冬凌草甲素固体分散体的制备及溶出度测定

张庆明，徐云燕，张 平，苏 华

0 引 言

溶解度影响药物的生物利用度，固体分散体技术是一种能增加药物溶解度、溶出速率和生物利用度的有效方法［1-2］，有熔融法、溶剂蒸发法、溶剂-熔融法、超临界 CO2萃取法等［3-6］。

冬凌草甲素是从冬凌草中提取的一种二萜化合物，具有免疫增强、抗菌消炎、抗肿瘤等作用［7-10］，但由于水溶性差、生物利用度低、体内代谢速度快，使其临床应用和推广受到限制［11-12］。目前对增加冬凌草甲素溶解度的相关研究较少，本文采用溶剂蒸发法，以泊洛沙姆为载体制备冬凌草甲素-泊洛沙姆固体分散体，将药物高度分散在泊洛沙姆载体中，提高冬凌草甲素的体外溶解度和溶出度，进而为提高冬凌草甲素的生物利用度打下基础。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，ZRS-8G智能溶出仪(上海黄海药检仪器有限公司);RE-2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);DSC 204 HP phoenix差示扫描量热仪(美国Philips公司);XRD-6100 X射线衍射仪(日本岛津);BS21S Sartorius电子天平(德国赛多利斯集团)。

冬凌草甲素对照品(河南济世药业，批号20140301，含量99.5%);冬凌草甲素原料药(河南济世药业，批号20140501，含量98.7%);泊洛沙姆188(德国巴斯夫);甲醇(色谱纯，美国Merk公司);其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品的制备

2.1.1 冬凌草甲素固体分散体的制备 取冬凌草甲素0.5g，用适量乙醇溶解后，加入泊洛沙姆1.5g，搅拌至溶解，40℃真空旋转蒸发除去乙醇，置-20℃环境中冷却固化0.5 h，40℃真空干燥12 h后，研磨粉碎过60目筛得冬凌草甲素固体分散体。

2.1.2 物理混合物的制备 取冬凌草甲素0.5 g，泊洛沙姆1.5 g混合均匀后过60目筛即得。

2.2 冬凌草甲素固体分散体的鉴别

2.2.1 差示扫描量热仪分析 分别称取冬凌草甲素、泊洛沙姆、物理混合物和固体分散体适量，扫描温度范围40～350℃，升温速率10℃/min，扫描环境为N2，冬凌草甲素和泊洛沙姆在225℃和55℃有吸热峰分别为它们的熔点，物理混合物中这2个吸热峰均存在，而在固体分散体中，冬凌草甲素的特征吸收峰消失，表明冬凌草甲素可能以无定形态分散在泊洛沙姆中。见图1。

2.2.2 X-射线粉末衍射分析 分析条件为，Cu石墨靶单色器，管流强度40 mA，高压强度40 kV，范围0°～40°(2θ)，步长0.04°，频率 0.04°/s。冬凌草甲素原料药呈结晶结构，物理混合物中冬凌草甲素的特征峰均存在，而固体分散体中冬凌草甲素的特征峰均消失。说明冬凌草甲素分散在泊洛沙姆中，失去了原有的晶型结构，与差示扫描量热仪分析结果一致。见图2。

图1 差示热量扫描图谱Figure 1 DSC thermograms

图2 粉末X-射线衍射图谱Figure 2 Powder X-ray diffraction spectra

2.3 冬凌草甲素固体分散体的体外溶出研究

2.3.1 色谱条件 色谱柱Thermo C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇/水(50/50);流速 1.0 mL/min;检测波长236 nm;柱温30℃;进样体积20 μL，分别取空白溶液、冬凌草甲素对照品溶液和样品溶液注入色谱仪，记录色谱图，结果见图3。

图3 高效液相色谱图Figure 3 HPLC chromatograms

2.3.2 标准曲线的制备 精密称取冬凌草甲素对照品25.0 mg置100 mL量瓶中，加甲醇15 mL溶解后，用水定容至刻度摇匀。分别精密量取上述溶液适量置50mL量瓶中加水定容配制成浓度为1、3、5、7、10、20、25 μg/mL 浓度样品摇匀，分别进样 20 μL，记录峰面积。以质量浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程:

A=39058C-1755(r=0.9998)

结果表明，冬凌草甲素浓度在1～25 μg/mL的范围，线性关系良好。

2.4 进样精密度实验 取“2.3.2标准曲线的制备”项下浓度为5、10、25 μg/mL的对照品溶液分别连续进样5次计算冬凌草甲素的进样精密度，低、中、高浓度的精密度分别为 1.52%、0.85%、0.47%，RSD均＜2%，方法精密度良好。

2.5 溶液稳定性实验 按“2.3.2标准曲线的制备”项下配制浓度为20 μg/mL的冬凌草甲素对照品溶液，并于0、2、4、6、8、12、24h 分别进样20μL，记录其峰面积，计算RSD值，考察冬凌草甲素在溶液中的稳定性，结果RSD=1.1%，表明冬凌草甲素在溶液中12 h内稳定。

2.6 回收率实验 分别精密称取冬凌草甲素对照品16.0、20.0 和24.0 mg与相应比例的泊洛沙姆混合均匀。然后分别精密称取上述混合物适量各3份，置100 mL量瓶中，加甲醇15 mL溶解，后用水定容，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过。低、中、高3种浓度下冬凌草甲素的回收率分别为99.1%、100.5%、99.5%，RSD=1.3%(n=9)，回收率良好。

2.7 溶出度测定 分别测定原料药、物理混合物和冬凌草甲素固体分散体(均含冬凌草甲素20 mg)的溶出度。分别以900 mL水、pH6.8磷酸盐缓冲液和pH1.2盐酸溶液为溶出介质，温度为(37±0.5)℃，于5、10、15、20、30、45、60 min 时，分别取溶液 5 mL经0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液进样 20 μL，记录峰面积，计算累计溶出度。结果见表1、表2、表3。

表1 原料药在不同pH溶出介质中的溶出度(±s，n=6)Table 1 Results of API dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

表1 原料药在不同pH溶出介质中的溶出度(±s，n=6)Table 1 Results of API dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

时间(min) 原料药平均累积溶出度(%)水 pH6.8磷酸盐缓冲液 pH1.2盐酸溶液5.4 ±3.1 11.2 ±2.6 16.6 ±3.5 10 14.2 ±2.1 19.3 ±2.2 25.5 ±3.1 15 21.6 ±2.6 27.8 ±3.1 32.1 ±4.2 20 28.3 ±2.8 30.3 ±3.5 44.4 ±4.6 30 29.4 ±4.0 35.4 ±4.2 56.5 ±5.4 45 32.9 ±3.6 41.2 ±3.3 58.3 ±4.2 5 60 33.4 ±2.9 43.3 ±3.3 62.6 ±2.9

表2 物理混合物在不同pH溶出介质中的溶出度(±s，n=6)Table 2 Results of physical mixture dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

表2 物理混合物在不同pH溶出介质中的溶出度(±s，n=6)Table 2 Results of physical mixture dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

时间(min) 物理混合物平均累积溶出度(%)水 pH6.8磷酸盐缓冲液 pH1.2盐酸溶液9.6 ±4.0 13.1 ±3.6 15.2 ±2.5 10 18.2 ±3.5 21.3 ±3.1 28.5 ±3.5 15 24.6 ±3.2 30.8 ±4.1 35.5 ±4.5 20 29.3 ±3.8 42.3 ±4.1 47.4 ±3.6 30 32.4 ±3.5 45.4 ±4.0 60.5 ±4.4 45 37.9.±4.2 49.7 ±5.3 67.3 ±3.2 5 60 37.4 ±3.9 51.3 ±5.9 68.4 ±3.9

表3 固体分散体在不同pH溶出介质中的溶出度(±s，n=6)Table 3 Results of solid dispersion dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

表3 固体分散体在不同pH溶出介质中的溶出度(±s，n=6)Table 3 Results of solid dispersion dissolution in 3 different pH mediums(±s，n=6)

时间(min) 固体分散体平均累积溶出度(%)水 pH6.8磷酸盐缓冲液 pH1.2盐酸溶液37.2 ±5.1 33.1 ±2.9 35.2 ±4.5 10 49.8 ±3.7 47.6 ±4.5 48.8 ±5.5 15 67.5 ±4.1 64.2 ±3.8 65.2 ±3.5 20 78.4 ±5.0 75.4 ±4.5 74.4 ±5.6 30 88.5 ±5.4 90.5 ±3.8 91.5 ±3.4 45 90.0 ±4.4 92.6 ±4.2 93.0 ±3.2 5 60 92.6 ±4.2 93.1 ±3.5 94.4 ±2.9

3 讨 论

泊洛沙姆为聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，由于其对难溶性药物具有良好的润湿和增溶效果，被广泛用于传递药物的载体［13-15］。本文以泊洛沙姆为载体，在前期试验中，以不同比例的冬凌草甲素:泊洛沙姆制备固体分散体，结果表明，随着泊洛沙姆量的增加，冬凌草甲素的溶解度随着增加，综合考虑载药量，最终选择比例为1∶3。

本文制备的冬凌草甲素固体分散体经差示扫描量热仪和P-XRD实验表明，原料药从结晶状态变成以无定型状态分散在泊洛沙姆中，为增加药物的溶解度和药物的吸收奠定了基础［16］。

本研究建立了冬凌草甲素的体外溶出度测定方法。结果表明，该方法简单，能够准确测定冬凌草甲素在溶出介质中的溶出度。经体外溶出实验表明，冬凌草甲素、物理混合物均在pH1.2盐酸溶液介质中的累积溶出度最高，固体分散体在3种溶出介质中的累积溶出度均＞90%。表明冬凌草甲素及其混合物的溶出受溶出介质的pH影响，在酸性条件下溶出度高于碱性条件。而冬凌草甲素固体分散体的溶出不受介质pH的影响，且在3种介质中溶出度均＞原料药和物理混合物。

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