电化学发光免疫仪检测心肌损伤血清标志物的技术分析*

邱新成 侯新蕊

电化学发光免疫仪检测心肌损伤血清标志物的技术分析*

邱新成①侯新蕊②

目的：研究分析罗氏E601电化学发光免疫分析仪在检测心肌损伤血清标志物方面的应用。方法：通过临床研究，分析电化学发光免疫分析仪检测心肌损伤血清标志物时的一些关乎检验结果准确、符合临床判断和应用的重要技术环节。结果：结合心肌损伤血清标志物的临床意义，规范选用检测项目；应注意正确的保存、使用试剂，注意合并试剂的使用等技术环节。结论：在使用其检测心肌损伤血清标志物时，严格控制技术流程的诸环节对保障检测质量具有重要作用。

电化学发光仪；心肌损伤；血清标志物

DOI∶ 10.3969/J.ISSN.1672-8270.2015.11.002

[First-author’s address] Department of Cardiology, The Second Artillery General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100088, China.

电化学发光免疫分析仪是继放射免疫、酶联免疫及荧光免疫技术以后研究出来的新一代标志免疫测定技术[1]。目前，自动电化学发光免疫分析仪可检测的项目很多，主要包括肿瘤标志物、性激素、甲状腺激素、心肌损伤血清标志物、贫血检查、传染性疾病、骨代谢检查以及免疫肝炎系列等内容，极大的满足了临床的需求[2]。本研究通过对罗氏E601自动电化学发光免疫分析仪在检测心肌损伤血清标志物中的应用，分析在检测时的注意事项及技术环节。

1 心肌损伤血清标志物的临床意义

全自动电化学发光免疫分析系统在心肌损伤血清标志物的应用中有别于传统生化检查的心肌酶项目，其主要项目是肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase MB，CK-MB)、肌钙蛋白(troponin，Tn)以及肌红蛋白(myoglobin，Mb)。CK-MB在发病后出现较早，通常在心源性胸痛3～8 h后即可在血液中检测出，达到峰值时间为9～30 h，而48～72 h后恢复正常。CK-MB若在病程中保持在高水平，通常意味着心肌坏死仍在继续，若恢复正常后再次升高，则提示梗塞部位的扩大或者又有新的梗塞。CK-MB也可出现在其他疾病中，如横纹肌溶解，此时需要结合其他心肌损伤血清标志物的检查进行鉴别。Tn是横纹肌收缩的重要调节蛋白，存在于心肌和骨骼肌中，由3个亚基组成：即肌钙蛋白C(TnC)、肌钙蛋白T(TnT)和肌钙蛋白I(TnI)。TnT、TnC和TnI主要以2种形式存在于心肌细胞中，大部分以结构蛋白形式固定于肌原纤维上，小部分游离于胞浆中。在正常人血液中含量很低(＜0.3 ug/L)，当心肌细胞受损时，游离中的Tn先释放进入血液，随着损伤的加重，结合部分的Tn被降解而不断释放入血液中，使其不断地持续升高[3]。对于TnT而言，心肌细胞内的TnT呈复合体状态约占94%，6%游离在胞浆中且为可溶性，在心肌细胞膜完整的情况下不能透过，因此正常人血清中几乎检测不到，当心肌细胞受损时TnT分子量较小就比较容易透过细胞膜释放入血液中，使血清中TnT水平迅速增加。在发生心源性胸痛3～4 h后，即可检测出TnT，且检测期长达14 d左右；在不稳定型心绞痛中，心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)也常升高，提示可能有小范围的心肌梗塞，因此由于其灵敏度高、发病后出现时间早、持续时间长及特异性交叉等原因，临床上检测cTnT对于诊断心肌缺血，急性心肌梗死，微小面积心肌损伤等均具有重要意义。Mb是横纹肌细胞的细胞浆蛋白，参与氧的转运及储留，在症状发生后2 h左右，Mb的浓度就会升高，因此被认为是发生心肌梗塞后的最早期标志物，心梗发生后4～12 h浓度达高峰，24 h左右恢复正常水平，因此在临床检测肌红蛋白对于早期诊断急性心肌梗死、再更及施行溶栓治疗后是否再灌注均有重要的临床意义。心肌损伤标志物在血液中出现过程见表1。

表1 心肌损伤标志物在血液中出现的时间(h)

2 心肌损伤血清标志物的检测

随着医疗技术的发展，心肌损伤血清相关标志物的检查手段越来越丰富，诸如心电图、负荷试验、核素心肌显像、超声心动图以及冠脉造影等。血液检查心肌标志物经历了从谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase，GOT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)向Mb、肌酸激酶和肌酸激酶-MB型以及TnI和TnT转变的重大变革[4]。心肌损伤血清相关标志物检查对于患者而言，即方便快捷，又伤害较小，免除患者花大量的时间配合进行负荷试验；避免某些检查有可能对患者造成的伤害等。因此，心肌损伤血清标志物在临床上的应用越来越重要，且临床对心肌损伤血清标志物检查的要求越来越高，对检验技术要求越来越先进，对检验结果要求越来越准确，对检验时间要求越来越短，因而要求分析、检测心肌损伤生化标志物时应快捷、敏感和迅速。

罗氏E601电化学发光免疫分析仪以其先进的方法学，快捷迅速的监测，以及准确可靠的结果受到临床的青睐[5]。但在检测心肌损伤血清标志物时，仍需严格进行质量控制，注意以下技术环节，确保其检验结果的准确性。

2.1 CK-MB检测

CK-MB检测可以提高发病后6 h内诊断急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的敏感性，采用CK-MB质量法检测其灵敏度可达96.8%，但缺乏心脏绝对的特异性[6]。前列腺或子宫手术、小肠、舌、膈肌手术或创伤、横纹肌损伤、心脏手术以及慢性肾衰等CK-MB均会升高[7-8]。因此，需要在选择CK-MB检测时应进行连续性检测用以提高检测特异度，此外标本采集时间同样很重要，需要熟悉掌握CK-MB在病程中血中的浓度水平变化规律。

2.2 Mb检测

虽然由于Mb分子量极小，非常容易释放入血液中，是目前诊断AMI最早的可测指标。但是Mb广泛存在于横纹肌和平滑肌中，诊断心肌梗死的特异性很低，因此Mb在临床上用于阴性排除价值更高，正因为其特有的临床意义，也可用于监测溶栓治疗后再灌注的情况。

2.3 cTnT检测

由于cTnT有典型的早期升高和较慢降低，因此既可作为MI早期指标，也可作为中期和晚期的诊断指标。同时，由于特异性极强，既可作为“微灶梗死”的指标，也可作为估计梗死面积的指标，还可作为危险分层、判断预后的指标[6，9-10]。许之民等[11]报道，在病毒性心肌炎患者的急性期TnI、TnT比传统的CK、CK-MB、GOT、血清LDH有更好的敏感性，在116例病例中阳性率分别为：TnI64.7%、TnT45.7%、CK10.3%、CK-MB7.8%、GOT6.9%、LDH 12.9%。李亚维等[12]用急性病毒性心肌炎小鼠模型，同时观察了42例急性病毒性心肌炎患者，认为测定血清cTnT水平探查心肌炎性损伤远较CK-MB敏感。

2.4 E601残余试剂的使用

罗氏E601电化学发光仪器的试剂特点之一，是在使用完其对应扫描条码的可检测份数后，试剂盒中仍剩余有大量的残留试剂，可以将数盒条码信息显示已经“用完”的残留试剂合并为一盒，使用尚未使用过的条码扫描后可继续使用。罗氏E601心肌损伤血清标志物试剂盒通常较为稳定，合并试剂后检测结果仍然可靠，但在合并试剂时应注意所合并的试剂必须为同一批号，严禁不同批号合并，如发生不同批号合并，将对检验结果造成巨大影响。同一批号试剂合并之后，在上机检查患者标本时必须用罗氏专用质控品先进行室内质量控制后方可检测，如未进行质量控制则不可使用该盒合并试剂。

2.5 检测试剂保存和使用

罗氏E601电化学发光免疫分析仪在使用过程中偶尔会出现试剂检测错误，出现实测量与试剂盒的标称量不符，其原因为：①如发生在原装新试剂盒中，有可能是该盒试剂的试剂量不够，或是试剂盒中存有大量气泡；②使用合并试剂盒时，在合并时会产生大量气泡，因此要求在用冰箱冷藏保存试剂盒时要轻拿轻放，盒口朝上。合并试剂时要缓慢注入合并的试剂。

2.6 仪器故障排除方法

(1)罗氏E601电化学发光免疫分析系统在遇到故障时会给出报警信息，此时应根据提示充分利用诊断菜单中的各项功能和数据，结合仪器的工作状态，找出故障发生原因和解决方法；若不能自行解决，需及时和工程师联系进行维修[1]。在常见的故障原因分析时，不能够单从仪器对故障报警的描述分析，应该注意是否与报警信息相关的检测单元的其他方面出现了故障。如仪器报吸入标本异常，通常该报警原因是吸样针在吸取血清时发现了凝块、气泡等异常标本。由于抽血后未等血液自然凝固则进行离心导致血清样本分离不好，或患者的血液中存在高纤维蛋白，造成吸样时纤维蛋白同时被吸入、凝结而导致吸样针不完全堵塞[13]。然而，也有可能是因为吸样针运动异常，加样臂加样位置偏离造成。由此可见，虽然仪器报吸入标本异常，分析原因时还得从加样标本相关检测单元去分析，而不只是考虑样本堵塞的问题。

(2)原装试剂出现检测结果异常，该种情况通常是试剂在运输过程中出现问题，可检测“磁珠”试剂盒盖口是否附着大量黄色干涸的“磁珠”，若有附着“磁珠”现象则需弃用该试剂盒；除此之外的情况则为试剂盒本身的问题，需要与罗氏公司的工程师联系，以排除故障。

3 结语

电化学发光免疫分析仪为精密仪器，若要保证其正常运行，得到较为准确的检测结果，必须严格按照操作规程操作，不仅使仪器正常运行，更应该做好仪器的常规保养工作[14]。此外，应对其进行预防性维护，保证仪器具有良好的工作状态和性能，并减少故障的发生频率，延长其使用寿命[15]。

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Roche ECL instrument E601 in inspection serum markers of myocardial injury aspects

QIU Xin-cheng, HOU Xin-rui
China Medical Equipment,2015,12(11)∶5-8.

Objective∶ To discuss the application of Roche ECL instrument E601 in inspection serum markers of myocardial injury aspects. Methods∶ Dependent on the clinical experience of cardiology, the introduction of Roche E601 methodology and the instruments using, and the clinical significance analysis of myocardial injury markers, summarized the important considerations in accurate test results and clinical judgment when using ECL instrument checks serum markers of myocardial injury. Results∶ In order to make better clinical application, people who use Roche ECL instrument E601 should pay attention to proper storage and use reagents, note the use of the combined reagents and the clinically meaningful of detected projects. Conclusion∶ The quality control of technical procedures is very important to assure the testing results. Only understanding some of the important considerations,can we better integrate the device for clinical application.

Electrochemiluminescence instrument; Myocardial injury; Serum markers

邱新成，男，(1982- )，本科学历，医师。第二炮兵总医院心内科，从事心血管内科诊疗工作。

1672-8270(2015)11-0005-04

R542.2

A

2015-06-09

国家科技支撑计划(2009BAI86B04)“保健特殊需求关键技术及设备研究”

①第二炮兵总医院心内科 北京 100088

②解放军总医院心内科 北京 100853