高效液相色谱法同时测定唇齿清胃丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量

张秀丽 李 鑫 张莹莹 勾晓丹

高效液相色谱法同时测定唇齿清胃丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量

张秀丽 李 鑫 张莹莹 勾晓丹

目的 探讨一种同时测定唇齿清胃丸中黄芩苷和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法。方法 以 Kromasil100-5 C18柱（4.6 mm×150.0 cm，5 μm）为色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用梯度洗脱；检测波长278 nm，柱温30 ℃，流速为1.0 ml/min。结果 盐酸小檗碱进样量在0.0124～0.3100 μg，进样量0.0217～0.5425 μg范围内有良好的线性关系，平均回收率分别为99.1%、99.04%，RSD分别为0.94%、0.85%（n=6）。结论 该方法准确可靠专属性强、结果稳定，重复性好。

唇齿清胃丸；盐酸小檗碱：黄芩苷；高效液相色谱法

唇齿清胃丸是由大黄、黄芩、黄柏、地黄等十四味药制备而成的大蜜丸[1]，具有清胃火之功效，用于由胃火引起的牙龈肿痛、口干唇裂、咽喉痛。制剂中黄芩具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效[2-3]。本品收载于卫生管理部门药品标准中药成方制剂第3册，其质量标准有性状、鉴别及常规的检查项，无含量测定项，无法有效地控制药品质量，方中黄芩与黄柏的主要有效成分分别为黄芩苷与盐酸小檗碱[4-6]。本实验采用高效液相色谱法测定黄芩苷和盐酸小檗碱，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 采用岛津 LC-20AT型高效液相色谱仪（包括LC-AT型紫外检测器，LC solution 色谱工作站），CPA225D电子分析天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司），9860A型超声波清洗器（费纳米科技发展有限公司）。

1.2 试剂 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-201318，纯度 93.3%），盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200911，纯度 86.8%），唇齿清胃丸（长春人民药业集团有限公司，批准文号：国药准字Z22021094，批号：20130301、20130402、20130406），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil100-5 C18柱（4.6 mm ×150.0 cm，5 μm）；流动相：以乙腈为流动相A，以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用梯度洗脱：0～10 min，A-B（21∶79）；10～30 min，A-B（33∶67）；检测波长278 nm，柱温30 ℃，流速1.0 ml/min；在此色谱条件下，盐酸小檗碱和黄芩苷之间以及与其他相关邻杂质峰的分离度均符合要求（R＞1.5），理论板数以黄芩苷峰计应不低于6 000[7]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品2.17 mg与盐酸小檗碱对照品1.24 mg，分别置10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得黄芩苷与盐酸小檗碱对照品贮备液。精密吸取1 ml置同一10 ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml黄芩苷0.0217 mg、盐酸小檗碱0.0124 mg的混合对照溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取质量差异项下的大蜜丸，剪碎，精密称取0.3024 g，置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50 ml，称定质量，超声处理（功率260 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照液的制备 按处方比例称取黄芩、黄柏以外的药材，按照处方制备工艺制备缺黄芩、黄柏的阴性样品。按照供试品溶液的制备方法操作，得缺黄芩、黄柏的阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适应性实验 在2.1项下的色谱条件对供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液进行分析，从图1中可以看出，阴性样品色谱图上与黄芩苷和盐酸小檗碱对照品相同保留时间处无色谱峰出现，对供试品测定无干扰。

图1 唇齿清胃丸高效液相色谱图

2.3.2 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图并测定峰面积积分值，以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）计算回归方程、相关系数和线性范围，分别得回归方程为：黄芩苷Y=80049.3X－10440.9，r=0.9996，盐酸小檗碱Y=47036.4X－14883，r=0.9999。实验结果表明，黄芩苷进样量在0.0217～0.5425 μg，盐酸小檗碱进样量在0.0124～0.3100 μg范围内有良好的线性关系。

2.3.3 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算，黄芩苷和盐酸小檗碱的RSD分别为0.46%、0.57%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性实验 取同一批号样品（批号为20130301）适量，按2.2.2项下方法平行制备6份供试品溶液，在确定的色谱条件下进行分析，黄芩苷的RSD为0.63%，盐酸小檗碱的RSD为0.72%，表明该方法重复性良好。

2.3.5 稳定性实验 取同一供试品溶液10 μl（批号为20130301）按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h时进行测定，以峰面积计算，结果黄芩苷与盐酸小檗碱的RSD分别为0.32%、0.45%，表明24 h内供试品溶液基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验 取已测定黄芩苷、盐酸小檗碱的供试品（批号20130301，黄芩苷含量为5.3678 mg/g，盐酸小檗碱含量为1.5114 mg/g）6份，每份0.15 g，置具塞锥形中，分别精密加入黄芩苷对照品贮备液4 ml和盐酸小檗碱对照品贮备液2 ml，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，见表1。

表1 回收率试验测定结果

2.4 样品含量测定 取3批样品，按2.2.2项下制备供试品溶液，进样分析，记录色谱图，采用外标峰面积法计算样品中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，见表2。

表2 样品中黄芩苷和盐酸小檗碱的测定结果(mg/g)

3 讨论

3.1 检测波长的选择 以甲醇为溶剂，分别在200～400 nm波长范围内扫描黄芩苷与盐酸小檗碱的紫外吸收光谱图，结果黄芩苷在274 nm有最大吸收，盐酸小檗碱在 266 nm有最大吸收[8]。但在278 nm处有等吸收点，所以本实验选择278 nm作为检测波长，黄芩苷与盐酸小檗碱均有较好的灵敏度，且分离度良好。

3.2 提取溶剂的选择 提取样品主成分时分别采用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇与乙醇作为溶剂，对3种溶剂的提取率进行比较，研究表明结果与乙醇含量无影响，故选70%乙醇作为提取溶剂。

3.3 提取时间的选择 样品分别超声处理10、20、30、40 min，测定黄芩苷与盐酸小檗碱，结果超声30、40 min含量无差异，故选择超声处理30 min。

3.4 溶剂用量的选择 取样品分别加入 70%乙醇25、50、100 ml，制备供试品溶液，测定黄芩苷与盐酸小檗碱，结果溶剂用量50、100 ml含量无差异，故选用50 ml作为提取溶剂。

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典∶2010年版一部[S].北京∶中国医药科技出版社,2010.

[2]吴雪丹,丁宝月,傅应华.HPLC法测定复方苦参洗剂中盐酸小檗碱和黄芩苷[J].中成药,2012,34(5)∶868-871.

[3]陈风,黄登亮.HPLC法同时测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].中国药事,2008,22(8)∶686-688.

[4]赵严丽，陈淑娟.高效液相色谱法测定消渴平胶囊中盐酸小檗碱含量[J].中国药业,2014,23(1)∶10-11.

[5]高文学,刘斌.HPLC测定前列通胶囊中芍药苷和盐酸小檗碱的含量[J].中国现代中药,2013,15(11)∶992-994.

[6]王敏,王逢春,郭琪.高效液相色谱法测定半夏泻心口服液中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].解放军医药杂志,2013,25(10)∶76-78.

[7]瘳伟明,刘桂珍,周国波.HPLC法测定小儿止咳颗粒中黄芩苷的含量[J].中国药房,2010,21(31)∶2946-2947.

[8]叶建晨,高效液相色谱法同时测定芩连胶囊中及盐酸小檗碱含量[J].中国药业,2013,22(6)∶61-63.

Determination of Baicalin and Bererin Hydrochloride in Chunchiqingwei pills by HPLC

Zhang Xiuli Li Xin Zhang Yingying Gou Xiaodan

Objective To invtstigating a HPLC method for determination of Baicalin and Bererin Hydrochloride in Chunchiqingwei pills.Methods Using Kromasil100-5 C18column(4.6 mm×150.0 cm,5 μm) as chroma-tography, acetonitrile as mobile phase A,0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution as mobile phase B,the gradient elution was used;The detection wavelength was 278nm,the column temperature was 30℃,the flow rate was 1.0ml/min.Results Berberine Hydrochloride in 0.0124～0.3100 μg,Baicalin in 0.0217～0.5425 μg range has a good linear relation,the average recoveries were 99.1%,99.04%,RSD respectively 0.94%,0.85%(n=6).Conclusion The method is accurate and reliable results of strong specificity,stability,repeatability.

Chunchiqingwei pills;Baicalin;Berberine Hydrochloride;HPLC

R927.2

A

1673-5846(2015)01-0025-03

辽宁省朝阳市食品药品检验所，辽宁朝阳 122000