228例新生儿血培养分离菌及耐药性分析

刘玉线 刘冬霞 张广清

广东省清远市妇幼保健院检验科，广东清远 511500

228例新生儿血培养分离菌及耐药性分析

刘玉线 刘冬霞 张广清

广东省清远市妇幼保健院检验科，广东清远 511500

目的 了解本院新生儿血培养的病原菌构成及耐药性情况，为指导临床合理应用抗菌药物，提供客观依据。 方法 采用法国生物梅里埃公司BacT/Alert 3D血培养仪进行血培养，所有菌株采用珠海黑马生物有限公司DL-96Ⅱ型全自动细菌鉴定仪进行鉴定及药敏试验。 结果 送检的4867例新生儿血培养阳性228例，阳性率4.68%。其中革兰阳性菌153株，占67.1%，并以表皮葡萄球菌为主，占42.1%；革兰阴性菌73株，占32.0%。药敏结果显示革兰阳性菌对青霉素G耐药率最高，对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁100.0%敏感；革兰阴性菌对碳青霉烯类抗菌药物均敏感。 结论 本院新生儿败血症病原菌以凝固酶阴性葡萄球菌为主，临床医生及时了解血培养的结果并采取针对性抗菌治疗，提高治愈率和控制交叉感染有重要意义。

血培养；新生儿败血症；病原菌；耐药性

新生儿败血症是细菌或真菌侵入新生儿血液循环，并在其中生长、繁殖、产生毒素，进而引发的全身性炎症反应，是新生儿时期的严重感染性疾病。新生儿期细菌感染性疾病，其治疗成功的关键在于尽早明确病原菌，尽早选用有效的抗生素。本研究通过对我院2013年1月～2014年6月228份新生儿败血症血培养病原菌和耐药性的回顾性分析，经统计将结果报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

2013年1月～2014年6月来自我院的新生儿科以及儿科住院送检的4867例血培养标本。

1.2仪器与试剂

采用法国生物梅里埃公司BacT/Alert 3D血培养仪及配套血培养瓶；珠海黑马生物有限公司DL-96Ⅱ型全自动细菌鉴定及药物分析仪进行菌株鉴定及药敏试验（采用微生物代谢技术及双岐矩阵分析进行微生物鉴定，微量肉汤稀释法进行MIC测定）。

1.3菌种分离与鉴定

4867例患儿在应用抗生素之前严格无菌抽取新生儿静脉血2～5mL注入BACT/ALERT3D血培养瓶，血液与增菌液1∶10，经血培养仪增菌培养，对仪器报警为阳性者转种血平板、麦康凯平板、沙保罗平板进行分离纯化，经35℃培养18～24h后，挑取生长菌落，革兰氏染色镜检，根据镜检结果选择相应的触酶或氧化酶试验，按迪尔96-Ⅱ系统操作鉴定和药敏试验。

1.4质控菌株

购自广东省临检中心的大肠埃希氏菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853。

2　结 果

2.1病原菌分离情况

4867例新生儿败血症血培养阳性228例，其中革兰阳性菌153例，占67.1%；革兰阴性菌73例，占32%；真菌2例。革兰阳性菌前三位是表皮葡萄球菌占42.1%，金黄色葡萄球菌占14.0%，溶血葡萄球菌占4.8%；革兰阴性菌中前三位是大肠埃希氏菌占8.3%，鲍曼不动杆菌属占6.1%，肺炎克雷伯杆菌占5.3%。见表1。

表1　228株病原菌的构成情况

2.2228例病原菌的耐药性分析

葡萄球菌对米诺环素、利奈唑胺、替考拉宁和万古霉素的100.0%敏感，对青霉素、头胞西丁、红霉素、复方新诺明、克拉霉素、诺氟沙星、阿奇霉素耐药率均大于30.0%，各种抗生素耐药率见表2。革兰氏阴性菌对头孢哌酮/舒坦、左氧氟沙星，亚胺培南，美罗培南，米诺霉素，阿米卡星的耐药率均较低，对氨苄青霉素耐药率较高（＞89.0%），耐药率详见表3。

3　讨论

新生儿败血症是新生儿期病原菌侵入血液循环并在其中生长繁殖及产生毒素而造成的全身感染[1]。尤其是低体重出生儿、早产儿较易感染，它有较高的发，病率和死亡率。在中国，虽然新生儿死亡率从1991年的33.1%下降到2001年的21.4%，但仍然保持较高的水平[2]。由于其临床表现无明显特异性，主要表现黄疸加重或退而复现、反应差、拒食、体温异常、呼吸暂停、腹胀、消化道出血、肺出血、多器官功能衰竭等表现，有时仅表现为其中1种，例如黄疸出现早，黄疸的程度高等[3]，因此必须尽早明确诊断，才能缩短治疗时间。随着全自动血培养仪的广泛应用，不但提高了血培养的阳性率，而且大大缩短了培养时间，因此血培养检查是诊断败血症的重要方法。

表2　葡萄球菌对常用抗生素耐药性[n（%）]

表3　革兰阴性杆菌对常用抗生素耐药性[n（%）]

本研究结果显示，引起新生儿败血症的病原菌以葡萄球菌为主，其次是肠杆菌属细菌[4]。凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）以上升趋势成为新生儿血培养的首位菌[5]，其中又以表皮葡萄球菌为主，占42.1%，与国内文献报道一致[6-7]。CNS是栖于皮肤和粘膜表面的条件致病菌，正常情况下不致病，但在免疫力降低或接受侵入性治疗如各种静脉置管、胃肠营养时其感染风险会增加，有文献报道，凝固酶阴性葡萄球菌可通过静脉滴注、气管插管等侵入性操作造成患儿血行感染[8-9]。清远市妇幼保健院新生儿科228例血流感染病原菌分析显示革兰氏阳性菌占67.1%（153/228），CNS112株，占49.1%。以前曾认为CNS为污染菌，致病性弱，但最近的研究表明，CNS具有胞外黏液物（ESS）等致病因子，有一定的致病能力[10]。同时凝固酶阴性葡萄球菌又是最常见的血培养污染菌，区分血培养中分离到的凝固酶阴性葡萄球菌是否是致病菌，需要结合实际情况分析判断。

药敏试验结果显示，葡萄球菌表现为多重耐药，对青霉素、头胞西丁、红霉素、复方新诺明、克拉霉素、阿奇霉素的耐药率均＞50.0%，葡萄球菌对左氧氟沙星、莫西沙星有较高的敏感性，未发现有耐万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、米诺环素的菌株，即万古霉素类对革兰阳性球菌仍然有优异的抗菌活性，其安全性也被临床证实。但国外已多次报道分离出耐万古霉素的菌株[11-12]，随着万古霉素临床广泛应用，自然诱导产生耐万古霉素的耐甲氧西林葡萄球菌的可能性越来越大[13-14]，应引起临床医生高度重视。本组调查资料显示，新生儿血培养阳性的阴性杆菌前三位是大肠埃希氏菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌，这些菌株对头孢哌酮/舒坦、左氧氟沙星、环丙沙星、亚胺培南、美罗培南、米诺霉素、阿米卡星表现了较低的耐药率，未检出对亚胺培南耐药的菌株。肺炎克雷伯杆菌对氨芐西林天然耐药，不宜选用。本研究虽然对左氧氟沙星耐药率低，因哇诺酮类药物对新生儿骨骼生长不利，不宜采用，米诺霉素、庆大霉素都不适宜于新生儿治疗。因此，在对革兰阴性菌引起的血行件感染患者进行治疗时，碳青霉烯类是应对B-内酰胺酶（ESBIs）菌株最稳定的抗菌药物。由于临床大量使用抗菌药物，特别是3代头孢菌素的滥用，肠杆菌产超广谱B-内酰胺酶菌株日益增加，造成多重耐药株检出率不断升高，因此及时进行病原菌的耐药检测，对指导临床合理用药、延缓细菌耐药性的产生十分重要[15]。

调查显示本院以凝固酶阴性葡萄球菌为常见致病菌，并呈多重耐药性。凝固酶阴性的葡萄球菌既是主要的病原菌，也是最常见的血培养污染菌，临床上要引起重视，注意鉴别。微生物实验室应根据血培养中细菌的分布及药物敏感性试验的特点及时报告给临床医生，这将给临床的早期诊断及合理用药提供试验依据，有利于减少耐药率的增加，提高患儿治愈率。同时，新生儿室应注意室内净化与消毒，在对新生儿进行各种治疗和护理时，尤其是侵入性治疗时，更要增强无菌操作观念，严格管理种种导管的清洁和消毒，清除感染灶，预防和减少新生儿败血症的发生，减少抗菌药物的使用，减少耐药菌株的产生。

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Pathogens and antibiotic resistance of lsolates from 228 cases newborn septicemia biood cultures

LIU Yuxian LIU Dongxia ZHANG Guangqing
Department of Laboratory,Qingyuan City Maternal and Child Health Hospital,Qingyuan 511500,China

Objective To investigate the pathogen constitutes of neonatal blood culture and drug resistance,provide an objective basis for clinical rational use of antimicrobial drugs. Methods France bioMérieux BacT/Alert 3D blood culture instrument was used for Blood culture,and DL-96Ⅱ-automatic bacterial identification system was used for bacterial identification and susceptibility testing. Results A total of 228 cases neonatal blood culture positive,the positive rate of 4.68%(228/4867).Gram-positive bacteria accounting for 67.1%(153/228),including staphylococcus epidermidis accounting(42.1%);Gram-negative bacteria(32.0%);Susceptibility results showed Gram-positive bacteria has the highest resistant rate to penicillin G,and has 100.0% sensitive rate for vancomycin,linezolid,teicoplanin;Gramnegative bacteria were sensitive to carbapenems antibiotics. Conclusion Hospital coagulase-negative staphylococci as the principal for our hospital neonatal septicemia pathogenic bacteria,clinicians keep abreast of the results of blood cultures and take appropriate antimicrobial therapy,is important for improve the cure rate and control of cross infection.

Blood culture;Neonatal sepsis;Pathogens;Resistance

R446.5

B

2095-0616（2015）09-123-04

（2015-01-30）