二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠更年期综合征的影响

谢　珍刘　波　徐　彭　谈伟锋　周　年　曹　怡(江西中医药大学药学院药理学科组，江西　南昌　330004)



二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠更年期综合征的影响

谢珍1刘波徐彭谈伟锋周年曹怡
(江西中医药大学药学院药理学科组，江西南昌330004)

〔摘要〕目的探讨二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠实验性更年期综合征的影响。方法以卵巢摘除SD雌性大鼠为动物模型，随机分为模型组、二仙汤整方及其4个拆方组(二仙汤A方、B方、C方、D方、E方)，另设一组假手术组，连续给药90 d，比较大鼠体重、血清性激素水平及胸腺、脾脏、子宫指数的变化，并对子宫进行组织学观察。结果A方可显著抑制因摘除卵巢引起的体重升高(P＜0. 01);与模型组相比，A方、C方及E方能显著提高大鼠的胸腺系数(P＜0. 05)，E方可使脾脏系数明显升高(P＜0. 05)，C方能显著升高促黄体生成素(LH)水平(P＜0. 05)，除B方外，其余各方均可明显提高卵泡刺激素(FSH)水平。组织学方面，A方、E方可增加腺体数目，除A方外，其余各方均使内膜增厚。结论二仙汤及其拆方缓解更年期综合征的作用与从多环节调节生殖内分泌功能有关，且各个拆方起着不同的调节作用，具有临床指导意义。

〔关键词〕二仙汤及其拆方;更年期综合征;卵巢摘除

1浙江省食品药品检验研究院

第一作者:谢珍(1989-)，女，在读硕士，药师，主要从事内分泌代谢药理学研究。

二仙汤是上海中医药大学已故名医张伯讷教授针对围绝经期综合征研制的名方，主要由温肾益精药淫羊藿、仙茅、巴戟天，补血活血药当归和滋阴降火药知母、黄柏六味中药组成〔1〕，其中淫羊藿、仙茅为君，巴戟天为臣，知母、黄柏为佐，当归为使，临床上广泛用于更年期综合征、高血压和绝经后骨质疏松的治疗〔2〕。更年期综合征是妇女绝经后卵巢功能衰退导致的生殖系统萎缩、自主神经系统功能紊乱的一组症候群，是女性整体衰老的结果和早期表现。二仙汤的药理研究涉及抗自由基作用〔3〕、增强下丘脑-垂体-性腺轴的功能〔4，5〕及提高免疫功能〔6〕等。二仙汤用于更年期综合征的治疗已经证实，本研究依据君、臣、佐、使的配伍关系对二仙汤进行拆方，研究二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠体重、血清促黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)、相关脏器指数及其组织学形态的影响，并比较各个拆方作用的不同。

1　材料与方法

1. 1实验动物雌性SD大鼠，6月龄，体重230～250 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号: SCXK(湘)2009-0004，室温控制在20～22℃，恒湿，光照与环境一致，实验期间自由饮水，实验前12 h禁食。

1. 2药物饮片均购自南昌昌帮中药行，由江西中医学院中药鉴定学科组付小梅副教授鉴定为朝鲜淫羊藿，仙茅，巴戟天，当归，知母，黄柏。

1. 3仪器与试剂血清LH放射性免疫试剂盒(批号: 20130101)、血清FSH放射性免疫试剂盒(批号: 20130101)均购自潍坊三维生物工程集团有限公司; Access全自动微粒子免疫化学发光仪(美国Bekman公司产品);手动转轮切片机、石蜡切片机(德国Leica公司产品);光学显微镜(日本Olympus公司产品)。

1. 4方法

1. 4. 1造模方法3%戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，双侧背部切口，揭开脂肪层，在卵巢和子宫交接处结扎，彻底切除两侧卵巢，逐层缝合皮肤。不做卵巢切除的大鼠则同样切开腹腔，揭开脂肪层，将卵巢移出后复位，并不切除卵巢而缝合切口。手术第2天起进行阴道涂片检查，连续观察10 d，1次/d，不出现规则动情变化的大鼠为造模成功的大鼠，可供实验用。

1. 4. 2动物分组共分为七组，其中筛选后的60只卵巢彻底切除的雌性大鼠，随机分成六组，即模型组、二仙汤整方(A 方)及依据君、臣、佐、使配伍关系的二仙汤4个拆方组，即淫羊藿+仙茅(B方)、淫羊藿+仙茅+巴戟天(C方)、淫羊藿+仙茅+当归(D方)、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏(E方)，每组10只，以未作卵巢切除雌性大鼠(10只)为假手术组。

1. 4. 3药物的制备与给药统一煎煮标准为加入4倍体积水浸没药材3～5 cm，浸泡30 min后，先用武火煮沸，再改用文火慢煎50 min(期间如水过少可多加一定比例的水)。按原方比例2∶2∶2∶2∶1∶1，拆方药物剂量与原方剂量一致，剂量分别为含生药8，3. 2，4. 8，4. 8，4. 8 g/kg，假手术组、模型组均灌服纯净水，二仙汤整方及拆方组分别灌服相应的药物煎煮液，每周称量体重，随体重调整药量，给药容积均为10 ml/kg，连续给药90 d。

1. 4. 4血清LH、FSH的测定3%戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，4℃静置4 h，3 000 r/min离心10 min，分离血清，－80℃保存，分别用血清LH、FSH放射性免疫试剂盒，在Access全自动微粒子免疫化学发光仪免疫分析系统上测定LH、FSH水平。

1. 4. 5脏器系数的测定及组织形态学观察取血后，解剖取出胸腺、脾脏及子宫，精确称重后，子宫放入10%甲醛溶液中固定，经脱水、石蜡包埋、脱蜡、切片(片厚4 μm)、苏木精-伊红染色、封片，在显微镜下进行观察。

1. 5统计学处理采用SPSS20. 0统计软件，行单因素方差分析。

2　结果

2. 1二仙汤及其拆方对大鼠体重的影响大鼠摘除卵巢恢复性饲养1 w后，各组动物体重均呈增长趋势，E方动物体重增长最为明显，至给药后第4、8、12周，双侧卵巢摘除致大鼠体重明显增加，与假手术组相比均有极显著差异(P＜0. 01)，其中在给药后第8周，A方大鼠体重与模型组相比显著降低(P＜0. 01)，其他各组与模型组均无差异。见表1。

2. 2二仙汤及其拆方对大鼠脏器系数的影响与假手术组相比，模型组的子宫显著降低(P＜0. 01)，可见大鼠去卵巢后子宫明显萎缩，脾脏系数也有下降的趋势，无统计学意义，但胸腺系数略微升高。与模型组相比，A方能使胸腺系数升高34%(P ＜0. 01)，C方及E方可使其升高26%、20%(P＜0. 05);脾脏系数方面，E方可使其显著升高(P＜0. 05);整方及各个拆方均可不同程度的提高子宫系数，但无显著差异，其中A方和C方效果较好。见表2。

表1　大鼠术后3个月体重变化(x ±s，n=10，g)

与假手术组比较: 1)P＜0．01;与模型组比较: 2)P＜0．01

2. 3二仙汤及其拆方对大鼠血清LH、FSH的影响与假手术组相比，模型组的血清LH水平大幅升高(P＜0. 01)，而FSH下降了56%(P＜0. 05)。与模型组相比，除A方和B方使LH有下降的趋势，分别为6%、27%，其余各方均可使其提高，其中C方有显著性(P＜0. 05);而除B方外，治疗组的FSH均呈极显著性提升，其中A方和E方的FSH水平与假手术组相比较为接近，B方可使其比假手术组降低39%。见表2。

2. 4二仙汤及其拆方对大鼠胸腺、子宫组织形态学的影响假手术组:大鼠的子宫管壁较厚，内膜下分布有大量的腺体，形态规则，腺腔大小不等，腺上皮以单层柱状细胞为主;去卵巢模型组大鼠子宫体积变小，管壁明显变薄，内膜下腺体减少，腺腔萎缩，血管扩张; A方:固有层腺体和血管丰富，与假手术组相近，上皮细胞排列较紧密; B方:内膜增厚明显，腔面呈波浪状，腺上皮细胞增高且相互拥挤，腺体稀少; C方:内膜增厚明显，纤毛长而密，腺腔扩张，腺体间质细胞肥大，胞质多; D方:内膜增厚程度与C方相似，表层上皮细胞高柱状游离，部分有被覆纤毛; E方:内膜显著增厚，内膜上皮细胞排列整齐且紧密，腺体多，弯曲度增加。见图1。

表2　各组大鼠胸腺、脾脏、子宫脏器系数及血清性激素水平的比较(x±s，n=10)

图1　各组大鼠子宫组织形态的比较(HE，×200)

3　讨论

更年期综合征是因性激素分泌量减少，产生以自主神经功能失调为主的一系列症状，内分泌异常是其主要的特征。本文结果显示大鼠摘除卵巢后，体重增长与假手术组相比速度加快，其中A方可显著抑制因卵巢摘除引起的体重增长(P＜0. 01)，说明二仙汤整方在调节更年期体重变化方面有重要意义。

胸腺是中枢性免疫器官，是T淋巴细胞分化成熟的场所，脾脏是人体中最大的淋巴器官，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心〔6〕。本研究发现造模后大鼠的胸腺系数较假手术组有升高的趋势，脾脏系数则下降，而经治疗后，各组的胸腺系数及脾脏系数均有不同程度的升高，其中A方、C方及E方可显著提高胸腺系数，E方能使脾脏系数升高19%，提示二仙汤A方、C方及E方可以通过提高去卵巢大鼠的胸腺或脾脏系数来增强其免疫功能。

FSH、LH均由腺垂体分泌，其中FSH的主要作用为促进卵泡成熟，并可促进新细胞合成FSH受体;而LH作用于成熟的卵泡，引起排卵并生成黄体。由于卵巢摘除导致的雌激素不足，使下丘脑-垂体-卵巢轴之间的平衡失调，对下丘脑-垂体不能进行有效的负反馈而致使FSH、LH含量升高〔7〕，本文中LH与之符合，而模型组的FSH与假手术组相比显著下降，可能与以下因素有关:体内雌激素在正常情况下大部分由卵巢分泌，但也存在非性腺器官的分泌，可对垂体产生负反馈来抑制FSH的分泌，且垂体FSH的释放受卵巢激素的反馈抑制较LH敏感，此外，实验采用6月龄的大鼠作为受试对象，此月龄大鼠正处于壮年时期，内分泌器官正处于功能旺盛阶段，卵巢的摘除可作为一种刺激，可引起机体神经内分泌系统的应激反应，各系统功能的整合可能会激活其他内分泌腺的代偿性功能增强，如肾上腺皮质等〔8〕，分泌产生更多的雌激素来对垂体形成负反馈。本文显示君药B方在降低FSH、LH水平方面药力最为强烈，有君药与佐药组成的E方作用略缓和，提示可减缓君药的烈性。

本研究结果表明各方均可不同程度的提高子宫系数，提示有缓解子宫萎缩的作用。还可改善去卵巢大鼠子宫的一些病理改变，且有不同的侧重点，A方和E方可明显增加腺体数目，B方、C方、D方及E方可使内膜增厚，显示出改善子宫内膜状态，维持内膜及腺体生长的作用，即二仙汤及其拆方具有一定营养子宫并改善其功能的作用。

综上，二仙汤及其抗拒方可从多方面对生殖内分泌功能进行调节，使得机体的内环境达到相对稳定的状态，且各个拆方作用的靶点不同，拆方的这种作用靶点的不同可提高用药针对性，为临床上二仙汤用于更年期综合征的治疗提供指导意义。

4参考文献

1年华，徐玲玲，马明华，等.二仙汤对去卵巢大鼠骨质疏松的作用〔J〕．第二军医大学学报，2001; 28(3): 227-80.

2刘永胜，赵丽慧.二仙汤的研究及临床应用〔J〕．光明中医，2010; 25(4): 741-2.

3沈小瑜，方肇勤，吴敦序，等.二仙汤及其拆方对老年大鼠部分抗氧化酶活性及其基因表达水平的影响〔J〕．中国中西医结合杂志，1995; 15(11): 672-4.

4方肇勤，司富春，张伯讷，等.二仙汤及其拆方对老龄大鼠下丘脑GnRH基因转录与表达的调节作用〔J〕．中国中医基础医学杂志，1998; 4(1): 23.

5陈涛，张伯讷，顾文聪.二仙汤及其拆方对老龄大鼠胸腺及细胞免疫功能的影响〔J〕．辽宁中医杂志，1993; 37(12): 40-2.

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7李有贵，时连根.家蚕雌蛾粉治疗去卵巢大鼠更年期综合症研究〔J〕．中药药理与临床，2011; 27(5): 81-4.

8张丽君，张艳，徐谦，等.尼尔雌醇对去卵巢大鼠子宫内膜的影响〔J〕．中国比较医学杂志，2006; 16(6): 325-7.

〔2014-06-25修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

通讯作者:刘波(1972-)，男，博士，副教授，硕士生导师，主要从事内分泌代谢药理学研究。

基金项目:江西省自然科学基金资助项目(No．20151BAB205072; No．20114BAB205073);江西省科技计划项目(No．20122BBG70090-1);江西省卫生厅中医药科研项目(No．2011A142; No．2012A031)

〔文章编号〕1005-9202(2015)20-5691-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 006

〔文献标识码〕A

〔中图分类号〕R285. 5