防己茯苓汤对急性肾损伤大鼠肾功能的影响*

徐静琳　郑寿涛

（浙江省台州市第一人民医院，浙江台州318020）

·研究报告·

防己茯苓汤对急性肾损伤大鼠肾功能的影响*

徐静琳郑寿涛

（浙江省台州市第一人民医院，浙江台州318020）

目的观察防己茯苓汤对急性肾损伤大鼠肾功能的影响。方法用36只小鼠按随机数字表法分成3组，每组12只，均为雄性，分别为正常组、模型组、防己茯苓汤组，正常组灌注0.9%氯化钠注射液，其他两组先进行模型制备，然后模型组腹腔内注射0.9%氯化钠注射液，防己茯苓汤组腹腔内注射防己茯苓汤，观察一般情况和24 h生存率情况，观察在12 h、24 h、36 h、48 h在血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、尿素（SU）、血内生肌酐清除率（CCr）变化情况。结果在24 h生存率上，正常组为100%，模型组为41.67%，防己茯苓汤组生存率为66.67%。正常组12 h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、中性粒细胞凝胶酶相关脂质运载蛋白（BQJO）、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、胱抑素C（CysC）上差异无统计学意义（P＞0.05）；模型组和防己茯苓汤组12 h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC指标上两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）；而模型组和防己茯苓汤组在24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC两两比较差异有统计学意义（P＜0.05），而在12 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论防己茯苓汤具有保护急性肾损伤肾功能的作用，在临床上可作为保护肾功能的良好措施。

防己茯苓汤急性肾损伤大鼠肾功能

急性肾损伤在生理病理机制上是多方面的，目前主要集中在缺血再灌注肾损伤学说、细胞代谢障碍损伤学说和肾血流动力学说等。这其中以缺血再灌注肾损伤学说贯穿始终。缺血后灌注不足就会造成缺氧，时间较长超出肾脏负荷则出现低氧情况，肾脏会出现低氧损害性变化，出现细胞变性、坏死，近端和皮髓交界处的肾小管上皮细胞损伤加重，最终造成肾衰竭［1］。本次研究通过观察中医药在防治急性肾损伤对肾功能的保护作用，以期更好治疗该疾病。现报告如下。

1　材料与方法

1.1动物随机选取36只SD大鼠为研究对象，均为雄性，平均体质量为（160±10）g，均购自中山大学实验动物中心，合格证编号为2013034B，均分笼饲养，自由饮水进食，实验室温度控制在22℃左右。

1.2药物和试剂防己茯苓汤药物组成：防己10 g，黄芪20 g，桂枝10 g，茯苓10 g，甘草6 g。均对药材进行鉴定后水煎2次，合成滤剂浓缩为2 g/mL后在-10℃环境保存。试剂有检测肾功能指标的专门试剂盒，由南京建成生物科技有限公司提供，肾功能指标参考血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、尿素（SU）、血内生肌酐清除率（CCr），均抽取大鼠双前腿静脉血进行检测，检测均按照说明书检查。

1.3分组和造模将36只大鼠按随机数字表法分为3组，分别为正常组、模型组和防己茯苓汤组，每组12只。模型组和防己茯苓汤组则腹腔内注入5 mg/kg脂多糖，正常组腹腔内按5 mg/kg注入0.9%氯化钠注射液，制备成急性肾损伤模型，7 d后正常组和模型则均注入等量0.9%氯化钠注射液，防己茯苓汤组则注入20 g/（kg·d）防己茯苓汤，每次间隔12 h。

1.4观察指标和方法观察各组大鼠在试验期间精神、呼吸、饮食等一般情况，统计在腹腔内注射药物后24 h大鼠死亡情况。对所有存活的大鼠检测肾功能指标，包括中性粒细胞凝胶酶相关脂质运载蛋白（BQJO）、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、胱抑素C（CysC）、Scr、BUN、UA、SU、Ccr，分别检测治疗12 h、24 h、36 h、48 h在以上指标变化情况。在以上时间点将大鼠麻醉后取主动脉血液，离心上清液后检测以上指标水平变化情况。

1.5统计学处理采用SPSS16.0统计软件分析。计量资料以（±s）表示，将调查统计的内容作为变量。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组大鼠肾功能相关指标比较见表1。正常组12 h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC上差异无统计学意义（P＞0.05）；模型组和防己茯苓汤组12h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC指标上两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）；而模型组和防己茯苓汤组在24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC两两比较差异有统计学意义（P＜0.05），而在12 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1　各组大鼠相关指标比较（）

表1　各组大鼠相关指标比较（）

SU（mmol/L）0.535±0.145 0.615±0.151 0.461±0.514 48 h0.502±0.1860.613±0.3160.362±0.1670.317±0.452模型组12 h1.546±0.6743.577±0.8142.714±0.1661.312±0.571（n＝12）24 h21.341±7.35230.356±4.78719.576±5.35612.576±5.244 36 h25.623±4.52732.855±5.14624.186±6.14415.967±6.145 48 h31.477±5.14437.351±4.13428.351±5.14518.394±3.564防己茯苓汤组组别时间正常组12 h（n＝12）24 h 36 h Scr（υmol/L）BUN（mmol/L）UA（υmol/L）0.264±0.2450.425±0.2450.361±0.164 0.314±0.2630.472±0.2740.386±0.145 0.412±0.2160.515±0.1350.413±0.314 12 h1.273±0.2363.153±0.3412.451±0.1421.063±0.437 24 h13.789±4.73621.563±3.13614.234±2.6339.573±3.632（n＝12）36 h11.373±4.18517.258±3.06311.482±1.7945.372±2.512 48 h5.354±3.85810.354±2.9536.172±0.9523.161±1.025 Ccr（mL）0.056±0.145 0.067±0.131 0.071±0.089 0.067±0.078 2.123±0.461 14.258±5.134 17.583±4.145 20.147±5.133 1.946±0.412 10.684±4.134 7.268±3.123 3.894±1.675 NAG（U/L）CysC（mg/L）BQJO（υmol/L）9.12±1.940.53±1.03722.45±83.13 9.24±1.560.56±1.07783.53±86.72 9.16±1.320.51±1.01813.45±89.56 9.21±1.260.55±1.04827.24±78.24 12.45±3.560.89±1.451214.44±98.34 17.45±5.231.01±1.321412.32±101.23 21.33±4.521.22±1.441512.31±113.24 23.57±5.111.53±1.371672.58±132.13 12.53±3.751.10±1.231183.12±87.34 13.56±4.231.26±1.011223.34±91.23 12.12±4.220.97±0.991077.53±63.22 10.56±1.470.68±0.79975.31±54.25

2.2各组大鼠一般情况和生存率比较模型组和防己茯苓汤组大鼠精神萎靡、呼吸急促、寒战、进食饮水减少，腹腔内不同程度积液，盲肠粘连出现部分脓肿，小肠不同程度扩张、水肿和充血。正常组大鼠则无明显炎症改变。在24 h生存率上，正常组为100%（12例），模型组为41.67%（5例），防己茯苓汤组生存率为66.67%（8例）。

3　讨论

急性肾损伤在发病机理上责于肺脾肾三脏，其中以肾为本，以为为标，在治疗上则从肾脏入手。在本次研究中，防己茯苓汤中防己归膀胱、肾、脾经，可利水消肿；茯苓、赤小豆能健脾益胃，利水渗湿，有标本兼顾特点，两者共为主药，黄芪则温阳益气助防己祛在表水气，桂枝则温阳解表协助茯苓化气利水，助黄芪行痹；甘草可培黄芪之阳效果［2］；猪苓、泽泻等能加强化湿效果，牛膝、补骨脂、菟丝子等补肝肾温固下元，益母草等活血祛瘀，全方共奏益气健脾利水、活血、滋阴等效果。从现代药理学上看，防己中含有多种生物碱，具有降压、镇痛解热、抗炎和松弛肌肉等作用［3］；黄芪内含有的多种氨基酸、蛋白质、胆碱等均有增强免疫力作用，且有消除肾炎中尿蛋白，抗衰老、利尿等作用［4］；茯苓中的茯苓多糖等则有利尿作用，桂枝中的桂枝酸等有健脾、解痉、镇痛等作用。研究［5］特别指出黄芪在该药物中作用，主要是促进组织修复，能防止急性肾小管坏死，其通过对实验研究得出防己茯苓汤中黄芪能有效降低血清肌酐和尿素氮水平，能减少肾组织损伤程度，和防己合用能有效预防和治疗急性肾损伤的。另外，茯苓能增强心肌细胞对缺糖缺氧耐受力，从而达到稳定细胞膜，保护线粒体和溶酶体功能，上调细胞内乳酸脱氢酶水平，增加糖元氧酵解有关［6］。

肾功能中，Scr、BUN是肾功能最常用指标，Scr由肾小球滤过排出体外，肾小管对Scr重吸收少，在外源性Scr和肌肉磷酸肌酸自身分解产生Scr和肾脏排泄Scr有关。BUN是人体蛋白质代谢主要终末产物，正常情况下，BUN从肾小球在各段小管均能重吸收［7］。BQJO、NAG、CysC是急性肾损伤早期的主要指标，能反映出肾损伤的严重程度，对预后有一定评价作用。

结果显示，运用防己茯苓汤后患者在肾功能指标Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC上明显改善，且随着时间推移，肾功能逐渐得到好转，运用后大鼠在精神上明显好转，在生存率上有明显好转，达到66.67%。故防己茯苓汤能改善急性肾损伤临床症状，且在肾功能上明显得到改善，这说明该药物能改善急性肾损伤的临床症状，改善肾功能。另外，该药配伍无明显副作用，安全性高，且服用方便，操作简单，可广泛运用在临床上。研究［8-9］称，急性肾损伤中白介素-6（IL-6）是目前肾脏疾病最密切细胞因子之一，其浓度变化幅度和肾组织病理改变一致。TGF-β1和肾脏细胞增殖、肾小球肥大和肾脏细胞外基质蛋白积聚密切相关，也和肾间质纤维化、肾小球滤过屏障损伤有关，是加重尿蛋白关键因子［10-11］。本次未纳入研究，值得日后深入继续探讨。

［1］苏中昊，叶进，张占刚，等.防己茯苓汤对急性肾损伤大鼠肾组织KIM-1和NGAL表达的影响［J］.中医杂志，2014，55（6）：500-503.

［2］赵维，吴广礼，何正佳，等.山莨菪碱对横纹肌溶解致急性肾损伤大鼠肾组织内HO-1表达及肾功能的影响［J］.中国中西医结合肾病杂志，2013，14（1）：17-21.

［3］杨帆，任亮，卓荦，等.细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制［J］.中草药，2012，42（5）：923-928.

［4］曹波，张琳琳，柴春香，等.乌司他丁对脓毒症致大鼠急性肾损伤肾功能及尿相关指标的影响［J］.中国医药科学，2014，1（5）：25-28.

［5］盛梅笑，李惊子，王海燕，等.黄芪当归对急性缺血再灌注大鼠肾损伤的治疗作用［J］.中国中西医结合杂志，2012，21（1）：43-46.

［6］王锋，柴璐，范亚平，等.促红细胞生成素衍生肽对横纹肌溶解大鼠急性肾损伤的肾脏保护作用［J］.实用医学杂志，2013，29（19）：3140-3142.

［7］喻嵘，张晓白，闻晓东，等.防己茯苓汤加减对大鼠肾系膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-2的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2012，12（8）：25-27.

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［10］冯劲立，沈海蓉，李想，等.防己黄芪汤对复合造模肝纤维化小鼠肝线粒体过氧化损伤的影响［J］.中药新药与临床药理，2012，21（5）：506-508.

［11］张常明，范颖，陈晶晶，等.防己黄芪汤对阿霉素肾病模型大鼠肾组织IL-6、TGF-β1的影响［C］.第11次全国中医方剂学术年会论文集，2011，3（5）：99-101.

Experimental Study of the Effect of Fangchi-poria Soup on Renal Function of Rats with Acute Kidney Injury

XU Jinglin，ZHENG Shoutao.
The First People′s Hospital of Taizhou，Zhejiang，Taizhou 318020，China

Objective：To investigate the effect of fangchi-poria soup on renal function of rats with acute kidney injury to provide an effective basis for clinical treatment.Methods：36 mice were randomly divided into three groups：the normal group，the model group，fangchi-poria soup group，12 in each.The control group received normal saline infusion，and the other two groups were made into model.The model group received injection of normal saline in abdomen，while fangchi-poria soup group received injection of fangchi-poria soup in abdomen.The survival rate was observed in general case and 24 h，and the renal function index was observed in 12 h，24 h，36 h and 48 h，such as the change of Scr，BUN，UA，SU，CCr，BQJO，NAG and CysC.Results：As for the 24h survival rate，there were 12 rats surviving with 100%of survival rate in the normal group，the model group 5 with 41.67%，fangchi-poria soup group 8 with 66.67%.In 12 h，24 h，36 h，48 h，there was no obvious change of index，such as Scr，BUN，UA，SU，Ccr，BQJO，NAG and CysC，with no statistical significance before and after treament in the normal group（P＞0.05）；in 24 h，36 h，48 h，there was statistical significance in Scr，BUN，UA，SU，Ccr，BQJO，NAG and CysC in pairwise comparisons in the model group and fangchi-poria soup group（P＜0.05）.In 12 h after treatment，there was no difference in Scr，BUN，UA，SU，Ccr，BQJO，NAG，CysC without statistical significance（P＞0.05）.Conclusion：Fangchi-poria soup plays a role in protecting renal function in acute kidney injury and can be used as a good measures to protect renal function.

Fangchi-poria soup；Acute kidney injury；Rats；Renal function

R285.5

A

1004-745X（2015）12-2090-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.12.007

2015-08-03）

浙江省中医药科学研究基金计划项目（2014ZA122）