柴胡疏肝散对肝郁大鼠血清NO和脑5-HT含量的影响

李浩铮，王永辉，许凯霞，贾宇平，刘仕琦，李俊莲

（山西中医学院，山西太原 030024）

肝气郁滞证是由于肝的疏泄功能异常，疏泄不及而致气机郁滞所表现的证候，简称肝郁证。临床表现为情志抑郁、急躁易怒、喜叹息、胸胁或少腹胀满窜痛等。随着社会的发展及竞争压力的增加，肝气郁滞的人群在不断上升。柴胡疏肝散是治疗肝气郁滞证的重要代表方剂，由柴胡、陈皮、川芎、香附、枳壳、芍药、甘草组成，具有疏肝行气、活血止痛之功。本研究通过对大鼠进行鼠笼水平震荡、冰水游泳、拍打、悬尾、绳子捆绑四肢等综合方法建立肝郁模型，用柴胡疏肝散灌胃对肝郁模型大鼠进行干预，以2个与情志密切相关的因子一氧化氮（NO）与5-羟色胺（5-HT）作为主要检测指标，以期为柴胡疏肝散的药理作用提供进一步的现代科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级SD大鼠30只，雌雄各半，质量180～220g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK（京）2009-0017。

1.1.2 药物与试剂 将柴胡疏肝散（陈皮醋炒、柴胡各 6g，川芎、香附、枳壳麸炒、芍药各 4.5g，炙甘草 1.5g，均购自北京同仁堂，经山西中医学院中药系王兵老师鉴定为正品）。方中各中药浸泡20min，水煎，待煮沸15min后，煎液3层纱布过滤。二煎煎沸15min，过滤法同上，合并2次煎液，于旋转蒸发仪上浓缩成1g/L水煎液。氯化钠（天津市科密欧化学试剂有限公司，产品批号：20110126），大鼠NO酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（美国R&D公司，上海创赛生物技术有限公司进口分装，批号：E-30907），大鼠5-HT ELISA试剂盒（美国R&D公司，上海创赛生物技术有限公司进口分装，批号：E-30325）。

1.1.3 实验仪器 手提式高速分散器（宁波新芝生物科技股份有限公司），Versa Max连续波长酶标仪（美国MD公司），DHP-9162电热恒温培养箱（上海-恒丰科学仪器有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与给药 将大鼠随机分为3组，分别为空白组、模型组、治疗组，每组10只，雌雄各半。空白组每天按3.5g/kg灌胃蒸馏水，模型组每天进行刺激并灌胃蒸馏水；治疗组每天对其进行刺激并按3.5g/kg灌胃柴胡疏肝散。2w后进行指标检测。

1.2.2 肝郁模型建立方法 将大鼠在光线自然、安静的实验室环境里适应性喂养7d。通过对大鼠进行鼠笼水平震荡、冰水游泳、拍打、悬尾、绳子捆绑四肢等建立肝郁模型。将上述5种刺激随机安排到14d内，每天1种刺激，每种刺激平均约出现3次。同种刺激不连续出现，以使动物不能预料刺激的发生［1］。

1.2.3 指标检测 从实验第14天晚上开始，各组动物禁食禁水12h，称重后，腹主动脉采血，离心并分装血清，用生理盐水制备10%脑组织匀浆，离心后取上清液备检。摘取小鼠的胸腺和脾脏，用滤纸吸干残血后，称重，计算其脏器指数。用ELISA法检测各组大鼠血清中NO、脑中5-HT含量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 一般状况

造模前，各组大鼠一般状况未见明显差异，大鼠皮毛柔顺、有光泽，活泼，眼珠圆睁，颜色鲜红透亮，积极寻找声源，食量正常。随着造模时间推移，空白组大鼠无明显变化；模型组大鼠均成抑郁状态，表现为毛发晦暗散乱，活动减少，形体消瘦，大便稀溏，甚至出现自残现象；治疗组大鼠上述抑郁状态有明显改善，形体无明显消瘦，亦无自残现象。

2.2 各组大鼠体重、胸腺指数、脾脏指数比较

与空白组相比，模型组胸腺指数、脾脏指数有降低趋势，但差异无统计学意义；治疗组与模型组比较，脾脏指数显著升高（P<0.05）。3组体重及胸腺指数比较差异无统计学意义。结果见表1。

表1 各组大鼠体重、胸腺指数与脾脏指数比较 （±s）

表1 各组大鼠体重、胸腺指数与脾脏指数比较 （±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05

组别 n 体重（g） 胸腺指数（mg/10g）脾脏指数（mg/10g）空白组 10 207.43±19.36 1.77±0.55 2.38±0.33模型组 10 200.20±13.23 1.68±0.30 2.12±0.28治疗组 10 205.80±17.92 1.81±0.25 2.73±0.691）

2.3 大鼠血清中NO和脑中5-HT含量比较

与空白组相比，模型组血清NO含量显著降低（P<0.05），脑 5-HT 水平明显升高（P<0.01）；与模型组比较，治疗组给药后NO含量升高（P<0.05），脑5-HT水平下降（P<0.05）。结果见表2。

表2 大鼠脑5-HT、血清NO 含量 （ng/L，±s）

表2 大鼠脑5-HT、血清NO 含量 （ng/L，±s）

注：与模型组比较，1）P＜0.05；与空白组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01

组别 n 5-HT NO空白组 10 188.53±62.12 22.00±5.12模型组 10 244.37±74.663） 17.64±3.102）治疗组 10 192.76±54.421） 22.88±4.771）

3 讨论

目前，现代医学对肝郁证发病机制的认识已经深入到多系统及细胞、分子水平，在以焦虑、紧张、悲痛等为代表的负面情绪长期刺激下，机体高级神经中枢调节机制发生紊乱，进而引起神经、内分泌、循环、消化、免疫、感觉、运动等多系统功能紊乱［2］。其中，5-HT及NO是2个与肝郁密切相关的因子。

本实验运用对大鼠进行鼠笼水平震荡、冰水游泳、拍打、悬尾、绳子捆绑四肢等连续不定14d刺激的方法制备肝郁证候动物模型，干预组同时用疏肝解郁法之代表方剂柴胡疏肝散治疗。结果显示，柴胡疏肝散可改善肝郁大鼠的肝郁症状，升高大鼠脾脏指数和血清中NO含量，降低脑中5-HT的含量。

柴胡疏肝散为明代著名医家张景岳所创，方中柴胡疏肝解郁、条达肝气，为君药；香附理气疏肝，川芎行气活血，为臣药；佐以白芍、枳壳、陈皮养血柔肝，配合柴胡疏肝理气宽中；炙甘草益气补中，缓肝之急。诸药配伍，既补肝体，又助肝用，气血兼顾，对肝郁证有较好的治疗作用。

5-HT是一种调节神经活动重要的神经递质，主要分布于松果体和下丘脑，是调节情绪及行为的重要活性物质。剧烈或长期负面情绪的刺激，可引起脑内5-HT合成及代谢的改变。有研究表明，大鼠经过激怒刺激和精神紧张后，能促进下丘脑-交感肾上腺系统兴奋性升高，使下丘脑5-HT等单胺类神经递质激素含量增高，诱发中枢神经系统和植物神经功能紊乱，进而通过下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺轴影响机体免疫功能［4］。研究发现，肝郁模型组脑5-HT含量较空白组显著升高（P<0.01），反映机体免疫力的胸腺指数和脾脏指数虽没有明显降低，但出现了降低的趋势，这与上述研究是一致的。治疗组与模型组相比，5-HT含量明显降低（P<0.05），脾脏指数也较模型组有显著升高（P<0.05）。这可能与方中柴胡降低大鼠脑组织前额叶中5-羟色胺的含量而对慢性应激抑郁模型大鼠有一定的疗效有关［5］。

NO是一种由血管内皮细胞（EC）产生并释放的细胞信使，广泛分布于生物体各组织，特别是神经组织中。研究发现，肝郁模型组与空白组相比，血清NO含量显著降低（P<0.05），这可能与肝郁证时EC功能损伤，肝脏及其他组织过氧化能力被激活，过氧化产物增加有关［6］。另有研究显示，NO水平降低还是肝郁引起胃黏膜炎症的病理生理基础之一。疏肝解郁中药可有效预防肝郁及胃病理变化产生，内在机制与其能够调节NO水平，增强胃黏膜防御保护机能有关［7］。本研究也表明，肝郁组用疏肝解郁之柴胡疏肝散治疗后，其NO含量确实可明显升高（P<0.05）。

总之，柴胡疏肝散治疗肝郁证的途径可能有很多，本研究证实，其机制可能与其调节肝郁大鼠血清中NO和脑中5-HT水平、提高脾脏指数进而增强免疫力有关，为柴胡疏肝散治疗肝郁证提供了部分现代科学依据。其他机制还有待于进一步研究。

［1］赵博，柴丽，吴大梅，等.复合多因素方法复制肝郁脾虚证动物模型的实验研究［J］.成都中医药大学学报，2013，36（3）：11-14.

［2］陈家旭，杨维益.神经－内分泌－免疫网络研究概况及其与中医肝脏关系的探讨［J］.北京中医药大学学报，1995，18（4）：7-11.

［3］安书成，安锋利.5-羟色胺与应激反应及其抑郁症的关系［J］.陕西师范大学继续教育学报，2006，23（1）：122-124.

［4］吴振宇，杨军平，吴广均，等.小站台水环境不同应激时间对组织中5-羟色胺的影响［J］.中国行为医学科学，2004，13（1）：11-13.

［5］胡燕，洪敏.柴胡类方治疗抑郁症研究［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（17）：247-249.

［6］刘建鸿，姚凝，王淳，等.肝郁证与血浆内皮素（ET）、血清一氧化氮（NO）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）的相关性实验研究［J］.甘肃中医，2009，22（4）：72-73.

［7］丁杰，陈家旭，李植延.肝气郁结大鼠胃黏膜结构和功能变化的实验研究［J］.辽宁中医杂志，2007，34（2）：229-232.