循环肿瘤细胞与鼻咽癌临床病理参数的相关性研究

伍 勇 翁成荫 方喜生 曹小飞 李宝秀 毛海波 刘 霞 关明媚 刘国龙

广州医科大学附属广州市第一人民医院肿瘤科，广东广州 510180

循环肿瘤细胞与鼻咽癌临床病理参数的相关性研究

伍 勇 翁成荫 方喜生 曹小飞 李宝秀 毛海波 刘 霞 关明媚 刘国龙▲

广州医科大学附属广州市第一人民医院肿瘤科，广东广州 510180

目的 分析外周血循环肿瘤细胞与鼻咽癌临床病理参数的相关性，探讨其临床意义。方法 采用莱尔生物循环肿瘤细胞检测技术检测循环肿瘤细胞在63例初治鼻咽癌和20例正常人中的表达情况，分析循环肿瘤细胞的表达差异及与临床病理参数的关系。 结果 鼻咽癌患者中循环肿瘤细胞阳性率为55.6%，而正常人中循环肿瘤细胞阳性率为0，两者差异有统计学意义（x2=19.213，P＜0.05）。在M0期和M1期患者中，循环肿瘤细胞阳性率分别为48.1%和90.9%，差异有统计学意义（x2=6.746，P＜0.05）。在EBV-DNA阴性的鼻咽癌患者中，循环肿瘤细胞阳性率为45.5%，而在EBV-DNA阳性的患者中阳性率为78.9%，两者差异有统计学意义（x2=6.029，P＜0.05）。性别、年龄、病理类型、T分期、N分期、总分期和VCA-IgA不同的各组中，循环肿瘤细胞阳性率差异无统计学意义。 结论 循环肿瘤细胞与鼻咽癌转移和EBV-DNA密切相关，可用于鼻咽癌病情的评价。

循环肿瘤细胞；鼻咽癌；临床病理参数

循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTC）是指由肿瘤原发灶或转移灶脱落进入血液循环系统的肿瘤细胞[1]。近年来研究表明，循环肿瘤细胞有助于肿瘤转移灶的形成[2]。循环肿瘤细胞在血液循环中的比例极低，每108～109个外周血细胞中才可能有1个[3]。在肺癌[4]、乳腺癌[5]、结直肠癌[6]、胃癌[7]、胰腺癌[8]等实体肿瘤中，循环肿瘤细胞已被发现对肿瘤的辅助诊断、疗效评价、复发转移监测和预后判断等有积极的临床指导意义[9]。但循环肿瘤细胞在鼻咽癌患者中的表达情况及其临床病理关系报道少见。因此，本研究旨在分析外周血循环肿瘤细胞与鼻咽癌临床病理参数的相关性，探讨其临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料

将广州市第一人民医院肿瘤科2013～2014年收治的63例鼻咽癌患者纳入研究，其中男47例，女16例，年龄26 ～ 77岁，平均51岁，病理类型为分化型非角化性癌者6例，未分化型非角化性癌者57例。临床分期采用鼻咽癌2008分期标准[10]，Ⅰ期1例，Ⅱ期7例，Ⅲ期21例，Ⅳa期23例，Ⅳb期11例。经患者知情同意后，在治疗前检测其循环肿瘤细胞，同时检测EB病毒DNA（EBV-DNA）和衣壳抗原IgA（viral capsid antigen-IgA，VCA-IgA）。Ⅰ期患者接受根治性放疗，Ⅱ-Ⅳa期患者接受根治性的联合铂类的同期放化疗（鼻咽部和颈部阳性淋巴结剂量70Gy/7周；颈部阴性淋巴结给予预防量50Gy/5周）。Ⅳb期患者接受顺铂联合5-氟尿嘧啶为主的姑息性化疗，如转移灶完全缓解则接受根治性放疗。另选择性别与年龄构成与上述63例患者差异无统计学意义的20例正常人作为对照，检测循环肿瘤细胞。

1.2循环肿瘤细胞检测方法

采用莱尔生物循环肿瘤细胞检测技术[11]。应用真空采血管采集肘正中静脉血，为防止静脉穿刺过程中上皮细胞污染，前2mL血不采集，采集此后的3.2mL静脉血于ACD抗凝管中。采集的血液在48h内去除血浆，裂解液去除红细胞，磁珠孵育混匀去除白细胞，分离液分离富集肿瘤细胞。使用CD45抗体进行细胞免疫荧光检测，8号着丝粒探针进行荧光原位杂交。在荧光显微镜下计数，二倍体信号或CD45阳性为正常细胞，大于等于三倍体且CD45阴性为异常细胞。根据试剂盒的说明书，≥2个异常细胞判断为循环肿瘤细胞阳性。

1.3统计学方法

应用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析。各组资料的比较采用x2检验和Fisher's精确概率检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1鼻咽癌与正常人中循环肿瘤细胞的表达差异

鼻咽癌患者中循环肿瘤细胞阳性率为55.6%，而正常人中循环肿瘤细胞阳性率为0，两者差异有统计学意义（x2=19.213，P＜0.05）。

2.2循环肿瘤细胞与性别、年龄、病理类型及分期的关系

在M0期和M1期患者中，循环肿瘤细胞阳性率分别为48.1%和90.9%，差异有统计学意义（x2=6.746，P＜0.05）。性别、年龄、病理类型、T分期、N分期和总分期不同的各组中，循环肿瘤细胞阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3循环肿瘤细胞与EBV-DNA、VCA-IgA的关系

在EBV-DNA阴性的鼻咽癌患者中，循环肿瘤细胞阳性率为45.5%，而在EBV-DNA阳性的患者中阳性率为78.9%，两者差异有显著性意义（x2=6.029，P＜0.05）。VCA-IgA阴性和阳性的患者中循环肿瘤细胞阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。在VCA-IgA中位值4.17处将患者分为VCAIgA≤4.17组和VCA-IgA＞4.17组，两组间循环肿瘤细胞阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表1　循环肿瘤细胞与性别、年龄、病理类型及分期的关系

表2　循环肿瘤细胞与EBV-DNA、VCA-IgA的关系

3　讨论

临床分期是评价肿瘤的基本方法，但主要依靠影像学。近年来，随着分子靶向治疗的兴起，越来越多的分子标记物被用来对肿瘤进行疗效预测和预后评价[12]。循环肿瘤细胞来自肿瘤原发灶或转移灶，具有和肿瘤一样的生物学特性，逐渐成为肿瘤的辅助评价指标[13]。监测外周血中循环肿瘤细胞值变化，可评价化疗方案疗效[14]。同时，由于循环肿瘤细胞易于获取，不需要进行肿瘤活检，可用于检测肿瘤的基因状态，指导靶向治疗，被称为“液体活检”[15]。

在本研究中，鼻咽癌患者中循环肿瘤细胞阳性率为55.6%，而正常人中循环肿瘤细胞阳性率为0，两者差异有统计学意义（x2=19.213，P＜0.05）。这说明本研究使用的循环肿瘤细胞检测方法有较好的特异性，在正常人中检测不到。蔡清清等应用改良免疫磁珠富集联合免疫荧光细胞化学技术检测鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞，20例正常人的外周血中未检测到CK8/18，63例鼻咽癌患者的外周血检测到CK8/18，阳性率为82.9%（63/76，P＜0.05）[16]。此结果与本研究类似，阳性率有差异在于检测方法不同。本研究的检测方法使用磁珠富集肿瘤细胞，并结合了免疫荧光染色和荧光原位杂交两种技术，不受上皮标志物表达所限，可提高循环肿瘤细胞检出的敏感性和特异性。

本研究发现，在M0期和M1期患者中，循环肿瘤细胞阳性率分别为48.1%和90.9%，差异有统计学意义（x2=6.746，P＜0.05）。由于循环肿瘤细胞是脱落进入血液循环系统的肿瘤细胞，因此极易随着血液循环进入其他器官，导致肿瘤转移。在乳腺癌患者中发现，循环肿瘤细胞可以早期预测肿瘤的转移[17]。肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞的数量与肿瘤转移及预后有关，循环肿瘤细胞的数量≥5时，可能肿瘤更具转移倾向，预后更差，患者生存期更短[18]。因此，在循环肿瘤细胞阳性的鼻咽癌患者中，应高度怀疑肿瘤转移的可能性，完善其他器官的相关检查，并考虑加强化疗力度。

本研究还发现，在EBV-DNA阴性的鼻咽癌患者中，循环肿瘤细胞阳性率为45.5%，而在EBVDNA阳性的患者中阳性率为78.9%，两者差异有显著性意义（x2=6.029，P＜0.05）。EB病毒感染与鼻咽癌关系密切。EBV-DNA可用于鼻咽癌的早期诊断和分期，并可监测鼻咽癌的复发和转移，同VCAIgA相比，具有更高的敏感性和特异性[19]。循环肿瘤细胞和EBV-DNA相关，提示循环肿瘤细胞与鼻咽癌的病程进展密切相关，对鼻咽癌的诊断和复发转移监测具有临床价值。

综上所述，循环肿瘤细胞与鼻咽癌转移和EBV-DNA密切相关，可用于鼻咽癌病情的评价。由于鼻咽癌患者生存期较长，对于循环肿瘤细胞的预后预测价值还有待以后随访进一步验证。

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Correlation of circulating tumor cells with clinicopathological parameters in patients with nasopharyngeal carcinoma

WU Yong WENG Chengyin FANG Xisheng CAO Xiaofei LI Baoxiu MAO Haibo LIU Xia GUAN Mingmei LIU Guolong
Department of Oncology,Guangzhou Medical University Affiliated Guangzhou First People's Hospital,Guangzhou 510180,China

Objective To analyze the correlation of circulating tumor cells(CTCs)with clinicopathological parameters in patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC),and explore its clinical significance. Methods CTCs were detected in 63 non-treated NPC patients and 20 normal people using CyttelBio CTC detection technology.The differential expression of CTCs and relationship between CTCs and clinicopathological parameters were analyzed. Results The positive rate of CTCs in NPC patients was 55.6%,while it is 0 in normal people,and the difference was statistically significant(x2=19.213，P＜ 0.05).In M0 and M1 NPC patients,the positive rate of CTCs was 48.1% and 90.9% respectively,with significant difference (x2=6.746，P＜ 0.05).In NPC patients with negativeEBV-DNA,the positive rate of CTCs was 45.5%,while in patients withpositive EBV-DNA,the rate was 78.9%,and the difference was statistically significant(x2=6.029，P＜ 0.05).In groups with differentgender,age,histological type,T stage,N stage,overall stage or VCA-IgA,the positive rates of CTCs had no significant difference. Conclusion CTCs are closely correlated with NPC metastasis and EBV-DNA,and can be used to evaluate NPC.

Circulating tumor cells;Nasopharyngeal carcinoma;Clinicopathological parameters

R739.63

A

2095-0616（2015）09-17-04

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（2015-04-10）