乳腺导管内癌分子分型及其与组织学分级、Ki-67指数的相关性研究

江金华 严汀华 马宗明 兰启防

乳腺导管内癌(DCIS)为乳腺导管上皮组织的恶性增生，且局限于导管的基底膜内，未侵犯间质，属于原位癌的范畴。乳腺导管内癌占乳腺癌病例的20%～30%［1］，10 年生存率约 88%［2］。DICS 具有发展成浸润性乳腺癌的趋势，但不是必然的转归［3］。不同类型DCIS的生物学行为明显不同，有的可长期保持“原位”，有的则可发展为浸润性癌［4］，这是否与DCIS分子分型相关还不清楚。Ki-67是1种能识别存在于增殖细胞核基质内的核蛋白，定位于第10号染色体上。它的功能和细胞有丝分裂有关，与肿瘤细胞的周期性变化以及肿瘤的预后密切相关［5-7］。本研究回顾性分析了57例DCIS患者临床、病理资料，探讨DCIS的分子分型及其与组织学分级、Ki-67指数的相关性。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院2011年1月至2014年6月收治的女性乳腺癌患者，所有病例均经术后病理检查确诊，对肿瘤＞2 cm者均经多次(8～10次)病理取材送病检确诊。乳腺导管内癌组57例，年龄25～87岁，平均50.3岁，肿瘤直径0.2～6 cm，平均直径2.4 cm。浸润性导管癌组160例，年龄28～78岁，平均年龄50.5岁。

1.2 试剂

雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)和Ki-67抗体、免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 检测方法

1.3.1 免疫组化检测及结果判定 肿瘤标本采用10%中性甲醛溶液固定，石蜡包埋连续切片4 μm厚，HE染色确定组织学进行分级，采用免疫组化SP法检测乳腺癌ER、PR、HER-2、Ki-67。Ki-67阳性染色定位于细胞核，按视野中阳性细胞所占的比例进行计数，以任意5个高倍镜视野中阳性细胞所占比例的平均值定义为阳性细胞百分比并作为评定依据。ER和PR阳性判断标准:肿瘤细胞无细胞核棕黄染色或＜1%的细胞核较弱棕黄染色为阴性，＞1%的细胞核棕黄染色则为阳性。HER-2阳性判断标准:细胞膜棕黄染色为阳性。无细胞染色或＜10%的细胞膜弱染色为(－);＞10%的细胞膜部分弱染色为(+);＞10%的细胞膜完全弱到中等染色为(++);＞10%的细胞膜完全强染色为(+++)。HER-2(++)的病例进一步进行FISH检测，HER-2(+++)者定义为阳性。

1.3.2 组织学分级 以瘤细胞的核级别为基础，参考瘤细胞的坏死和极化现象，将DCIS分为低、中、高级别三级［8］。低级别:核形态单形性、大小一致及分布规律，核仁及核分裂像罕见，无瘤细胞坏死，常有细胞极化现象;中级别:核有轻到中度多形性，大小略有差异，核仁及核分裂像可见，可有瘤细胞坏死，偶见细胞核极化现象;高级别:核呈明显多形性，常见瘤细胞坏死，无细胞极化现象。

1.4 统计学处理

应用SPSS 13.0统计软件分析，计数资料以%表示，采用χ2检验;计量资料采用s表示，组间对比采用配对t检验，非正态分布资料或方差不齐，采用秩和检验。以P＜0.05为差异显著，具有统计学意义。

2 结果

2.1 DCIS分子分型分布情况

根据2013年St Gallen共识乳腺癌分子分型判定标准，57例 DCIS分为 Luminal A、Luminal B、Her-2过表达、三阴性型四型，其中Luminal A型26例，所占比例最高 45.61%;其次为 Luminal B型 17例，占29.82%，Luminal型共占75.43%;HER-2 过表达型 11例(19.30%);三阴性型最少占5.27%。浸润性导管癌中Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型及三阴性型分别占 26.25%、36.88%、21.24% 和15.63%。DCIS组Luminal A型所占比例最高，与浸润性导管癌中Luminal A相比差异非常显著(P=0.003)，具有统计学意义;三阴性型所占比例最小，与浸润性导管癌中三阴性型相比差异显著(P=0.019);而Luminal B型、HER-2过表达型所占比例相当，没有差异，见表1。

表1 DCIS与浸润性导管癌的分子分型分布情况(例，%)

2.2 DCIS分子分型与组织学分级的关系

57例DCIS中Her-2过表达型及三阴性型乳腺癌全部为高级别(100.00%);DCIS中Luminal B型所占比例低、中级别6例，高级别11例(64.71%);DCIS中Luminal A型所占比例低、中级别19例，高级别7例(26.92%)，见表2。高级别在Luminal A型DCIS中所占比例较低，与Luminal B型、Her-2过表达型及三阴性型相比差异显著(P＜0.001)。

表2 DCIS分子分型与组织学分级的关系

2.3 DCIS分子分型与Ki-67指数的关系

Luminal A型、Luminal B型DCIS的Ki-67指数低于HER-2过表达型与三阴性型DCIS的Ki-67指数。其中Luminal B型、HER-2过表达型和三阴性型Ki-67指数均显著高于Luminal A型(P＜0.001)，而Luminal B型、HER-2过表达型和三阴性型乳腺癌三者间的Ki-67指数比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 DCIS分子分型与Ki-67指数的关系(s)

表3 DCIS分子分型与Ki-67指数的关系(s)

其他型Ki-67指数与Luminal A型比较，＊＊为P＜0.01。

?

3 讨论

肿瘤存在异质性即，同一组织学类型、分化程度相同的肿瘤对同一药物的敏感性不同。DCIS是一类非全身性的导管局部病变，为浸润性导管癌的前驱病变，不同类型的DCIS的生物学行为明显不同，临床上需要反映其局部复发或进展为浸润性癌的危险性的生物学指标。DCIS的分子分型与DCIS的疾病转归、患者预后和治疗反应密切相关，已成为DCIS领域的热点。

不同的研究对乳腺癌各分子亚型所占比例的报道不一，浸润性导管癌中50% ～67%的病例表现为Luminal型［9］。袁中玉等［10］对 1 280 例乳腺癌进行分析，Luminal型、HER-2过表达型及基底细胞样型分别占55.9%、20.9%、23.2%。本研究 160例浸润性导管癌中Luminal型、HER-2过表达型及三阴性型分别占63.13%、21.24%、15.63%。而 DCIS 中 Luminal型、Her-2过表达和三阴性型分别占75.43%，19.30%和5.27%。尤其是Luminal A和三阴性型差异极显著。

Ki-67是1种与增殖细胞相关的核抗原，存在于增殖细胞的G1、S、G2和M期中，而在G0期不表达，主要用于判断细胞增殖活性，其表达与多种恶性肿瘤的分化程度、浸润转移及预后密切相关［11］。Ki-67的高表达往往预示肿瘤患者的不良预后［12］。本研究发现，Ki-67在不同分子分型DCIS间的表达存在差异，其中LuminalA型DCIS中Ki-67表达最低，预后效果较好，而Luminal B型，Her-2过表达型和三阴性DCIS中Ki-67指数相对较高，预后较差。

乳腺癌病理组织学分类中按细胞核形态将DCIS分为低、中、高三个级别，不同级别的DCIS可能具有不同的遗传学起源和发生背景，DCIS具有进展为浸润性癌的趋势。Prasad等［13］研究提示高核分级和粉刺型的DCIS侵袭能力强，易向间质浸润，也易发生淋巴结转移。本研究57例DCIS低、中级别在Luminal型尤其是Luminal A型中所占比例较高，Her-2过表达型及三阴性乳腺癌全部为高级别，提示Her-2过表达型及三阴性DCIS恶性程度相对较高，预后较差。另外，高级别DCIS与浸润性导管癌的分子分型具有一致性，可能是浸润性导管癌的前驱病变之一。

因此，本研究表明大部分DCIS患者为Luminal型，Luminal型(Luminal A型)为低级别DCIS，且Ki-67指数较低，结果表明Luminal型(Luminal A型)预后较好，而HER-2过表达型及三阴性型全部为高级别乳腺导管内癌，与浸润性导管癌的分子分型具有一致性，Ki-67指数较高，预示其发展为浸润癌的风险较高。

［1］余海云，李文萍，王 颀，等.城市群体妇女2006-2011年乳腺癌筛查效果评估〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2013，20(12):894-897.

［2］Kerlikowske K.Epidemiology of ductal carcinoma in situ〔J〕.J Natl Cancer Inst Monogr，2010，2010(41):139-141.

［3］龙泉伊，李宏江.乳腺导管内癌的诊断与治疗〔J〕.华西医学，2011，26(7):1000-1002.

［4］徐兵河.乳腺癌〔M〕.北京:北京大学医学出版社，2005:132.

［5］周道平，王 彬，邢晓皖.Ki-67、p53蛋白在乳腺癌组织的表达及临床意义〔J〕.实用肿瘤杂志，2009，24(2):136-138.

［6］贾 实，张文海，李建一，等.乳腺癌Ki-67和 p53表达分析及其意义〔J〕.中国医科大学学报，2010，39(12):1061-1063.

［7］杨雪琴，李 雁.Ki67在乳腺癌的研究进展〔J〕.武汉大学学报，2011，32(6):852-856.

［8］龚西騟，丁华野.乳腺病理学〔M〕.北京:人民卫生出版社，2009:242-243.

［9］赵 晶，付 丽.乳腺癌的分子分型〔J〕.中华乳腺病杂志(电子版)，2009，3(2):195-203.

［10］袁中玉，王树森，朱美琴，等.不同分子亚型乳腺癌的临床特征及预后〔J〕.中华肿瘤杂志，2008，30(6):456-461.

［11］张保宁.乳腺肿瘤学〔M〕.北京:人民卫生出版社，2013:181.

［12］Potemski P，Pluciennik E，Bednarek AK，et al.Ki-67 expression in operable breast cancer:a comparative study of immunotaining and a real-time RT-PCR assay〔J〕.Pathol Res Pract，2006，202(7):491-495.

［13］Prasad ML，Osborne MP，Giri DD，et al.Microinvasive carcinoma(T1mic)of the breast:clinicpathologic profile of 21 cases〔J〕.Am J Surg Pathol，2000，24(3):422-428.