补硒-VE及授精方法对萨福克羊超数排卵和受精率的影响

李爱朵 赵建华 杜俊芳 秦剑平 李增开 李新春

（1，陕西省榆林市神木县畜牧兽医技术推广站 719300； 2，陕西省绒山羊工程技术研究中心 719000）

补硒-VE及授精方法对萨福克羊超数排卵和受精率的影响

李爱朵1赵建华1杜俊芳1秦剑平1李增开1李新春2*

（1，陕西省榆林市神木县畜牧兽医技术推广站 719300； 2，陕西省绒山羊工程技术研究中心 719000）

选择做胚胎移植供体120只萨福克母羊，采用2因素4重复试验，在饲养管理和激素处理相同的条件下，进行补加亚硒酸钠-VE和不同输精方式试验，研究其对供体母羊排卵和受精率的影响。结果表明：肌注亚硒酸钠-VE的试验组受体母羊，每只平均冲胚11.5枚，显著高于对照组（8.9枚）（p＜0.01），且组内各重复间差异不显著（p＞0.05），可见，在缺硒地区在配种前给母羊补充硒-VE对其排卵有明显的影响；采用内窥镜子宫角输精法，受精率97.02%，而采用常规子宫颈口输精法，受精率82.57%，二者差异显著（p＜0.05），说明内窥镜子宫角输精法，是一种效果很好的人工授精输精方法。

萨福克母羊；繁殖；胚胎移植；亚硒酸钠VE注射液；内窥镜子宫角输精法；常规输精法；超数排卵；受精率；试验

胚胎移植技术在家畜的育种繁育中应用很普遍，而且越来越商业化。为了增加纯种萨福克肉羊的数量，神木县从2010年起就引进该技术对萨福克肉羊进行胚胎移植。但是移植供体羊排卵数量少、受体受精率低是制约这项技术推广的瓶颈。为此我们分析了影响供体母羊超数排卵的诸多因素，比如有供体羊的体况、年龄、胎次、季节，前期的营养水平，超排处理选用的激素类型、剂量以及配种的方法等。在微量营养方面， 《动物营养学》、 《动物营养与代谢病防治》等教程描述，硒缺乏明显影响繁殖性能，对家畜繁殖的影响主要表现在公畜精液不良，母畜受胎率低下甚至不孕，妊娠畜会出现流产、早产、死胎等现象[1,2]。吴森研究，添加适量硒可使超数排卵试验羊黄体饱满，回收胚胎数和可利用胚胎数均显著提高，超数排卵情况较好。补硒在一定程度上提高了母羊的超排效果[3]。神木县属于硒缺乏地区，本次试验拟探讨补充外源硒和VE对超排的影响，在体况、年龄、胎次和季节、超排处理选用的激素及剂量等因素尽可能一致的情况下，给供体试验羊使用微量元素硒和VE注射液与不使用的羊对比，同时探讨选用内窥镜人工授精法与普通子宫角输精法的不同效果。

1 材料和方法

1.1 试验的时间和地点

本次试验从2013年的8月20日开始，在神木县尔林兔镇的神木县西农畜牧科技示范牧场（以下简称为一场）、瑞章农林牧发展有限公司（以下简称为二场）、神木县沃源农业有限公司（以下简称为三场）和中鸡镇的神木县旺升农民专业合作社（以下简称为四场）开展试验。

1.2 试验材料

1.2.1 供体羊

供体母羊的选择：选健康无病、有正常的产羔记录，膘情适中的2～4.5周岁的纯种萨福克母羊120只，所有供体羊120只全来自神木县西农畜牧科技示范牧场，将所选的供体羊随机分成4组投放到四大羊场由专人饲喂，以备试验用；配种公羊的选择：纯种萨福克公羊，要求2周岁以上，体况健壮，膘情较好，有丰富的配种经验。这次配种用的公羊均来自神木县西农畜牧科技示范牧场，共4只，由神木县西农畜牧科技示范牧场饲养，以备配种用。

受体羊1000只（实际施行胚移手术的955只），由进行试验的4个场提供，主要为肉羊杂交个体和购买的小尾寒羊杂交个体，体格较大，健康无病。

1.2.2 同期发情药物、微量元素和VE

同期发情所用药物：促卵泡素（FSH）、促排 3号（LRH-A3）由宁波第二激素厂生产；氯前列醇钠注射液（PG）由宁波三生药业有限公司生产；孕酮阴道海绵栓由西北农林科技大学研制。

微量元素硒和VE：用亚硒酸钠VE注射液（以下简称“硒-VE”），由哈尔滨摩天农科兽药有限公司生产。

1.3 试验方法

1.3.1 试验设计

试验设计为2因素4个重复（场）试验，将120只试验羊随机分成8组，分到4个羊场，即1-Ⅰ，1-Ⅱ；2-Ⅰ，2-Ⅱ；3-Ⅰ，3-Ⅱ；4-Ⅰ，4-Ⅱ。硒-VE因素试验：每场-Ⅱ为试验组，-Ⅰ为对照组，试验组补加硒-VE，对照组不补，其他条件一致；输精方法试验：1-Ⅰ，1-Ⅱ；2-Ⅰ，2-Ⅱ为试验组，采用内窥镜子宫角人工输精法，3-Ⅰ，3-Ⅱ；4-Ⅰ，4-Ⅱ为对照组，采用常规子宫颈口人工输精法。

1.3.2 试验期饲养管理

将选出进行胚胎移植的供、受体羊和其它的羊分开，逐只进行B超检查，采血化验布病，分别单独组群；每一场的供体母羊随机分成Ⅰ、Ⅱ组，每组15只，饲喂相同的粗饲料和精饲料。粗饲料是青贮玉米、沙打旺和紫花苜蓿干草，自由采食；精饲料（玉米78%、菜粕4%、豆粕12%、食盐1%）。每只羊补饲0.6kg/日。专人饲养，加强饲养管理。

1.3.3 供体羊补加硒-VE的处理

从2013年8月21日（配种前15d）开始，对每场的Ⅱ组供体羊（作为试验组）开始注射硒-VE，直至配种结束，剂量为每天3ml/只，方法是每天上午一次性分点肌肉注射。Ⅰ组供体羊作为对照组，不注射任何药物，其他饲养管理与试验组相同只。

1.3.4 对供体羊同期发情、超数排卵、配种以及胚胎收集

对每场的供体羊Ⅰ、Ⅱ组同时处理，一场是从8月22号开始肌注PG，每只1ml，以后每隔两天分别处理二场，三场，四场；注射PG后2d开始观察发情，并对发情情况做了记录；发情2d后开始置栓，12d后去栓，去栓后对正常发情的供体羊肌注FSH，每只2.5ml，每12h注射1次，连续用3d，然后进入配种阶段。供体羊发情8h后开始配种，每8h配种一次，对首次配种的发情母羊肌注促排3号，每只10μl，供体羊前期处理结果见表1、2。

表1 供体羊同期发情处理记录表

表2 供体羊超排处理记录表

供体羊发情后开始肌注促排3号，每只10μl，发情8h后开始配种，所有的供体羊都进行人工配种。为了比较内窥镜子宫角输入法与常规人工授精的效果，对一、二场的羊采用内窥镜法进行子宫角输精法配种，此种方法是在供体羊发情8h后通过手术只配种一次。具体操作是将配种羊保定在手术台上，局部麻醉，用手术刀在羊下腹部两浅窝距离中线2cm处各打开一个1～1.5cm的小口，内窥镜放入右边刀口里观察子宫角，用肠钳放入左边的刀口取出一侧的子宫角，用1ml的注射器将稀释好的精液注入子宫角0.5ml，输完后将子宫角放回原处，然后找出另一侧的子宫角用同样的方法输入后再放回原处，最后将伤口缝合；而三、四场的羊采用常规人工输精法配种。此法就是将配种羊保定在输精架上，利用羊的输精枪将装好的精液通过阴道进入子宫颈口输入子宫，用此种方法每只羊每8h配种一次，一个情期共配种3次。

供体羊在配种后6～6.5d开始冲胚，在冲胚手术前24h停食并做好手术前的准备。一场供体羊在9月17日手术冲胚，以后每隔两天进行其它场的冲胚手术。

1.4 数据处理

试验采用Excel软件对试验数据进行预处理，然后DPS7.05数据处理软件进行显著性检验[4]。试验数据和分析结果均以 “平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 补充硒-VE对胚移供体母羊排卵效果

此次试验原设计处理并冲胚的供体羊总共是120只，结果四场Ⅰ组有一只供体羊没有冲胚，所以实际冲胚胎的供体羊是119只，总回收卵1212枚。其中补充 “硒-VE”组供体羊60只，共回收卵689枚，每只平均11.5±3.5枚，且组内各场之间差异不显著（p＞0.05）；对照组供体羊59只，总回收卵523枚，每只平均8.9±2.9枚，且组内各场之间差异不显著（p＞0.05）。Ⅰ、Ⅱ组回收卵均数之间差异极显著（p＜0.01），详见表3。

表3 补硒对供体羊冲胚数的影响

2.2 内窥镜子宫角输精法与常规人工输精法效果比较

一、二场采用内窥镜子宫角输精法，总回收卵604枚，受精卵586枚，受精率97.02%，而三、四场用常规人工输精法，总回收卵608枚，受精卵502枚，受精率82.57%，二者差异显著（p＜0.05）。

3 讨论与结论

3.1 使用硒-VE对胚移供体母羊排卵的影响

影响母羊同期发情排卵的因素很多，遗传因素可能是最主要因素，不同品种羊的同期发情率差异较大，同一品种的同期发情主要受环境因素、激素水平和饲养管理等的影响[5-6]。在本试验中，使用硒-VE组供体母羊排卵率极显著高于不使用该注射液的，说明硒-VE对母羊卵巢和卵泡发育有着明显的影响，可能是由于硒和VE不仅提供了供体母羊作为营养所必需的微量元素、维生素，还影响到多种繁殖激素水平，进而影响了受体羊的排卵效果[7]。

3.2 输精部位和方法对供体母羊排卵受精率的影响

内窥镜子宫角输精与子宫颈口输精相比，输精次数只有1次，而子宫颈口输精2～3次；在同等密度和活力的条件下，子宫角输精的精液量比阴道子宫颈口输精少；由于精液被直接输入子宫角内，没有了精子通过子宫颈管特殊构造阻拦因素而减少输入精子，减少了精子在子宫内的运行距离和时间，缩短精子与卵子相遇距离和时间，促进和提高了精卵结合[8]，所以母羊卵子受胎率显著高于子宫颈口输精。内窥镜人工输精法节省了公羊；虽然操作麻烦一点，但输精次数减少，减少了工作量。

3.3 结论

在其他条件相同的情况下，使用硒-VE对提高萨福克供体母羊的超数排卵数量和胚胎发育有显著的效果，值得在生产中应用推广；使用内窥镜人工输精法供体母羊的卵子受精率显著高于常规子宫颈口人工输精法，在生产中也值得提倡。

[1]杨凤（主编）.动物营养学[M].北京:中国农业出版社,2009.

[2]张乃生（主编）.畜禽营养代谢病防治[M].吉林:金盾出版社, 2005.

[3]吴森,陈福财,王燕燕,等.补硒对萨福克羊血清激素水平和超排效果的影响[J].中国农学通报,2011,27（23）:32-35.

[4]唐启义.DPS数据处理系统[M].北京:科学出版社,2010.

[5]刘引区,李爱朵,赵建华,等.神木县萨福克羊胚胎移植效果分析[J].中国畜禽种业,2012,26（9）:55-56.

[6]邓凯伟,陈凤曾,等.影响受体羊同期发情调控的因素[J].河南畜牧兽医,2007,28（7）:10-11.

[7]陈福财,张磊,王燕燕,等.外源Se对胚胎移植受体母羊黄体发育和血清激素水平的影响[J].家畜生态学报,2012,33（4）:43-46.

[8]张剑,张银国,等.盘羊杂交一代羊子宫角输精对提高受胎效果的研究[J].2014（5）:23-25.

陕西省科技统筹创新工程计划项目资助（2014KTDZ02-01-01）。

李爱朵（1976-），女，陕西省神木县人，畜牧师，主要从事畜牧技术推广。

*通讯作者：李新春（1953-），男，陕西省佳县人，教授，主要从事养羊技术教学与科研推广工作。