宫颈癌组织中MACC1、c-Met蛋白表达相关性及与盆腔淋巴结转移的关系

石　琳　李　丽　(湖北民族学院附属民大医院妇产科，湖北　恩施　445000)



宫颈癌组织中MACC1、c-Met蛋白表达相关性及与盆腔淋巴结转移的关系

石琳李丽(湖北民族学院附属民大医院妇产科，湖北恩施445000)

〔摘要〕目的探讨结肠癌转移相关基因(MACC1)、人原癌基因编码蛋白(c-Met)表达与宫颈癌以及盆腔淋巴结转移的关系。方法选择该院2011年7月至2013年12月初发且术前未接受过放化疗治疗的所有宫颈癌手术患者116例，收集患者的病历资料，采用免疫组化法检测MACC1、c-Met蛋白在不同宫颈组织中的表达情况，分析其表达结果与各临床病理特征之间的关系。结果MACC1、c-Met蛋白的阳性表达率在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ～Ⅲ组织、宫颈癌组织中差异有统计学意义(P＜0. 05)，三组之间阳性率的两两比较，宫颈正常组织、CINⅡ～Ⅲ组织比较和正常宫颈组织、宫颈癌组织比较，差异有统计学意义(P＜0. 05)。MACC1、c-Met蛋白的表达在宫颈癌组织内呈正相关(r= 0. 648，P＜0. 05)。经多因素的Logistic回归分析，MACC1蛋白、肌层浸润深度是影响盆腔淋巴结转移的因素(OR = 6. 015，3. 901，P＜0. 05)。结论宫颈癌组织中MACC1、c-Met蛋白的表达有异常，其中MACC1蛋白阳性表达可作为评估宫颈癌在盆腔淋巴结转移的独立高危因素，临床有重要的参考意义。

〔关键词〕宫颈癌;结肠癌转移相关基因1; c-Met蛋白;淋巴结转移

全球每年新发宫颈癌约52. 98万，死亡病例约27. 5万〔1〕，在我国妇女罹患宫颈癌的比例为15/10万〔2〕。随着女性生活方式及习惯的变化，人乳头瘤病毒(HPV)的感染呈上升趋势，这使得宫颈癌的发生趋于轻龄化，现已证实99%宫颈癌是由HPV感染〔3〕。随着医学技术的进步，通过早期发现癌前病变并积极采取措施进行治疗，可有效阻断宫颈癌的发生。有研究认为结肠癌转移相关基因(MACC)1、人原癌基因编码蛋白(c-Met)在宫颈癌组织中的表达可能与宫颈癌的发生发展及盆腔淋巴结转移有关，本文就此进行阐述。

1　资料与方法

1. 1研究对象选择我医院2011年7月至2013年12月初发且术前未接受过放化疗治疗的所有宫颈癌手术患者116例，收集患者基础信息、完整的临床资料、患者的手术切除组织病理蜡块。根据组织的性质不同将其分为三组，其中正常宫颈组织组11例，宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ～Ⅲ组织组15例，宫颈癌组90例。宫颈癌组患者年龄23～70〔平均(45. 65±8. 20)〕岁;按照2009年国际妇产科联盟(FIGO)标准分级:其中IB1期26例，IB2期15例，ⅡA期27例，ⅡB期22例;低分化33例、高中分化57例;有盆腔淋巴结转移31例，无盆腔淋巴结转移59例;腺癌24例、鳞癌66例;高危型HPV阳性77例，阴性13例;所有标本均再次做苏木素-伊红(HE)染色，经我院病理学专家明确诊断。所有研究标本的收集已告知患者并签署知情同意书。

1. 2实验试剂及实验方法试剂:兔超敏二步法免疫组织化学检测试剂盒、MACC1兔抗人多克隆抗体IgG(美国Sigma公司)、c-Met兔抗人多克隆抗体IgG(北京博奥森生物技术有限公司)、磷酸盐缓冲液(PBS)、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒、防脱载玻片、柠檬酸盐缓冲液、中性树胶、苏木色、异丙醇、焦碳酸二乙酯(DEPC)水、无水酒精、三氯甲烷等。方法:将蜡块进行连续切片，约3～5 μm。用免疫组化(SP)法进行检测，严格按照试剂盒说明书进行操作，阴性对照为PBS代替一抗，阳性对照为阳性组织石蜡切片。

1. 3结果判定在显微镜下观察各种组织细胞的染色情况，阳性呈现棕黄色颗粒状(或片状者)，MACC1、肝细胞生长因子(HGF)、c-Met阳性的细胞胞质均着色或部分胞膜着色。随机选取光镜下20个高倍视野，采用半定量计数法，每个显微镜视野计数100个细胞，计算阳性细胞数的百分比，取20个视野的平均值。参照显色细胞所占的比例进行计分〔4〕。0分:没有阳性细胞出现; 1分:阳性细胞＜1/3; 2分:阳性细胞1/3～2/3; 3分:阳性细胞＞2/3。参照细胞染色的程度进行计分〔4〕; 0分:癌细胞没有着色成功; 1分:浅黄色; 2分:棕黄色; 3分:黄褐色。结果判定积分=阳性细胞比例×染色强度，0分则判断为阴性(－)，≥1分则判定为阳性(+)。

1. 4统计学方法应用SPSS19. 0软件进行χ2检验、Fisher确切概率法、Spearman等级相关检验和Logistic回归分析。

2　结果

2. 1 MACC1、c-Met蛋白在正常宫颈、CINⅡ～Ⅲ以及宫颈癌组织中的表达情况三组之间MACC1、c-Met蛋白表达阳性率〔正常宫颈组织1例(9. 09%)，0例; CINⅡ～Ⅲ组织均为11例(73. 33%);宫颈癌组织72例(80. 00%)，74例(82. 22%)〕比较差异有统计学意义(P＜0. 05)。三组之间阳性率的两两比较，宫颈正常组织、CINⅡ～Ⅲ组织比较和正常宫颈组织、宫颈癌组织比较，差异有统计学意义(P＜0. 05);但宫颈癌与CINⅡ～Ⅲ比较差异无统计学意义(P＞0. 05)。

2. 2 MACC1、c-Met蛋白在宫颈癌组织内表达的相关性MACC1蛋白和c-Met蛋白在宫颈癌组织内表达的阳性率分别为82. 22%、80. 00%。MACC1、c-Met蛋白的表达在宫颈癌组织内呈正相关关系(r=0. 648，P＜0. 05)。

2. 3 MACC1、c-Met蛋白与宫颈癌各临床病理特征之间的关联

经单因素分析可知，MACC1、c-Met蛋白阳性表达以及分化程度、肌层浸润深度、脉管浸润可能是盆腔淋巴结转移的高危因素(P＜0. 05)，年龄、组织类型、肿瘤直径、临床分期、HPV高危型不是盆腔淋巴结转移的高危因素(P＞0. 05)。见表1。

2. 4影响因素的多因素Logistic回归分析将可能是影响淋巴结转移的因素纳入多因素的Logistic回归分析，MACC1蛋白阳性表达、肌层浸润深度是影响盆腔淋巴结转移的因素(OR= 6. 015，3. 901，P＜0. 05)。见表2。

表1　宫颈癌与盆腔淋巴结转移的单因素分析〔n(%)〕

表2　影响因素的Logistic回归分析

3　讨论

MACC1蛋白是一种调控肿瘤生长和转移的关键基因，位于人类的7号常染色体上(7p21. 1)，其生物学功能广泛，在调节细胞增殖、分化和存活等方面起着不可代替重要作用，是调节HGF/c-Met通路中Met基因的关键因子〔5〕。人体内多种组织均有该基因的表达，如垂体、气管、胃、肠、肾脏组织中有较高表达，但在肺、乳腺、胰腺、卵巢、骨髓等组织中表达较低〔6〕。HGF能刺激肝细胞和内皮细胞生长及分泌，c-Met是HGF单一配体激活的原癌基因，MACC1蛋白通过结合c-Met启动子，激活HGF/c-Met信号转导通路，使c-Met蛋白表达，结合HGF，HGF诱导MACC1蛋白从细胞质进入细胞核。正常情况下，c-Met短暂结合HGF发挥生理作用〔7〕，但是在肿瘤细胞中过度表达的HGF和c-Met结合后，形成MACC1的正反馈效应，从而引起细胞恶性增殖、黏膜上皮细胞转化、血管生成、细胞运动加强、肿瘤细胞侵袭及转移等〔8〕。有研究认为MACC1蛋白具有作为一种新的肿瘤诊断标志物的潜在价值〔5〕。MACC1蛋白在胃癌、结肠癌、肺癌和肝癌组织中均存在异常高表达，且在术后复发的肺癌、晚期结肠癌、有转移潜能的胃癌、血管转移的肝癌组织中MACC1的异常表达更加明显，也与患者的预后联系紧密，因此也可作为判定肿瘤转移、预后的标志物〔9〕。

本实验结果与周娜等〔4〕的实验研究相符合。另外与文献报道结果基本一致〔10〕。提示两种蛋白在宫颈癌的发生、发展中有重大意义，在将来临床工作中对于两种蛋白表达水平的检测，可能帮助宫颈癌的及早发现，利于采取措施，阻断其发生，并提高患者的预后及生存率。另外，本实验与Serrano-Olvera等〔11〕研究结果相似，显示组织分化越差、临床分期越晚，有淋巴结转移的宫颈癌组织中MACC1、c-Met蛋白的表达就越异常。多因素分析，结果与张瑞涛等〔12〕的研究结果相似。

综上所述，宫颈癌组织中MACC1、c-Met蛋白的表达有异常，其中MACC1蛋白阳性表达可作为评估宫颈癌在盆腔淋巴结转移的独立高危因素，临床有重要的参考意义。

4参考文献

1 Thabet M，Hemida R，Hasan M，et al. Human papillomavirus(HPV)is not the main cause of preinvasive and invasive cervical cancer among patients in Delta Region，Egypt〔J〕．J Exp Ther Oncol，2014; 10(4): 247-53.

2叶倩，饶金，郜红艺，等. 754例宫颈癌流行病学分析〔J〕．中国妇幼保健，2013; 28(19): 3068-70．

3 Boers A，Wang R，Slagter-Menkema L，et al．Clinical validation of the cervista HPV HR test according to the international guidelines for human papillomavirus test requirements for cervical cancer screening〔J〕．J Clin Microbiol，2014; 52(12): 4391-3.

4周娜，吴宜林. MACC1、c-Met蛋白在宫颈癌中的表达及与盆腔淋巴结转移的关系研究〔J〕．实用妇产科杂志，2014; 30(3): 199-203.

5侯彩英，宫荣杰，姚元庆，等.宫颈癌的治疗进展〔J〕．现代生物医学进展，2011; 11(21): 4182-6.

6柴红霞. MACC1在宫颈癌中的表达及MACC1siRNA对HeLa细胞生物学行为的影响〔D〕．兰州:兰州大学硕士论文，2014.

7张雪玉，张咏梅，杨彩虹，等. HGF、c-Met和VEGF-C在宫颈癌中的表达〔J〕．肿瘤防治研究，2011; 38(4): 411-5.

8张咏梅，张雪玉，刘莉莉，等.实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织中HGF mRNA和cMet mRNA的表达〔J〕．西安交通大学学报(医学版)，2011; 32(2): 234-7.

9胡兴胜，付曦，文世民，等. MACC1和c-met在非小细胞肺癌中的表达及其预后价值〔J〕．中国肺癌杂志，2012; 15(7): 399-403.

10周娜. MACC1、c-Met基因在宫颈癌中的表达及临床意义〔D〕．长沙:中南大学硕士论文，2013.

11 Serrano-Olvera A，Cetina L，Coronel J，et al．Follow-up consultations for cervical cancer patients in a mexican cancer center. Comparison with NCCN Guidelines〔J〕．Asian Pac J Cancer Prev，2014; 15(20): 8749-52.

12张瑞涛，史惠蓉，黄好亮，等. MACC1、HGF和c-Met蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其意义〔J〕．南方医科大学学报，2011; 31(9): 1551-5.

〔2014-10-25修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

〔文章编号〕1005-9202(2015)20-5819-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 065

〔文献标识码〕A

〔中图分类号〕R737. 33

第一作者:石琳(1974-)，女，主治医师，主要从事妇产科方面的研究。