正交试验优化咽扁宁颗粒提取工艺*

刘增平，李义梅，姬萍，闫小鹏，王宁，杨振萍

（1.陕西省延安市药品检验所，陕西延安716000；2.陕西省延安市中医医院，陕西延安716000）

正交试验优化咽扁宁颗粒提取工艺*

刘增平1，李义梅1，姬萍1，闫小鹏1，王宁1，杨振萍2

（1.陕西省延安市药品检验所，陕西延安716000；2.陕西省延安市中医医院，陕西延安716000）

目的优化咽扁宁颗粒剂的提取工艺。方法采用L9（34）正交试验法，以绿原酸为考察指标，考察不同加水量、提取时间、提取次数对绿原酸含量及干膏得率的影响。结果提取次数对处方中绿原酸的含量和干膏得率影响最大；最佳提取工艺为加水8倍，提取3次，每次1.5 h。结论优化的提取工艺稳定可行、重复性好，可用于该制剂的大规模生产。

咽扁宁颗粒；绿原酸；干膏得率；正交试验；提取工艺

咽扁宁颗粒（陕药管制字［2001］第3676号）是延安市中医医院制剂产品，由金银花、山豆根、地黄、麦冬等组方，功效为清热解毒、利咽生津、消肿止痛，适用于肺经实热、热毒蕴结咽系，症见咽喉红肿疼痛，或乳蛾肿大、咽干口干、声音嘶哑、咽痒咳嗽，或急慢性咽炎、扁桃体炎、咽峡炎见上述证候者，含服该颗粒剂治疗急性咽喉炎疗效更佳［1］。咽扁宁颗粒制备方法为水提取，浓缩收膏制粒。笔者采用正交试验，考察了加水量、提取次数以及提取时间对咽扁宁颗粒有效性成分绿原酸含量及干浸膏得率的影响，以确定最佳提取工艺。

1 仪器与试药

LC-20A型高效液相色谱仪（包括自动进样器、柱温箱、工作站，日本岛津公司）；BSA124S型电子分析天平（德国赛多利斯公司）。绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110753-201314）；试验用药材采购自延安市中医医院中药房（安徽亳州永刚中药饮片厂有限公司），由我所中药室鉴定，质量均符合2010年版《中国药典（一部）》有关规定；纯化水（自制），乙腈为色谱纯，其余制剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 绿原酸含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（12∶88）；检测波长：327 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：30℃。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2 000。

2.1.2 溶液制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加50%甲醇制成83.85 μg/mL的对照品溶液。精密称取干浸膏粉0.5 g，置锥形瓶中，加入50%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷后补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取不含金银花的干浸膏粉0.5 g，同法制备阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

空白干扰试验：精密吸取2.1.2项下3种溶液各10 μL，分别进样，记录色谱图（见图1）。可见，样品中的其他组分对绿原酸的测定无干扰。

线性关系考察：取2.1.2项下的对照品溶液，分别进样1，2，4，6，8，10 μL，以进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=3.4×107X-4 886.1，r=0.999 9（n=6）。结果表明，绿原酸进样量在0.083 8～0.838 5 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：吸取同一对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL，测定峰面积。结果绿原酸峰面积的RSD为1.22%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别于0，4，8，12，16，24 h时依法测定。结果峰面积的RSD为1.35%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品6份，精密称定，依法制备供试品溶液并测定。结果绿原酸平均含量为2.659 mg/g，RSD=0.90%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品6份，加入一定量的对照品溶液，混合进样测定。结果见表1。

2.2 干浸膏粉得率测定

将咽扁宁颗粒制剂处方缩小10倍，取9等份，药材用水冲洗2次，尽量沥干水分，加2倍水浸泡30 min，按表2中条件采用L9（34）正交表安排试验提取，提取液（室温）静置12 h以上，滤过，取上清液减压浓缩至恒重，精密称量浓缩粉的质量，得干浸膏粉质量，计算得率。

图1 高效液相色谱图

表1 绿原酸加样回收试验结果（n=6）

表2 正交试验因素表

2.3 正交试验设计与结果

咽扁宁颗粒剂主要药效成分为绿原酸，绿原酸在25℃水中溶解度为4%，热水中溶解度更大，易溶于乙醇及丙酮，极微溶于醋酸乙酯。考虑到制剂生产成本问题，以热水为溶剂提取较合理。设计以提取次数（因素A）、提取时间（因素B）、加水量（因素C）为考察因素，以制剂处方中君药金银花的主要成分绿原酸含量和总浸膏得率为考察指标，采用L9（34）正交表进行试验。因素水平见表2，正交试验设计及结果见表3和表4。由表3和表4可见，直观分析，影响制剂中绿原酸提取量的因素A＞B＞C，即提取次数＞提取时间＞加水量，其中提取次数影响最大，最佳工艺为A3B2C1；影响总浸膏得率的因素为A＞C＞B，即提取次数＞加水量＞提取时间，其中提取次数影响最大，最佳工艺为A3B1C2。方差分析，提取次数对绿原酸的得率有显著影响。咽扁宁颗粒剂的有效性指标为绿原酸，因此确定最佳提取工艺为A3B2C2，即加水8倍，提取3次，每次1.5 h。

2.4 验证试验

按咽扁宁颗粒剂处方放大100倍称取药材3份，按照优选工艺提起、浓缩收膏，以进一步验证工艺的合理性。结果见表5。

表3 L9（34）正交试验设计与结果（n=3）

表4 正交试验结果方差分析表

表5 最佳工艺验证试验结果

3 讨论

咽扁宁颗粒剂由12味药材组方。方中君药金银花具有清热解毒、疏散风热功效，临床用于治疗痈肿疔疮，外感风热、温病初起以及热毒血痢［2］。现代药理学研究表明，金银花具有抗菌抗病毒、抗炎解热作用，可提高机体免疫力，且具有保肝作用［3］。金银花化学成分复杂，已鉴别出的就有70多种［4］，主要有有机酸、挥发油、黄酮类、微量元素等。有机酸中的绿原酸和异绿原酸是公认具有抗菌抗病毒的活性成分，金银花在体外、体内对革兰阳性菌、阴性菌均有不同程度的抑制和杀灭作用，黄酮类及挥发油也有一定的抗菌活性［5-6］。关于金银花中绿原酸的提取，屈景年等［7］采用乙酸乙酯萃取，并证明其抗金黄色葡萄球菌活性优于大肠杆菌。向福等［8］以绿原酸为相应值设计响应面，优化金银花醇浸水体工艺，其最佳工艺为pH=4.5、提取时间为25 min、浸析乙醇体积分数为65%，该条件下绿原酸的得率可达6.856%。武达等［9］采用正交试验法考察诸因素对金银花各种提取工艺的影响，优选其提取工艺的最佳条件。正交试验优选制剂的提取工艺［10-11］，效果良好。本试验中以绿原酸和总浸膏得率为考察指标，考察了不同加水量、提取时间、提取次数对绿原酸含量及干膏得率的影响，结果表明，最佳提取工艺为加水8倍，提取3次，每次1.5 h。经试验验证，该方法稳定性好，适合于大规模生产。

［1］咽扁宁颗粒剂含化治疗急性咽喉炎疗效观察［J］.陕西中医，2011，32（12）：1 578-1 579.

［2］高学敏.中药学［M］.北京：中国中药出版社，2007：107.

［3］杨晓杰.金银花的成分及药理作用分析［J］.世界最新医学信息文摘，2015，15（24）：176-177.

［4］李娜，阮文辉，杨莹莹，等.金银花成分分析研究进展［J］.科技情报开发与经济，2011，21（18）：178-181.

［5］郭朝晖，周学清，蒋生祥.甘肃金银花中绿原酸含量与抑菌作用的试验考察［J］.时珍国医国药，2005，16（12）：1 258-1 259.

［6］侯家玉.中药药理学［M］.北京：中国中医药出版社，2002：54-55.

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［8］向福，付建强，孙白珍，等.响应面法对金银花叶中绿原酸提取工艺的优化［J］.湖北农业科学，2015（15）：3 727-3 734.

［9］武达，关澍男.金银花提取工艺研究［J］.黑龙江医药，2005，18（2）：38-40.

［10］常晓亮，王晓娟，雷国莲，等.正交试验法优选清咽颗粒剂的提取工艺［J］.陕西中医学院学报，2008，31（1）：55-56.

［11］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：488-489.

Optimization of Extraction Technology for Yanbianning Granules by Orthogonal Test

LiuZengping1，Li Yimei1，Ji Ping1，Yan Xiaopeng1，WangNing1，Yang Zhenping2
（1.Yan′an Institute for Drug Control，Yan′an，Shaanxi，China716000；2.Yan′an Hospital of Traditional Chinese Medicine，Yan′an，Shaanxi，China716000）

ObjectiveTo optimize the extraction technology for Yanbianning granules，and to determine the best extraction technology. MethodsThe chlorogenic acid，which was the effective component of Yanbianning granules，was used as the index.L9（34）orthogonal experiment table was used to carry on the test.The effects of different amount of added water，extraction time and extraction times on the content of chlorogenic acid and total dry extract yield were studied.ResultsThe extraction times had the most influence on the content chlorogenic acid.The optimum extraction techmology of Yanbianning granules was as follows：8-fold water，extracting for 3 times，lasting 1.5 hours each time.ConclusionThe extraction technology is stable with good reproducibility，and can be used in the large-scale production of the Yanbianning Granules.

Yanbianning Granules；chlorogenic acid；dry extract yield；Orthogonal Test；extraction technology

TQ461；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0036-03

2015-02-08；

2015-03-18）

*陕西省延安市2012年科技计划项目，项目编号：2012KW-16。