反应，破坏子宫内膜组织，降低子宫内膜对孕卵的接受性及孕卵着床成功率。AhCGAb可以降低受孕率，增加胎孕死亡率[5]。

上述多种不孕相关自身抗体的联合检测，有望解开不孕症之谜，同时为远期的不孕症临床治疗提供新思路。上述研究对比各组患者的体内相关抗体的阳性表达。结果显示，原发性不孕组及继发性不孕组患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb含量显著高于正常对照组（P＜0.05），继发性不孕组患者的以上抗体阳性率高于原发性不孕组，但是差异无统计学意义（P＞0.05），提示以上自身抗体在不孕症的发生过程中发挥重要作用，对其自身抗体进行干预有望成为治疗不孕症的有效手段之一。

有研究证实，正常的妊娠过程中，以Th2型细胞因子分泌为主，Th1处于相对抑制状态，而当Th1型细胞因子过度表达时将对妊娠组织产生毒性效应，继而发生不孕。机体维持正常的免疫状态有赖于各种免疫细胞尤其是T细胞亚群的协作与制约，最终产生适度的免疫应答，在发挥清除异物抗原效果的同时又可避免产生组织损伤[6]。CD4+与CD8+之间的恒定比例构成细胞免疫调节的重要环节，其平衡紊乱有可能导致机体免疫紊乱，产生针对自身抗原的自身抗体，无法有效清除免疫复合物，干扰相应器官的正常生理功能，促进炎性介质对输卵管组织的损伤，最终产生不孕[7-8]。上述研究对各组患者的细胞免疫水平进行检测。结果显示，不孕症患者与正常妊娠人群相比，CD4+水平与CD4+/CD8+比例大幅下降，其中继发性不孕组患者上述指标值下降幅度更大，提示其发生T细胞亚群比例失调，出现异常免疫调节。

在不孕症患者中，相关自身抗体与T细胞亚群水平发生异常，在对不孕症患者的自身抗体与T细胞亚群水平进行相关性分析后发现，不孕症患者的ASAb、AEmAb、AVoAb、ATAb、AhCGAb及AZpAb自身抗体含量与CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平呈负相关，提示T细胞亚群水平异常的育龄期女性很可能存在自身抗体水平异常，应早期进行自身抗体水平检测并加以干预。不孕症患者的自身抗体水平大幅上升，伴有T细胞亚群的紊乱，可能是造成女性不孕的直接原因，对以上相关因素进行及时干预有望改变不孕症结局。

[1]TAN S,DIETERLE S,PECHLAVANIS S,et al.Thyroid autoantibodies per se do not impair intracytoplasmic sperm injection outcome in euthyroid healthy women[J].Eur J Endocrinol,2014, 170(4):495-500.

[2]邓世英,石姜,聂红.不孕相关抗体检测女性不孕症的实验研究[J].国际检验医学杂志,2014,35(15):2037-2040.

[3]BEHROUZ GF,FARZANEH GS,LEILA J,et al.Presence of auto-antibody against two placental protein's annexin A1 and vitamin D binding protein,in sera of women with pre-eclampsia[J]. J Reprod Immunol,2013,99(1/2):10-16.

[4]SLIWA L,MACURA B,MAJEWSKA-SZCZEPANIK M,et al. Lack of TCR alpha beta+CD8+and TCR gammadelta+lymphocytes ameliorates LPS induced orchitis in mice-preliminary histological observations[J].Folia Biol,2014,62(1):67-71.

[5]WAMBACH CM,PATEL SN,KAHN DA.Maternal and fetal factors that contribute to the localization of T regulatory cells during pregnancy[J].Am J Reprod Immunol,2014,71(5):391-400.

[6]GISPERT S,PARGANLIJA D,KLINKENBERG M,et al.Loss of mitochondrial peptidase clpp leads to infertility,hearing loss plus growth retardation via accumulation of CLPX,mtDNA and inflammatory factors[J].Hum Mol Genet,2013,22(24):4871-4887.

[7]RILEY MM,ZURENSKI MA,FRAZER LC,et al.The recall response induced by genital challenge with chlamydia muridarum protects the oviduct from pathology but not from reinfection[J]. Infect Immun,2012,80(6):2194-2203.

[8]王海芳,吴晓娟,何宗忠,等.女性不孕不育患者DNT细胞与T细胞亚群变化及意义[J].广东医学,2014,35(23):3654-3658.

（童颖丹 编辑）

Evaluation of autoantibody and T cell subset content in female infertility patients

Zhi-hui CAI1,Yi-juan LIANG1,Wei-ming WANG1,Jin LIU1, Hui ZHANG1,Yan-yan ZHANG2
(1.Department of Gynecology,the Affiliated Hospital of Hebei University,Baoding, Hebei 071000,P.R.China;2.Department of Gynecology,the People's Hospital of Wangdu County,Baoding,Hebei 071000,P.R.China)

【Objective】To evaluate the autoantibody and T cell subset content in female infertility patients.【Methods】A total of 117 cases of female infertility patients in our hospital were chosen as observation group,with 49 cases of primary infertility and 68 cases of secondary infertility.At the same time 78 normal pregnant women were chosen as control group.The content of anti-sperm antibody(ASAb),anti-endometrial antibody(AEmAb),anti-ovarian antibody(AVoAb),anti-trophoblast antibody(ATAb),anti-human chorionic gonadotropin antibody(AhCGAb),anti-zona pellucida antibody(AZpAb),and T cell subset levels including CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+were tested in both groups.The correlations between the autoantibody content and T cell subset levels were further analyzed.【Results】In the primary infertility group and secondary infertility group,ASAb,AEmAb,AVoAb,ATAb,AhCGAb and AZpAb content was significantly higher than that in the control group(P＜0.05)；the serum CD3+,CD4+and CD4+/CD8+levels were significantly lower than those in the control group(P＜0.05)；while CD8+level showed no significant difference between the groups(P＞0.05).Infertility patient's ASAb,AEmAb,AVoAb,ATAb,AhCGAb and AZpAb were in negative correlations with CD3+,CD4+and CD4+/CD8+levels.【Conclusions】In female infertility patients,the content of autoantibodies greatly increases,and T cell subset levels are in significant disorders,which may be directly involved in the development of infertility and will be a new target for treatment of infertility.

infertility；autoantibody；T cell subset

R711.6

B

1005-8982（2015）29-0091-03

2014-05-12

梁义娟，E-mail：czh20106152@163.com