五种抗肿瘤药物对原发性乳腺癌原代培养细胞化疗效果的影响因素分析

姜鹏玲，尼杰，谷峰，李春艳，张敏，付丽，只向成

(天津医科大学肿瘤医院乳腺癌防治教育部重点实验室，天津300060)

乳腺癌的高度异质性，导致肿瘤细胞对化疗药物的敏感性存在差异［1，2］。2008年11月～2013年9月，我们观察了多西他赛(DOC)、吡柔比星(THP)、表柔比星(EPI)、长春瑞滨(NVB)、顺铂(CDDP)5种常用化疗药物对原发性乳腺癌细胞原代培养细胞的单药化疗有效率，并分析影响化疗有效率的因素。

1 资料与方法

1.1 临床资料 天津医科大学肿瘤医院收治的女性原发性乳腺癌患者536例，均经石蜡切片病理学确诊，均无其他恶性肿瘤病史;年龄23～81岁，平均52岁;Ⅰ期164例，Ⅱ期282例，Ⅲ期90例。

1.2 药物敏感性检测 采用胶滴肿瘤药敏检测(CD-DST)技术。手术过程中取患者乳腺癌组织，在无菌条件下剪碎，经胶原酶消化，获取单细胞悬液。离心后接种于Ⅰ型胶原凝胶的细胞培养瓶中，培养出原代细胞后，弃去未贴壁的死细胞，获取单细胞悬液。冰浴条件下将CD-DST试剂盒中的A、B、C液按8∶1∶1制成胶原凝胶液，与细胞沉淀混合打匀;按30 μL/滴、3滴/孔种植到6孔板中，在37℃条件下孵育1 h使其凝胶化后，加入培养液培养。培养24 h后，分别加入需检测的化疗药物DOC(10 μg/mL)、THP(0.5 μg/mL)、EPI(0.5 μg/mL)、CDDP(15 μg/mL)、NVB(4 μg/mL)，设立空白对照组。培养24 h后，洗去化疗药物，加入培养液，继续培养7 d。中性红染色固定干燥后，采用Scionimage软件对图像进行分析，结果用药物处理组与空白对照组的肿瘤细胞克隆量光密度比值表示。≤50%为肿瘤细胞对化疗药物敏感，＞50%为不敏感即耐药。化疗药物有效率 =对化疗药物敏感例数/总例数×100%。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在原发性乳腺癌原代培养细胞中，DOC的单药化疗有效率为 46.5%(249/536)、EPI为 42.9%(230/536)、THP 为 42.7%(229/536)、CDDP 为42.5%(228/536)、NVB 为34.0%(182/536)。DOC在年龄＜60岁、ER阴性、p53阳性、非Luminal型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均＜0.05);EPI在ER阴性、Her-2阳性、非Luminal型、非Luminal A型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均＜0.05);THP在组织学Ⅲ级、Her-2阳性乳腺癌细胞中单药有效率高(P均＜0.05);CDDP在ER阳性、Luminal型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均＜0.05);NVB在PR阳性、Luminal B型和非Her-2过表达型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均＜0.05);详见表1。

表1 单药有效率与乳腺癌临床病理参数的关系

3 讨论

采用CD-DST技术培养肿瘤细胞所需癌组织量少，且癌组织离体时间短，生物学性状尚未发生大的变化，能较真实地反映整个肿瘤细胞群体的特性及不同供体的个体差异，具有较好的临床相关性，标本可评价率为 84.3%［3］。

本研究通过CD-DST发现，原发性乳腺癌原代培养细胞对5种常用化疗药物的敏感性不同;而且，通过对乳腺癌患者临床病理特征进一步分层发现，同一种化疗单药在不同分层中的敏感性也存在差异。其中，DOC在ER阴性、p53阳性和非Luminal型乳腺癌细胞中较敏感，与Rouzier等［4］和Holmes等［5］提出DOC在ER阴性、p53阳性的乳腺癌细胞中敏感性较高的结论一致。但是，Durbecq等［6］认为，乳腺癌对DOC的敏感性与p53表达无关。因此，以上结论还需更多的临床数据验证。此外，本研究中DOC对年龄≥60岁乳腺癌患者的化疗有效率较低，与老年患者乳腺癌组织学分级低、ER高表达、p53 低表达、化疗敏感性低的特点相符［5，7，8］。THP在组织学Ⅲ级和Her-2阳性乳腺癌细胞中的敏感性较高;EPI在ER阴性、Her-2阳性和非Luminal型乳腺癌细胞中的敏感性较高;与 Carey等［9］和Pritchard等［10］报道的蒽环类药物在Her-2过表达型乳腺癌中的敏感性较高的结果一致。Petrelli等［11］报道，CDDP用于乳腺癌新辅助化疗中，其病理完全缓解率(pCR)可达41.9%;三阴型乳腺癌患者达到pCR的例数约是非三阴型患者的2倍。本研究结果显示，CDDP在ER阳性和Luminal型乳腺癌细胞中化疗敏感性较高，在三阴型和非三阴型乳腺癌细胞中其化疗敏感性差异无统计学意义。目前，三阴型乳腺癌能否在含有CDDP的新辅助化疗中获益尚不明确。伴有BRCA突变的三阴型乳腺癌对CDDP最敏感，pCR 可达 83%～100%［12］。然而，BRCAness型乳腺癌在三阴型乳腺癌中更常见，约占2/3，BRCAness型乳腺癌具有散发性乳腺癌和BRCA突变型乳腺癌的混合特征，与BRCA突变型相比，在含CDDP 的新辅助化疗中其 pCR 明显下降［13，14］。本研究观察到，CDDP单药有效率在三阴型乳腺癌和非三阴型乳腺癌中的差异无统计学意义，但不能说明CDDP在三阴型乳腺癌中不敏感。由于本研究中未对三阴型乳腺癌进行基因方面的检测，所以上述推断尚需进一步验证。而同样属于作用于微管的生物碱类化疗药，NVB与DOC的敏感因素完全不同，也为临床上两者联合使用不会产生交叉耐药［15］提供一定的依据。

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